碧云天生产的CellTiter-Lumi™ Plus II发光法细胞活力检测试剂盒(CellTiter-Lumi™ Plus II Luminescent Cell Viability Assay Kit)，简称CTL Plus II发光法细胞活力检测试剂盒或CTL Plus II，是一种通过化学发光法测定细胞内ATP含量从而用于超高灵敏度、超宽线性范围定量检测活细胞数目的试剂盒。本试剂盒的性能达到甚至在有些方面优于国外同类产品。

本产品是CellTiter-Lumi™ Plus发光法细胞活力检测试剂盒(简称CTL Plus，产品编号为C0068)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。CTL Plus为即用型液体，优点是无需配制即可以直接使用，缺点是长期保存需要置于-80℃，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降；本产品，即CTL Plus II，为CTL Plus的冻干粉版本，使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用，优点是在-20℃保存特别稳定。

本产品线性范围宽，96孔板中在12个至10万个细胞范围内有良好线性关系。不同细胞的检测数量上限会有显著不同。如果检测的细胞数量不超过3万，也可使用性价比更高但线性范围略窄的CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒(C0065)。

本产品的性能达到甚至在有些方面优于国外同类产品。本产品的性能和用途与Promega公司的CellTiter-Glo^® Luminescent Cell Viability Assay(简称CellTiter-Glo^®或CTG)和CellTiter-Glo^® 2.0 Assay(简称CellTiter-Glo^®2.0或CTG2.0)基本相同。本产品的检测效果及与国外同类产品Competitor P及Competitor P2.0的检测效果比较参见图1，在发光强度和对于某些细胞的线性范围有显著的优势。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，本产品的发光效果比国外同类产品Competitor P或Competitor P2.0强约40-100%，实测效果的差异会因细胞种类的不同有所不同，例如对于NIH3T3和HeLa细胞的检测，CTL Plus的发光效果比国外同类产品Competitor P或Competitor P2.0强约60-100%；而对于Jurkat细胞的检测，CTL Plus的发光效果则比国外同类产品Competitor P或Competitor P2.0强约40-50% (图1D)。

本产品检测灵敏度高，线性范围宽，可以在12个至10万个细胞范围内呈现良好的线性关系。使用本产品检测细胞数量仅为25个/孔时，发光强度可达空白孔的2倍左右。对于某些细胞，例如HeLa细胞等，CTL Plus有非常完美的线性范围，标准曲线的斜率在12-400个细胞和在12-100,000个细胞范围内基本相同(图1A、1B，斜率分别为43.434和43.890)，但国外同类产品Competitor P标准曲线的斜率在12-400个细胞和在12-100,000个细胞范围内发生了非常显著变化(图1A、1B，斜率分别为29.493和20.765)。本产品与国外同类产品Competitor P、Competitor P2.0的检测效果比较参见图1。

图1. 本产品CellTiter-Lumi™Plus II Luminescent Cell Viability Assay Kit (CTL Plus II)和国外同类竞争产品Competitor P、Competitor P2.0对不同细胞的检测效果。CTL Plus II与碧云天生产的CellTiter-Lumi™ Plus发光法细胞活力检测试剂盒(CTL)的检测效果完全一致。图A-C为CTL Plus即CTL Plus II和Competitor P对不同数量HeLa细胞在白色96孔板中的检测效果，图D为CTL Plus即CTL Plus II、Competitor P和Competitor P2.0对10万个/孔NIH3T3、HeLa和Jurkat细胞在白色96孔板中的检测效果。实际读数会因细胞种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，完成检测仅需约10分钟。本产品比常见的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它细胞活力测定方法更加简单快捷。只需用试剂盒提供的检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂后，与培养细胞等体积混合，反应10分钟后即可进行化学发光检测。无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液。并且化学发光非常稳定，在反应开始后的10分钟内无显著变化，30分钟内的下降不超过10%。

本产品稳定性好。本产品在-20℃可以长期保存，配制成CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂后的稳定性也非常好，反复冻融5次对检测效果基本无影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂在4℃保存3天对检测效果无显著影响，保存7天检测效果下降不超过10%。在室温保存1天，仍可保留80%以上的检测效果。在37℃保存1天，可保持60%以上的检测效果。CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测，也非常适合大量样品的高通量筛选(high-throughput screening)检测。

ATP，作为最重要的能量分子，在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP是细胞新陈代谢的一个重要指标，也是具有代谢活性细胞的重要标志性分子，并和活细胞数目成良好的线性关系。因此，ATP含量能很好地反应活细胞的数目，即本试剂盒可以通过测定ATP含量来进行细胞计数或检测细胞活力。

本试剂盒通过ATP检测细胞活力的原理参见图2。借助ATP依赖的萤光素酶催化的萤光素发光反应，ATP可以通过测定化学发光来进行定量。由于ATP含量能很好地反映活细胞的数目，而ATP含量和发光强度成正比，这样就可以简单地通过化学发光强度来计算出细胞活力或细胞数目。

图2. 碧云天CellTiter-Lumi™ Plus II发光法细胞活力检测试剂盒(CTL Plus II)检测ATP的原理图。

碧云天的CellTiter-Lumi™系列产品的主要特点和差异请参考下表。对于待检测的细胞量可能超过3万时，推荐选购Plus系列；对于检测数据的稳定性要求特别高时，推荐选购Steady系列产品；对于希望在-20℃长期稳定保存CTL系列产品的情况，推荐选购II系列的冻干粉包装。

碧云天各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考http://www.beyotime.com/support/cell-proliferation.htm。

对于96孔板，推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂，总体积为200μl，此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板，推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂，总体积为50μl，此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测，但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然有数据显示适当减少检测试剂的用量也很可能会得到较好的结果，但对于细胞数量偏多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况，建议按照推荐用量进行检测。

-20℃避光保存，至少两年有效。 检测缓冲液和检测底物混合后配制成的CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂， -20℃避光保存，至少一年有效；-80℃避光保存，至少两年有效。

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购本产品CellTiter-Lumi™ Plus II；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的CellTiter-Lumi™ Plus发光法细胞活力检测试剂盒(C0068)。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。

本试剂盒的检测缓冲液和检测底物混合后配制成的CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试CellTiter-Lumi™ Plus II发光法检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，为保证检测试剂的的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会影响后续的检测效果。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试，最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。

使用说明中提供了检测ATP标准品的方法，实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。