使用说明：
1. 准备工作：
a. 将磁珠溶液从4℃冰箱取出，适当漩涡震荡或充分颠倒以保证磁珠充分混匀，然后取出所需的量，使其平衡至室温。
b. 新鲜配制80% (v/v)乙醇溶液。例如分别量取8ml无水乙醇和2ml超纯水或双蒸水，混匀后即得约10ml 80% (v/v)乙醇溶液。注：因为乙醇和水混合后体积会发生改变，所以请勿量取8ml乙醇，加超纯水或双蒸水定容至10ml。
2. DNA单侧长度分选(Single-sided size selection)。
单侧长度分选法主要用于去除短片段DNA，特别是100bp或200bp以下的DNA片段，如引物或接头二聚体等，以及去除酶、dNTP和盐溶液等。一般来说，磁珠用量体积比越高，短片段DNA与磁珠的结合率越高，因此可以通过调整磁珠用量，可以去除不同长度范围的短片段DNA。

Size-selection of DNA	Bead Volumes
≥1000bp	0.6X
≥300bp	1.0X
≥200bp	1.2-1.5X
≥100bp	2.0-3.0X

注1：此磁珠用量为参考用量，也可参考已使用的方法并根据实际测试结果进行适当的调整。表中“X”表示DNA样品体积。例如：DNA样品体积为100μl，如果需要纯化≥1000bp的DNA片段，则磁珠用量为0.6X = 0.6×100μl = 60μl。
注2：此处的长度范围是指大部分DNA片段范围，仍然可能含有少量低于该长度的短片段。
a. 轻柔涡旋震荡或上下颠倒以保证磁珠充分混匀，参考上表在DNA样品溶液中加入相应体积磁珠。
b. 轻柔涡旋震荡或移液器吹打10次混匀，室温孵育5分钟。
c. 将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离2分钟，待溶液澄清后，小心移除上清。
d. 保持离心管始终处于磁力架中，加入200μl新鲜配制的80% (v/v)乙醇溶液漂洗磁珠，室温孵育30秒，小心移除上清。
e. 重复步骤d一次。
f. 保持离心管始终处于磁力架中，打开离心管盖，室温干燥至磁珠刚刚出现龟裂(约5-10分钟)。
g. 将离心管从磁力架中取出，加入适量超纯水或双蒸水(≥20μl)，漩涡振荡或使用移液器轻轻吹打以充分混匀。
h. 室温孵育5分钟。
i. 将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离5分钟，待溶液澄清后，小心吸取上清至洁净的离心管中，即完成DNA片段的纯化。使用本产品进行DNA片段的纯化效果参考图2。
图2. 碧云天BeyoMag™ II DNA长度分选磁珠 (D0039)用于DNA片段纯化(单侧长度分选法)的效果图。100μl的样品(含总量为2μg的DNA，大小为100-10,000bp)，分别加入0.6X-3X体积的分选磁珠，进行DNA片段纯化。20μl纯化产物加入4μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
3. DNA双侧长度分选(Double-sided size selection)。
二代测序的DNA文库一般要求长度在300-500bp之间，所以需要去除大片段DNA和非常小的DNA片段，此时可以通过双侧长度分选(双轮分选法)对DNA片段进行分选。通常第一轮分选的目的是去除大片段DNA，所以也被称为右侧清除(Right-side clean-up)；第二轮分选的目的是去除小片段DNA，所以也被称为左侧清除(Left-side clean-up)。通过两轮分选，可以把DNA片段控制在适当的长度范围内。下表为DNA长度分选的参考条件。

Size-selection of DNA	200-300bp	300-400bp	400-500bp	500-600bp	600-1000bp
Bead Volumes for Round 1	1.0X	0.9X	0.7X	0.65X	0.6X
Bead Volumes for Round 2	(0.15~0.3)Y	(0.05~0.2)Y

注：此磁珠用量为参考用量，推荐参考已使用的方法并根据实际测试结果进行适当的调整，特别是第二轮的磁珠用量。表中“X”表示DNA样品体积，“Y”表示DNA样品体积和第一轮磁珠用量之和。例如：DNA样品体积为100μl，如果需要分选200-300bp的DNA片段，则第一轮磁珠用量为1.0X=1.0×100μl=100μl，第二轮磁珠用量V2为(0.15~0.3)Y= (0.15~0.3)×(100μl+100μl)=30~60μl；
a. 轻柔涡旋震荡或上下颠倒以保证磁珠充分混匀，参考上表在DNA样品溶液中加入第一轮磁珠用量(Bead Volumes for Round 1)。
b. 轻柔涡旋震荡或移液器吹打10次混匀，室温孵育5分钟。
c. 将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离2分钟，待溶液澄清后，小心转移上清到新的离心管中。
注：转移上清时，切勿将上清全部吸出，请残留2μl于管底，避免吸到磁珠从而影响DNA长度分选效果。
d. 参考上表向上清中加入第二轮磁珠用量(Bead Volumes for Round 2)。
e. 轻柔涡旋震荡或移液器吹打10次混匀，室温孵育5分钟。
f. 将离心管短暂低速离心后置于磁力架中分离5分钟，待溶液澄清后，小心移除上清。
g. 保持离心管始终处于磁力架中，加入200μl新鲜配制的80% (v/v)乙醇溶液漂洗磁珠，室温孵育30秒，小心移除上清。
h. 重复步骤g一次。
i. 保持离心管始终处于磁力架中，打开离心管盖，室温干燥至磁珠刚刚出现龟裂(约5-10分钟)。
j. 将离心管从磁力架中取出，加入适量超纯水或双蒸水(≥20μl)，轻柔涡旋震荡或使用移液器轻轻吹打以充分混匀。
k. 室温孵育5分钟。
l. 将离心管短暂离心后置于磁力架中分离5分钟，待溶液澄清后，小心吸取上清至洁净的离心管中，即完成双侧法DNA长度分选。可取少量分选后的样品电泳检测DNA片段长度，然后-20℃保存。使用本产品进行DNA分选的效果参考图3。
图3. 碧云天的BeyoMag™ II DNA长度分选磁珠(D0039)用于DNA长度分选(双侧分选法)的效果图。100μl的样品(含总量为1μg的DNA，大小为100-10,000bp)，按照上表加入分选磁珠，进行双侧法DNA分选。20μl分选产物加入4μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071)，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测。实际效果会因样品种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
参考文献：
1. Ivo Nikolaev Sirakov. From Basic Aspects to Laboratory Tools, IntechOpen. 2016. Chapter 1.
2. Hawkins T L, O'Connor-Morin T, Roy A, Santillan C. Nucleic Acids Res. 1994. 22(21):4543-4.
3. Quail M A, Gu Y, Swerdlow H, Mayho M. Electrophoresis. 2012. 33(23):3521-3528.

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产品编号	产品名称	包装
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