使用说明：
1. 染色液的配制：
按照6孔板每孔1ml脂滴染色液的体系，参考下表配制适量的染色液，并充分混匀。

Reagent	1 Sample	10 Samples	100 Samples
BODIPY 493/503 (1000X)	1μl	10μl	100μl
Hoechst 33342 (1000X)	1μl	10μl	100μl
Assay Buffer	998μl	9.98ml	99.8ml
Staining Solution	1ml	10ml	100ml

注：配制好的Staining Solution必须一次使用完毕，不建议冻存或4ºC保存后继续使用。染色液中BODIPY 493/503的浓度可以根据染色效果在0.2X-2X之间适当调整。
2. 荧光显微镜检测：
a. 接种培养。将细胞接种于6孔板等多孔板、细胞培养皿或者细胞爬片上。如有必要，按实验设计对细胞进行一定处理。
b. 固定(选做)。
(a) 取出待检测的细胞，使用PBS洗涤两遍，吸除PBS。
(b) 加入4%多聚甲醛固定液(P0099)室温固定10-15分钟。
注1：BODIPY 493/503和Hoechst 33342都适用于活细胞染色，也适用于固定后细胞的染色[3]。
注2：由于醇类能够溶解脂质，因此请使用醛类固定液进行固定。
注3：如果需要进行免疫染色而进行细胞通透，须避免使用含Triton X-100或Tween-20等去垢剂的通透液，而使用不会溶解细胞膜的去垢剂如含Saponin (P0095)或Digitonin (ST1272)的通透液，但仍然可能会一定程度的影响脂滴的形态。
c. 染色。
(a) 取出待检测的细胞，PBS洗涤1-2遍。
(b) 吸除PBS，加入适当体积的Staining Solution，通常96孔板每孔加入100μl，24孔板每孔加入250μl，12孔板每孔加入 500μl，6孔板每孔加入1ml。室温下避光孵育10-20分钟。
(c) PBS洗涤两遍。
d. 检测。使用荧光显微镜观察时选择使用488nm左右激发，观察绿色荧光。
注：使用荧光显微镜拍照时，为了减少荧光淬灭，尽可能降低荧光显微镜的激发光强度，缩短拍照时间。
3. 流式细胞仪检测：
a. 细胞准备。
(a) 贴壁细胞胰酶消化后用培养液重悬，并用PBS洗涤一次；悬浮细胞250-1000×g室温离心5分钟，弃上清，用PBS 洗涤一次。每个样品推荐的细胞用量为10⁶个细胞。
(b) 400×g室温离心5分钟，弃上清。
b. 固定(选做)。
(a) 加入4%多聚甲醛固定液(P0099)，轻轻吹打重悬为单细胞悬液，室温固定10-15分钟。
(b) 固定结束后，400×g室温离心5分钟，弃上清。
(c) 加入0.5ml PBS后缓慢用移液器吹打洗涤，然后400×g室温离心5分钟，弃上清。
注1：BODIPY 493/503和Hoechst 33342都适用于活细胞染色，也适用于固定后细胞的染色[3]。
注2：由于醇类能够溶解脂质，因此请使用醛类固定液进行固定。
注3：如果需要进行免疫染色而进行细胞通透，须避免使用含Triton X-100或Tween-20等去垢剂的通透液，而使用不会溶解细胞膜的去垢剂如含Saponin (P0095)或Digitonin (ST1272)的通透液，但仍然可能会一定程度的影响脂滴的形态。
c. 染色。
(a) 对于上一步骤的细胞沉淀，除背景对照管外，其余每管加入0.5ml Staining Solution，轻柔并充分重悬细胞，室温避光孵育10-15分钟。
(b) 400×g室温离心5分钟，弃上清。
(c) 每孔加入0.5ml PBS后缓慢用移液器吹打洗涤，然后400×g室温离心5分钟，弃上清。
(d) 每孔加入0.5ml PBS重悬细胞。
d. 检测。检测时参考其光谱特征选择合适的检测条件，例如Ex/Em=488/510nm。
注1：使用仅含Assay Buffer并且未经染色的细胞样品用于流式细胞仪的阴性对照设置。
注2：由于流式检测比较灵敏，使用的荧光探针浓度可能要比荧光显微镜检测时要低，此时可根据细胞类型和实际染色 情况对BODIPY 493/503的稀释倍数进行适当调整。
4. 荧光酶标仪检测：
a. 接种培养。将细胞接种于96孔板黑色多孔板中，如BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)，每孔的细胞数需要控制在100-10,000个，通常宜在2000-5000个范围内。按实验设计对细胞进行一定处理。
b. 固定(选做)。
(a) 取出待检测的细胞，使用PBS洗涤两遍，吸除PBS。
(b) 加入4%多聚甲醛固定液(P0099)室温固定10-15分钟。
注1：BODIPY 493/503和Hoechst 33342都适用于活细胞染色，也适用于固定后细胞的染色[3]。
注2：由于醇类能够溶解脂质，因此请使用醛类固定液进行固定。
注3：如果需要进行免疫染色而进行细胞通透，须避免使用含Triton X-100或Tween-20等去垢剂的通透液，而使用不会溶解细胞膜的去垢剂如含Saponin (P0095)或Digitonin (ST1272)的通透液，但仍然可能会一定程度的影响脂滴的形态。
c. 染色。
(a) 取出待检测的细胞，使用PBS洗涤1-2遍。
(b) 吸除PBS，加入适当体积的Staining Solution，通常96孔板每孔加入100μl。室温下避光孵育10-20分钟。
(c) PBS洗涤两遍。
d. 检测。参考其光谱特征，选取合适的波长进行读板，例如Ex/Em=488/510nm。具体根据酶标仪的特点选择，也不一定需要选用最大激发光/发射光波长来检测。
5. 阳性对照的诱导方法：油酸(ST2053)可以诱导培养细胞内脂滴生成，从而可以作为阳性对照。诱导培养细胞内形成脂滴的具体方法如下。
a. 37ºC条件下加热油酸，使其完全成为液体。
b. 取48μl的油酸，加入到952μl的DMSO中，充分混匀，配制成150mM的油酸贮存液。贮存液可以保存在4ºC，使用时37ºC条件下加热混匀后即可使用。
c. 细胞诱导前，配制含油酸的完全培养液。使用细胞的完全培养液按500：1稀释油酸贮存液，使油酸终浓度为300μM。
注：油酸具有一定的细胞毒性，因细胞而异，可以根据不同细胞状况调整油酸的使用终浓度。
d. 待检测的细胞加入含油酸的完全培养液，37ºC培养过夜。一般情况下，次日可以观察到囊泡状的脂滴。
参考文献：
1. Olzmann JA, Carvalho P. Nat Rev Mol Cell Biol. 2019. 20(3):137-155.
2. Thiam AR, Farese RV Jr, Walther TC. Nat Rev Mol Cell Biol. 2013. 14(12):775-86.
3. Listenberger LL, Brown DA. Curr Protoc Cell Biol. 2007. Chapter 24:Unit 24.2.
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