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Caspase 1 活性检测试剂盒
产品编号: C1101
产品包装: 20次
产品价格: 552.00元
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C1101 Caspase 1 活性检测试剂盒 20次 552.00元

Caspase 1 活性检测试剂盒(Caspase 1 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 1酶活性或纯化的caspase 1酶活性的试剂盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也称interkeukin 1b conberting enzyme(ICE),有时被写作caspase-1或caspase 1,是caspase家族中唯一可以剪切IL-1b前体蛋白或IL-18前体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前体蛋白,产生20kD和10kD的片段,这两个片段可以形成异源二聚体(heterodimer),并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。Caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL来调节细胞凋亡,并通过其对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。
本caspase 1活性检测试剂盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。pNA在405nm附近有强吸收。
试剂盒中提供了caspase 1催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 1酶活性的标准品。
本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
C1101-1 裂解液 8ml
C1101-2 检测缓冲液 8ml
C1101-3 Ac-YVAD-pNA(2mM) 200μl
C1101-4 pNA(10mM) 200μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,Ac-YVAD-pNA和pNA需避光保存。
注意事项:
须自备可以测定A405或A400的酶标仪或容量不超过100μl的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定A405,如有困难可以测定A400。
Ac-YVAD-pNA需尽量避免反复冻融,请注意适当分装。
测定蛋白浓度需Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006),可向碧云天订购。建议样品用水稀释1倍后再用Bradford法测定蛋白浓度,以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。
pNA(中文名为4-硝基苯胺)对人体有毒,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。pNA(10mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
本试剂盒的裂解液可以和碧云天生产的其它caspase活性检测试剂盒的裂解液通用,即本试剂盒裂解液制备的蛋白样品可以用于碧云天其它caspase活性检测试剂盒的检测。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1.准备工作:
  a.裂解液溶解后混匀并置于冰浴上备用。
  b.检测缓冲液溶解后混匀并置于冰浴上备用。
2.测定pNA标准曲线: 
  a.标准品稀释液的配制:按照每0.9ml检测缓冲液加入0.1ml裂解液的比例配制适量的标准品稀释液。
  b.把试剂盒提供的pNA (10mM)用标准品稀释液稀释为0、10、20、50、100和200μM,作为标准品。
  c.每个浓度取100μl用酶标仪进行检测,或取适当量用容量不超过100μl的分光光度检测杯进行检测,测定A405。
  d.每一个标准品的A405减去不含pNA的空白对照的A405计算出实际的因pNA而导致的吸光度,并制作出pNA浓度相对于A405的标准曲线。pNA标准曲线可以参考图1,在0-200μM范围内存在良好的线性关系。


图1.pNA标准曲线。实测数据可能因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

3.样品的收集:
  a.对于悬浮细胞:把没有诱导凋亡的对照样品和诱导凋亡的样品,600g 4℃离心5分钟收集细胞,小心吸除上清,同时确保尽量没有细胞被吸除,PBS洗涤一次。同前吸尽上清后,按照每200万细胞加入100微升裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分,可以把裂解液的用量提高至150或200微升),重悬沉淀,冰浴裂解15分钟。下转步骤3d。
  b.对于贴壁细胞:吸取细胞培养液,备用。用胰酶消化贴壁细胞,并收集至备用的细胞培养液中。600g 4℃离心5分钟收集细胞,小心吸除上清,同时确保尽量没有细胞被吸除,PBS洗涤一次。同前吸尽上清后,按照每200万细胞加入100微升裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分,可以把裂解液的用量提高至150或200微升),重悬沉淀,冰浴裂解15分钟。下转步骤3d。
  c.对于组织样品:按照每3-10mg组织加入100微升裂解液的比例加入裂解液,在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1.5ml离心管中,冰浴再裂解5分钟。
  d.4℃ 16,000-20,000g离心10-15分钟。
  e.把上清转移到冰浴预冷的离心管中。
  f.立即测定caspase 1的酶活性或-70℃保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml,相当于每10微升待测样品中至少含有10-30μg蛋白。如果细胞较小,可以适当增加细胞的用量。
4.Caspase 1酶活性的检测:
  a.取出适量的Ac-YVAD-pNA(2mM),置于冰浴上备用。
  b.如下设置反应体系:

  空白对照 样品
检测缓冲液 40μl 40μl
待测样品 0μl 50μl
裂解液 50μl 0μl
Ac-YVAD-pNA(2mM) 10μl 10μl
总体积 100μl 100μl

注意:在设置反应体系时先加检测缓冲液,再加待测样品,适当混匀,注意避免在混匀时产生气泡。随后再加入10μl Ac-YVAD-pNA(2mM)。
 c.加入Ac-YVAD-pNA(2mM)后混匀,注意避免在混匀时产生气泡。37℃孵育60-120分钟。发现颜色变化比较明显时即可测定A405。如果颜色变化不明显,可以适当延长孵育时间,甚至可以孵育过夜。
 d.样品的A405扣除空白对照的A405,即为样品中caspase 1催化产生的pNA产生的吸光度。通过同步骤1中获得的标准曲线的对比就可以计算出样品中催化产生了多少量的pNA。
 e.参考Chemicon公司的caspase 1酶活力单位的定义:One unit is the amount of enzyme that  will cleave 1.0nmol of the colorimetric substrate Ac-YVAD-pNA per hour at 37℃ under saturated substrate concentrations。即一个酶活力单位定义为当底物饱和时,在37℃一个小时内可以剪切1nmol Ac-YVAD-pNA产生1nmol pNA的caspase 1的酶量。这样就可以计算出样品中含有多少个酶活力单位的caspase 1。说明:在本试剂盒的检测体系中,底物的起始浓度为0.2mM,
此时底物是饱和的,对于许多样品而言在37℃孵育2个小时以内底物都是饱和的;对于样品中caspase 1酶活力特别高的情况,须用裂解液适当稀释样品后再进行测定。
 f.用Bradford法检测待测样品中的蛋白浓度(由于裂解液中含有较高浓度的DTT,不适合采用BCA法进行蛋白浓度测定)。这样就可以计算出一个样品单位重量蛋白中所含的caspase 1的酶活力单位。
常见问题: 
1.测定出的A405过低: 
  A.样品中蛋白含量太低,裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度至少达到1-3mg/ml。 
  B.样品中激活的caspase水平很低。首先确认凋亡现象是否明显,如果凋亡比较明显并且确认该caspase是可以被激活的,可以适当调节诱导细胞凋亡的时间,希望能找到一个caspase激活比较强的时间点,这样就可以检测出该caspase的激活。可以作一时间曲线,例如诱导凋亡0、2、4、8、16和24小时,或0、1、2、4、8和16小时,或0、1、2、4、6和8小时等。具体的诱导凋亡时间需根据具体情况而定。 
2.测定出的A405过高或者样品量不足: 
   测定出来的A405读数过高时,可以参考下表的反应体系适当减少样品的用量;样品量不足时也可以参考下表减少样品的用量。

  空白对照 样品
检测缓冲液 40μl 40μl
待测样品 0μl xμl
裂解液 50μl (50-x)μl
Ac-YVAD-pNA(2mM) 10μl 10μl
总体积 100μl 100μl

    说明:其中x不超过50,其余检测方法同上面的使用说明所述。

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C1158 Caspase 9 活性检测试剂盒 100次
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使用本产品的文献:
1. Li P, Yin Y, Yu Q, Yang Q.
BIOCHEM BIOPH RES CO . 2011 May 27;409(1):142-7. (IF 2.705)
2. Zhang C, Li C, Jia S, Yao P, Yang Q, Zhang Y.
Scand J Immunol . 2014 May;79(5):333-7. (IF 2.563)
3. Luo B, Li B, Wang W, Liu X, Xia Y, Zhang C, Zhang M, Zhang Y, An F.
PLoS One . 2014 Aug 19;9(8):e104771. (IF 2.776)
5. Wang L, Chen K, Wan X, Wang F, Guo Z, Mo Z.
BIOCHEM BIOPH RES CO . 2017 Mar 18;484(4):871-877. (IF 2.705)
6. Qiu Z, Lei S, Zhao B, Wu Y, Su W, Liu M, Meng Q, Zhou B, Leng Y, Xia ZY.
Oxid Med Cell Longev . 2017;2017:9743280. (IF 4.868)
7. Jin Q,Li R,Hu N,Xin T,Zhu P,Hu S,Ma S,Zhu H,Ren J,Zhou H.
Redox Biol . 2018 Apr;14:576-587. (IF 7.793)
8. Zhai Y,Meng X,Ye T,Xie W,Sun G,Sun X.
Molecules . 2018 Feb 27;23(3). pii: E522. (IF 3.06)
9. Fan S,Yuan J,Deng S,Chen Y,Xie B,Wu K,Zhu M,Xu H,Huang Y,Yang J,Zhang Y,Chen J,Zhao M.
FRONT CELL INFECT MI . 2018 Jul 2;8:225. (IF 3.518)
10. Wu D,Han R,Deng S,Liu T,Zhang T,Xie H,Xu Y.
INT J RADIAT ONCOL . 2018 May 1;101(1):107-117. (IF 6.203)
11. Zhang X,Luan J,Chen W,Fan J,Nan Y,Wang Y,Liang Y,Meng G,Ju D.
Nanoscale . 2018 May 17;10(19):9141-9152. (IF 6.97)
12. Yuan J,Zhu M,Deng S,Fan S,Xu H,Liao J,Li P,Zheng J,Zhao M,Chen J.
Virus Res . 2018 May 2;250:37-42. (IF 2.736)
13. Li J,Zhou Y,Liu Y,Dai B,Zhang YH,Zhang PF,Shi XL
Cancer Biol Ther . 2018 Oct 2:1-8. (IF 2.879)
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