中文 | English
订货电话
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
工作日9:00-17:00
订货邮件
order@beyotime.com
订货QQ
4001683301
微信在线咨询
订单下载
碧云天订单.xls
核酸相关> DNA提取与纯化> DNA纯化胶回收
PAGE胶DNA回收试剂盒
产品编号: D0059S
产品包装:50次
选择包装
价格: ¥ 278.00
产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D0059S PAGE胶DNA回收试剂盒 50次 278.00元

碧云天生产的PAGE胶DNA回收试剂盒(DNA PAGE Gel Extraction Kit, or DNA Polyacrylamide Gel Extraction Kit),是一种基于乙醇沉淀法从聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)中简单便捷、稳定、高效、高质量地回收DNA片段的试剂盒。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)常用于小于1kb的DNA片段的分析和分离纯化。PAGE胶DNA电泳的最高分辨率可达1bp,因而广泛应用于寡核苷酸分离纯化,特别是引物的分离纯化,又称PAGE纯化。PAGE纯化也常用于高通量测序时PCR扩增产物的纯化。

本试剂盒可用于10~500bp的双链DNA (dsDNA)或10-500nt单链DNA (ssDNA)从变性或非变性PAGE胶中的回收和纯化。DNA片段大小会对回收效率产生影响,片段过大或过小,回收效率都会有所降低,DNA片段大小为20-100bp时,回收效率通常可以达到50%以上。

本试剂盒回收得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序、PCR、杂交等后续实验。

本试剂盒回收DNA的操作流程如图1所示。含有目标DNA的PAGE胶经研磨、水浴浸泡渗透至扩散液、高速离心取上清、经核酸沉淀、洗涤、晾干、溶解沉淀等一系列步骤,最终得到高纯度的DNA片段回收产物[1]。

图1. PAGE胶DNA回收试剂盒(D0059S)操作流程示意图。

本试剂盒的一个包装可用于50个DNA样品的PAGE胶回收和纯化。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0059S-1 溶液I (扩散液) 32ml
D0059S-2 溶液II (沉淀缓冲液) 5ml
D0059S-3 溶液III (洗涤液) 50ml
D0059S-4 溶液IV (溶解液) 5ml
D0059S-5 塑料研磨杵 10个
说明书 1份
保存条件:

室温保存,一年有效。

注意事项:

如果希望获得更高的回收效率,尽可能多地切除不含目标DNA的PAGE胶。

用研磨杵尽可能地把胶条磨碎,以促进后续DNA扩散、渗透至溶液中,最终提高回收效率。

试剂盒中的研磨杵需要重复使用。首次使用后,推荐清洗后使用RNase and DNase Away处理以确保去除核酸酶,然后再用蒸馏水冲洗后备用。如果希望一次性使用研磨杵,可以向碧云天订购TissueMaster™一次性塑料研磨杵(E6606)

溶液III (洗涤液)中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. DNA变性/非变性PAGE电泳与切胶。
a. 根据所需分离纯化的DNA片段大小配制相应浓度PAGE胶,以达到最佳的有效分离效果,相关参数如下表所示。
PAGE (%) Size (bp) Xylene Cyanol FF Bromophenol blue
3.5 100-2000 460 100
5.0 80-500 260 65
8.0 60-400 160 45
12.0 40-200 70 20
15.0 25-150 60 15
20.0 6-100 45 12
b. 在DNA样品中按比例加入DNA上样缓冲液,混匀后上样。
注意:变性PAGE凝胶上样前请反复吹打上样孔,将沉淀的尿素吹出上样孔,以获得更好的电泳效果。
c. 接通电源,电泳至所需位置。
d. 取出PAGE胶,放置到含有NA-Red (D0128/D0130)等核酸染料的无DNA酶的水中,在侧摆摇床上缓慢摇动5-10分钟。
e. 使用一次性手术刀片将含目的DNA片段的PAGE胶切下,请确保切下的PAGE胶尽可能小并免受其它DNA片段的污染。
2. 凝胶研磨。
用本试剂盒提供的研磨杵在离心管内把PAGE胶研磨至细粉末状。
3. DNA扩散。
a. 加入300µl溶液I至PAGE胶粉末中,适当混匀。
b. 55℃水浴60-90min,以促进胶中DNA扩散到溶液中。
说明:对于较大片段的目的DNA来说,可适当延长扩散时间,甚至37℃过夜,以提高回收效率。孵育过程中可以适当混匀几次,促进DNA的扩散。如果能使用带有震荡或摇动功能的恒温孵育装置效果更佳。
c. 13,000g离心5分钟。
d. 小心吸取上清到新的离心管中,尽量避免吸取到凝胶。
e. 再次加入300µl溶液I至凝胶粉末中,55℃水浴30-60min,适当混匀。
说明:累计两次的扩散时间通常约2小时或以上就能获得较好的回收效果。扩散更长时间仅对长度明显偏长的DNA片段的回收效率提高有帮助。
f. 13,000g离心5分钟。将上清液再次转移至步骤3d相同的上清液收集管中。
4. 核酸沉淀。
a. 向上清液中加入1/10体积的溶液II,再加入2.5倍体积无水乙醇,混匀。
说明:如果待回收的DNA量较少时,为提高回收效率,推荐选购碧云天的Glycogen (核酸沉淀用) (D0812),每次加入1-3µl,可以大大提高DNA沉淀效率。
b. -20℃或-80℃孵育30分钟。
说明:低温孵育有助于小片段核酸的充分沉淀,温度越低,孵育时间越长,沉淀效率越高。
c. 4℃,13,000g离心10分钟
5. 洗涤。
a. 小心去除上清,加入500µl溶液III,轻轻混匀。
说明:去除上清时需要尽量小心,以避免沉淀的丢失。
b. 4℃,13,000g离心5-10分钟
c. 如有必要,重复步骤5a和5b一次。如果不希望洗涤2次,DNA乙醇沉淀后,一定要充分吸除上清,并且第一次洗涤后也需要充分吸除上清。
6. 晾干与溶解。
a. 小心吸净残留液体,室温晾干。
说明:吸净残留液体的情况下,通常1分钟内就会晾干。适当干燥即可,过度干燥会导致后续溶解速度非常缓慢。
b. 加入30-50µl溶液IV溶解沉淀,即为纯化回收的DNA片段溶液。
参考文献:
1. Lopez-Gomollon S and Nicolas FE. Methods Enzymol. 2013. 529:65-83.
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
E6606-20pcs TissueMaster™一次性塑料研磨杵 20支/袋
E6606-100pcs TissueMaster™一次性塑料研磨杵 100支/袋
D0043S BeyoMag™磁珠法DNA凝胶回收试剂盒 50次
D0043M BeyoMag™磁珠法DNA凝胶回收试剂盒 200次
D0056 DNA凝胶回收试剂盒 50次
D0058S 柱式PAGE胶DNA回收试剂盒 50次
D0059S PAGE胶DNA回收试剂盒 50次
ST003-100ml 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
ST003-500ml 30% Acr-Bis (29:1) 500ml
ST004M Agarose (Low EEO) 50g
ST005 Ammonium persulfate substitute (APS substitute) 10g
ST728 TEMED 10ml
D0128 NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) 1ml
D0130 NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) 5ml
D0072 BeyoRed DNA上样缓冲液(6X) 2ml
D0812 Glycogen (核酸沉淀用) 500µl
R0021 DEPC水(DNase、RNase free) 100ml
R0022 DEPC水(DNase、RNase free) 500ml
R0123 RNase and DNase Away 250ml



物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:
更换校验码
质检证书
输入批号搜寻COA
搜索
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献:
购物车
会员
顶部