酸性磷酸酶检测试剂盒

 产品编号: P0326
 产品包装: 120次
 产品价格: 273.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P0326 酸性磷酸酶检测试剂盒 120次 273.00元

  碧云天生产的酸性磷酸酶检测试剂盒(Acid Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性的试剂盒。
  酸性磷酸酶(Acid Phosphatase),也称酸性磷酸酯酶,是一种在溶酶体中含量较高的酸性水解酶,被认为是鉴定溶酶体亚细胞组分的标志物。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中其分子量从18kD到100kD不等。酸性磷酸酶分为两类,一类为酒石酸盐敏感型,一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型,而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
  血浆中的酸性磷酸酶活性范围在2-7.9U/L,血清中酸性磷酸酶的活性范围在2.5-11.7U/L。精液
(semen)中含有高浓度的酸性磷酸酯酶,活力可以达到87-436KU/L。
  本试剂盒可以检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液或纯化的酶样品等中的酸性磷酸酶活性。
  Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下,呈黄色产物,可以在400-415nm检测吸光度。产物黄色越深,说明酸性磷酸酶检活性越高,反之则酶活性越低。据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
  包括标准品和空白对照,本试剂盒共可进行120个样品的检测。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

P0326-1

检测缓冲液

15ml

P0326-2

显色底物

2管

P0326-3

p-nitrophenol溶液(10mM)

0.1ml

P0326-4

反应终止液

20ml

说明书

1份

保存条件:
    -20℃保存,一年有效。显色底物和p-nitrophenol溶液需避光保存。
注意事项:
  如果希望进行酶活性的绝对定量,进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐采用孵育30分钟等较长的时间,以减小操作过程中的时间误差。同时如果样品中酶活性较高,则可以预先适当稀释样品。
  样品溶液中须避免出现各种酸性磷酸酶抑制剂。
  一管显色底物配制后需当日使用完毕,因此请注意适当多准备一些样品一起检测,以避免试剂盒浪费。
  p-nitrophenol溶液对人体有害,请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性,请小心操作。
  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 试剂准备:将所有试剂取出,恢复至室温使用。
  a. 显色底物溶液:取一管显色底物,溶解于2.5ml的检测缓冲液中,充分溶解和混匀,冰上放置。新
      鲜配制的显色底物溶液需在6小时内使用。
   b. 标准品工作液:取10μl p-nitrophenol溶液(10mM),用检测缓冲液稀释至0.2ml,最终浓度为0.5mM。
2. 样品准备:
  a. 细胞或组织裂解液的准备:采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和细胞,如果有必要需进行适当匀
     浆,随后离心取上清,用于酸性磷酸酯酶的检测。注意:裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以
     -80℃冻存,但需避免反复冻融。
  b. 血浆、血清和尿液的准备:血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,但为了消
     除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。尿液通常也可以直接用于测定。
     上述样品可以-80℃冻存,但需避免反复冻融。
  c. 样品的稀释:如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,也可
     以采用试剂盒中的检测缓冲液进行稀释。如果使用试剂盒中提供的检测缓冲液进行稀释,需注意保留
     足够的检测缓冲液用于试剂盒的检测过程。
3. 参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和40
   微升,样品通常可以直接加40微升。如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀
   释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔或三复孔。

 

空白对照(Blank)

标准品(Standard)

样品(Sample)

检测缓冲液

40μl (80-x)μl (40-y) μl

显色底物

40μl 40μl

样品

yμl

标准品工作液

xμl

4. 用枪头轻轻吹打混匀,也可借助摇床进行混匀。
5. 37℃孵育5-10分钟。(说明:待测样品中酸性磷酸酶活性较低时,可适当延长孵育时间至30分钟)
6. 每孔加入160μl反应终止液终止反应。此时,标准品或有酸性磷酸酯酶活性的孔会呈现不同深浅的黄色。
7. 在405nm测定吸光度。如果不能测定405nm,也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即
   测定,可以在数小时内完成测定,所显现的黄色在数小时内稳定。
8. 酸性磷酸酶活性单位的定义:在pH4.8,37℃条件下,每分钟水解para-nitrophenyl phosphate显色
   底物产生1微摩尔p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定义为一个酶活力单位。
9. 根据酶活性定义,计算出样品中的酸性磷酸酯酶活性。

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