使用说明：
1. 标准曲线检测的准备(参考表1)：
    a. 在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。
    b. 每孔再分别加入0、1、2、5、7.5、10微升神经氨酸酶。
    c. 每孔再加入0-20微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。
2. 样品检测的准备(参考表1)：
    a. 在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。
    b. 每孔再加入10微升神经氨酸酶。
    c. 每孔再加入0-10微升待筛选的神经氨酸酶抑制剂样品。
    d. 每孔再加入0-10微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。
3. 检测(参考表1)：
    a. 振动混匀约1分钟。
    b. 37oC孵育2分钟使抑制剂和神经氨酸酶充分相互作用，标准曲线孔也一起孵育。
    c. 每孔加入10微升神经氨酸酶荧光底物。
    d. 再振动混匀约1分钟。
    e. 37℃孵育30分钟后进行荧光测定。激发波长为322nm，发射波长为450nm。
       如果受仪器所限，不能设置前述波长，激发波长在310-335nm，发射波长在430-470nm也有良好
       的检测效果。不同仪器的荧光检测灵敏度有所不同，孵育时间可根据实际的荧光读数进行适当调
       整。当荧光读数偏低时，可以延长孵育时间(例如延长时间至1、2或4小时)，以提高检测灵敏
       度。
       表1.检测体系的设置

4. 计算：
    a. 根据标准曲线可以计算出样品对于神经氨酸酶的抑制百分比。对于检测发现有效的抑制剂，通过
       检测该 抑制剂的剂量效应就可以测定出该抑制剂的IC50。
    b．本试剂盒检测Oseltamivir acid的抑制效果如图1所示，IC50约为200μM。因为Oseltamivir phos
       phate即达菲，需要在体内代谢成Oseltamivir acid才有良好的效果，所以Oseltamivir phosph
       ate和Zanamivir用本试剂盒检测时，IC50都会显著高于200μM。
       注意：神经氨酸酶活性检测体系中的IC50和病毒检测体系中的IC50存在较大差别。Oseltamivir
       acid对于禽流感病毒的IC50根据文献报道在nM级别。因此如果能在神经氨酸酶活性检测体系中
       筛选到IC50比较接近200μM的抑制剂时，就可能有非常重要的意义了。

       图1. 本试剂盒检测Oseltamivir acid的抑制效果。本图仅作参考，不同的样品不同的检测条
       件，实际测定获得结果可能和上图有较明显的差别。

使用本产品的相关论文：
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