中文 | English
订货电话
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
工作日9:00-17:00
订货邮件
order@beyotime.com
订货QQ
4001683301
微信在线咨询
订单下载
碧云天订单.xls
信号转导> 信号小分子检测> 代谢小分子相关
黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法)
产品编号: S0111S
产品包装:100次
选择包装
价格: ¥ 568.00
产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
S0111S 黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法) 100次 568.00元

碧云天研发的黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法),即Xanthine Oxidase Inhibitor Screening Kit with WST-8,也称XO Inhibitor Screening Kit with WST-8或XOD Inhibitor Screening Kit with WST-8,是一种基于WST-8的显色反应,利用吸光度检测,简单、快速、灵敏地用于黄嘌呤氧化酶抑制剂高通量筛选的试剂盒。

黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XO or XOD)是体内核酸代谢中的一种重要酶,可以催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤,并能进一步催化黄嘌呤氧化为尿酸,同时产生过氧化氢以及超氧化物阴离子的一系列氧化反应,在包括人类在内的一些物种中的嘌呤分解代谢中起着重要作用[1]。在人类及其它灵长类动物中,XO通常存在于血清、肺、肝脏和肠黏膜中。在啮齿类动物中,XO在大部分组织中均有表达。血液中XO的活性通常都很低。当感染甲型流感时,血清及肺部的XO活性会增加[2]。当肝功能受损时,XO会大量释放到血液中,因此检测血液中XO水平被作为一个评估严重肝损伤(例如黄疸)的灵敏指标[3]。XO也可能与痛风的发病机理相关,黄嘌呤氧化酶是尿酸形成的代谢途径,因此使用黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇用于治疗痛风。此外,研究显示抑制XO活性可缓解心血管疾病及慢性阻塞性肺疾病[4,5]。

本试剂盒的检测原理请参考图1。底物(Substrate)在XO催化作用下产生的超氧化物阴离子(O2.-),随后与WST类指示剂(Indicator)反应产生水溶性的甲臜染料(Formazan dye)。甲臜染料在450nm左右有最大吸收峰,通过测定450nm处的吸光度就可以非常灵敏地检测黄嘌呤氧化酶活性。如果在反应中加入黄嘌呤氧化酶抑制剂(Inhibitor),甲臜染料的生成就会被抑制,甲臜的生成量与抑制剂的抑制效果成反比,这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。

图1.碧云天黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法) (S0111)的原理图。

本试剂盒含抑制剂阳性对照,使用便捷。本试剂盒提供XO检测缓冲液(XO Assay Buffer)、黄嘌呤氧化酶(XO)、XO底物(XO Substrate)、阳性对照非布司他(Febuxostat)及可以被XO催化产生荧光的指示剂(XO Indicator)。阳性对照Febuxostat是一种选择性的非嘌呤类XO抑制剂,临床上常用于痛风及高尿酸血症的治疗。通常Febuxostat的IC50约为2nM-20nM,使用本试剂盒检测Febuxostat的效果请参考图2。

图2.碧云天黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法) (S0111)检测Febuxostat的效果图。图中Febuxostat的IC50约为5nm。实测结果可能会因样品和检测条件等的不同而存在差异,图中数据仅作参考。

本试剂盒检测速度快,检测灵敏度高。整个检测过程约40分钟即可完成。本试剂盒中XO和XO Substrate等的使用量进行了优化,不仅能检测出IC50很低的抑制剂,也能检测出IC50较高的抑制剂。

碧云天同时提供基于Amplex Red法的黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(S0113)。

按照使用说明操作,用于96孔板检测时,本试剂盒的小包装可以进行100次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
S0111S-1 XO Assay Buffer 30ml
S0111S-2 XO (20X) 30μl
S0111S-3 XO Indicator (10X) 60μl
S0111S-4 XO Substrate (10X) 60μl
S0111S-5 Febuxostat (10µM) 20μl
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,一年有效。XO Indicator须避光保存。

注意事项:

XO Assay Buffer需要完全解冻并平衡至室温后再使用,否则会影响检测结果。XO使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒保存的条件进行保存。

待测抑制剂的溶剂可能会对检测产生干扰,推荐以XO Assay Buffer、Milli-Q级纯水(ST872)、DMSO (ST038)为溶剂配制、稀释待测抑制剂,并在对照孔中添加与抑制剂等体积的溶剂以排除干扰。如果使用其他溶剂请确保在最终的反应体系中溶剂浓度不应超过5%,如超过5%,请同时设置溶剂对照组以测试溶剂对酶活性的影响,排除干扰。

XO、XO Indicator、XO Substrate等试剂的量均比较少,在使用前请先适当离心,然后适当混匀后再使用。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.样品的准备:
取适量待测定的抑制剂,用XO Assay Buffer、超纯水、DMSO等适当的溶剂配制成适宜浓度的溶液,如果有必要可以配制成适当的浓度梯度待用。
注1:抑制剂的稀释和配制建议使用同一种溶剂。
注2:XO Assay Buffer需要完全解冻并平衡至室温后再使用。
2.试剂盒的准备:
a.平衡除XO以外的其它所有试剂至室温,略离心使溶液沉淀至管底,再混匀备用。XO Indicator、XO Substrate和Febuxostat可37ºC水浴0.5-2分钟促进融解。使用完毕后宜立即-20ºC保存。
b.XO (1X)的配制:按照每个样品需5μl XO (1X)配制适量的XO (1X)。取适量的XO (20X),按照1:19的比例加入XO Assay Buffer中。例如10μl XO (20X)加入190μl XO Assay Buffer,混匀即得200μl XO (1X)。配制好的XO (1X)可在冰浴上暂时保存,1小时内酶活性基本稳定。
注:所有涉及XO的操作应在冰上进行。
c.XO Indicator (1X)的配制:按照每个样品需要5μl XO Indicator (1X)配制适量的XO Indicator (1X)。取适量的XO Indicator (10X),按照1: 9的比例加入XO Assay Buffer中。例如10μl XO Indicator (10X)加入90μl XO Assay Buffer,混匀即得100μl XO Indicator (1X)。配制好的XO Indicator (1X) 4ºC或冰浴避光保存,当天可使用,但建议尽量现配现用。
d.XO Substrate (1X)的配制:按照每个检测需要5μl XO Substrate (1X)配制适量的XO Substrate (1X)。取适量的XO Substrate (10X),按照1: 9的比例加入XO Assay Buffer中。例如10μl XO Substrate (10X)加入90μl XO Assay Buffer,混匀即得100μl XO Substrate (1X)。配制好的XO Substrate (1X)液4ºC或冰浴避光保存,当天可使用,但建议尽量现配现用。
e.Febuxostat溶液(Febuxostat Solution)的配制:本试剂盒提供的阳性对照抑制剂Febuxostat浓度为10μM,可以根据需要,使用与待测抑制剂一样的溶剂稀释至所需浓度或一系列浓度梯度。
3.样品测定:
a.参考下表,设置对照孔和样品孔,并按照下表依次加入样品和各溶液。加入待测样品后,混匀,37ºC孵育10分钟。
Blank Control 100% Activity Control Inhibitor Control Sample Group
XO Assay Buffer 85µl 80µl 80µl 80µl
XO (1X) - 5µl 5µl 5µl
Sample Solvent* 5µl 5µl - -
Febuxostat Solution - - 5µl -
Test Inhibitors - - - 5µl
37ºC, for 10 minutes
注1:*Sample Solvent (样品溶剂)是指配制和稀释待测抑制剂(Test Inhibitors)所用的溶剂。
注2:为获得更加可靠的检测结果,建议每个样品至少应该进行2个重复孔的检测。
b.每孔加入5μl XO Indicator (1X)。
c.每孔快速加入5μl XO Substrate (1X),混匀。
注:加入XO Substrate (1X)后反应即会开始,如果孔数较多,可以在低温下操作或使用排枪操作以减小各孔间加入XO Substrate (1X)的时间差而导致的误差,可以在培养板振荡器上进行混匀。
d.37ºC孵育30分钟。
e.在450nm测定吸光度。
4.计算:
a.计算每个样品孔和对照孔的平均吸光度值,可分别记录为ABlank Control、A100% Activity Control、AInhibitor Control和ASample。
b.计算每个样品的抑制百分率。计算公式如下:
抑制率(%) = (A100% Activity Control – ASample)/( A100% Activity Control - ABlank Control) × 100%
c.对于检测发现有效的抑制剂,通过检测该抑制剂的剂量效应就可以测定出该抑制剂的IC50。使用本试剂盒检测Febuxostat对于XO的抑制作用的检测结果请参考图2。
参考文献:
1.Hille R, Hall J, Basu P. Chem Rev. 2014. 114(7):3963-4038.
2.Hemilä H. Br J Nutr. 1992. 67(1):3-16.
3.Battelli MG, Musiani S, Valgimigli M, Gramantieri L, Tomassoni F, et al. Am J Gastroenterol. 2001. 96(4):1194-1199.
4.Dawson J, Walters M. Br J Clin Pharmacol. 2006. 62(6):633-644.
5.Heunks LM, Viña J, van Herwaarden CL, Folgering HT, Gimeno A, et al. Am J Physiol. 1999. 277(6):1697-1704.
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
C0016/C0017 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 100次/500次
C0018 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(WST-8法) 100次/500次
S0110S 黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0111S 黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒(WST-8法) 100次
S0112S Amplex Red黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒 100次
S0113S Amplex Red黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选试剂盒 100次
S0114S 黄嘌呤/次黄嘌呤检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0204S D-乳酸检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0208S L-乳酸检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0211S Amplex Red胆固醇与胆固醇酯检测试剂盒 100次
S0215S Amplex Red游离脂肪酸检测试剂盒 100次
S0219S Amplex Red甘油三酯检测试剂盒 100次
S0223S Amplex Red甘油检测试剂盒 100次
S0227S Amplex Red乳酸检测试剂盒 100次
S0231S Amplex Red尿酸与尿酸酶检测试剂盒 100次
S0235S Amplex Red磷酸盐检测试剂盒 100次
S0239S Amplex Red乙醇检测试剂盒 100次
S0243S Amplex Red黄嘌呤/次黄嘌呤检测试剂盒 100次
S0247S Amplex Red谷氨酸与谷氨酸氧化酶检测试剂盒 100次
S0251S Amplex Red过氧化氢与过氧化物酶检测试剂盒 100次
S0255S Amplex Red过氧化氢酶检测试剂盒 100次
S0259S Amplex Red单胺氧化酶检测试剂盒 100次
S0263S Amplex Red鞘磷脂酶检测试剂盒 100次
S0267S Amplex Red胆碱与乙酰胆碱检测试剂盒 100次
S0271S Amplex Red乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 100次
S0275S Amplex Red磷脂酰胆碱检测试剂盒 100次
S0279S Amplex Red磷脂酶D检测试剂盒 100次
S0283S Amplex Red肌酸检测试剂盒 100次
S0287S Amplex Red肌酸激酶检测试剂盒 100次
S0291S Amplex Red肌酸酐检测试剂盒 100次
S0295S Amplex Red肌酸氨检测试剂盒 100次
S0299S Amplex Red丙酮酸检测试剂盒 100次
S0303S Amplex Red丙酮酸激酶检测试剂盒 100次
S0307S Amplex Red ADP检测试剂盒 100次
S0311S Amplex Red磷酸烯醇式丙酮酸检测试剂盒 100次
S0315S Amplex Red丙氨酸检测试剂盒 100次
S0319S Amplex Red丙氨酸转氨酶检测试剂盒 100次
S0323S Amplex Red α-酮戊二酸检测试剂盒 100次
S0327S Amplex Red天冬氨酸检测试剂盒 100次
S0331S Amplex Red天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒 100次
S0335S Amplex Red柠檬酸检测试剂盒 100次
S0339S Amplex Red草酰乙酸检测试剂盒 100次
S0343S Amplex Red葡萄糖检测试剂盒 100次
S0347S Amplex Red葡萄糖氧化酶检测试剂盒 100次
S0351S Amplex Red果糖检测试剂盒 100次
S0355S Amplex Red乳糖检测试剂盒 100次
S0359S Amplex Red半乳糖与乳糖检测试剂盒 100次
S0363S Amplex Red半乳糖与半乳糖氧化酶检测试剂盒 100次
S0367S Amplex Red麦芽糖检测试剂盒 100次
S0371S Amplex Red麦芽糖与葡萄糖检测试剂盒 100次
S0375S Amplex Red糖原检测试剂盒 100次
S0379S Amplex Red磷酸果糖激酶检测试剂盒 100次
S0383S Amplex Red乙酰辅酶A检测试剂盒 100次
S0387S Amplex Red辅酶A检测试剂盒 100次
S0391S Amplex Red乙酰辅酶A合成酶检测试剂盒 100次
S0511S L-苹果酸检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0514S 苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0517S 延胡索酸检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0520S 延胡索酸酶活性检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0523S 异柠檬酸检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0526S 异柠檬酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0529S Amplex Red琥珀酸检测试剂盒 100次
S0530S 琥珀酸脱氢酶活性检测试剂盒(显色法) 100次
S0532S Amplex Red琥珀酰辅酶A合成酶检测试剂盒 100次
S0535S 支链氨基酸检测试剂盒(WST-8法) 100次
S0538S N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性检测试剂盒(显色法) 100次
S0540S 酪氨酸检测试剂盒(显色法) 100次
S0542S 酪氨酸酶活性检测试剂盒(显色法) 100次
S0545S 酪氨酸酶抑制剂筛选试剂盒(显色法) 100次
S0547S 髓过氧化物酶活性检测试剂盒(显色法) 100次
S0548S Amplex Red髓过氧化物酶活性检测试剂盒 100次
S0550S Amplex Red髓过氧化物酶抑制剂筛选试剂盒 100次
物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:
更换校验码
质检证书
输入批号搜寻COA
搜索
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献:
购物车
会员
顶部