产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
R0702S | Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭) | 1μg | 329.00元 |
R0702M | Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭) | 5μg | 1336.00元 |
碧云天生产的Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭),即通用miRNA克隆接头(5´腺苷化3´封闭)或Universal miRNA Cloning Linker (5'adenylated, 3'blocked),是一种常用于miRNA等3'端为羟基的RNA或3'端为羟基的单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时,在3'端添加的接头。
本产品5´端腺苷酰化(也称5´端预腺苷酰化或5´端预腺苷化,5′ pre-adenylated或5′ pre-adenylation),3´端氨基封闭,可以用于3'端为羟基的RNA的3'端接头的添加。RNA连接酶可以识别“活化”的5´端腺苷酰化的本产品,在无需ATP存在的条件下,可将本产品的5´端与另外一条单链寡核苷酸的3´端羟基共价连接。利用5´端腺苷酰化,3´端封闭的本产品,加入RNA连接酶,在无需添加ATP的条件下,就能实现本产品5'端和目标序列3'羟基的特异性共价连接。例如和miRNA连接时,可以有效避免miRNA的自连、不同miRNA之间的连接、本产品的自连或本产品不同链之间的连接,而仅发生本产品5'端和miRNA 3'羟基之间的特异性连接。
本产品的电泳图和连接效果图请参考图1。图中可见,本产品条带清晰,纯度高,与5'端为磷酸化的序列相比有显著的电泳迁移率差异(图1A);并且本产品使用T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl2), truncated与ssRNA连接时,连接效率非常高(图1B)。
图1. Universal miRNA Cloning Linker Linker (5´腺苷化3´封闭)及其连接效果图图。图A. 本产品5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´ (AppDNA)与5´-pCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´ (pDNA)的电泳对比图。图B. 本产品(AppDNA)与ssRNA使用T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl2), truncated的连接效果图。图中可见本产品与ssRNA有非常高的连接效率。
本产品的寡核苷酸序列是:5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´。本产品的序列同NEB公司的S1315S Universal miRNA Cloning Linker。
本产品以水溶液的形式存在,浓度为40ng/µl,即6.9µM。
用途:本产品可以应用于小RNA克隆、miRNA文库构建。
本产品的1µg小包装约通常可以进行8-17次连接反应,5µg中包装约通常可以进行40-85次连接反应。具体的连接反应次数和反应体系的体积和本产品的用量有关。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R0702S | Universal miRNA Cloning Linker (40ng/µl) | 1µg | — | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R0702M | Universal miRNA Cloning Linker (40ng/µl) | 5µg | — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存,一年有效。-80℃保存,至少一年有效。
注意事项:本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Volume | Final Concentration |
ssRNA | xµl | 0.5µM |
DEPC-treated Water | (1.1 or 2.55)-xµl | - |
Universal miRNA Cloning Linker (6.9pmol/µl) | 2.9 or 1.45µl | 1 or 0.5µM |
PEG8000 (50%, RNase Free) | 12µl | 0.3 |
10X Reaction Buffer | 2µl | 1 X |
RNase Inhibitor (40U/μl) | 1µl | 2U/μl |
T4 RNA Ligase2, truncated (200U/µl) | 1µl | 10U/µl - |
Total Volume | 20µl | - |