反转录(Reverse Transcription)是以RNA为模板,在反转录酶的催化作用下,合成RNA/DNA杂合双链,然后水解杂合双链中的RNA,得到互补的单链cDNA的过程。得到的cDNA单链可以作为扩增模板合成双链DNA。cDNA的合成可以用与后续的PCR实验、qPCR实验、基因检测、基因工程等各个领域。
其中反转录酶的选择对后续实验至关重要,经过改造和优化,碧云天推出了特别适合后续qPCR实验的高精确度BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶。BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能够以RNA或DNA为模板,在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成,即可以进行cDNA的第一链合成。同时本反转录酶还保留了RNase H活性,能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,有利于后续cDNA第二链的合成。
采用本反转录酶,碧云天生产了BeyoRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒,试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂,使用简单方便快捷。
产品特点:
检测灵敏度高:和其它反转录酶相比,本产品的反转录产物用于qPCR时,CT值通常能下降1-2左右,使用本产品能获得更好的检测灵敏度,可以使用更少的样品;
扩增速度快:使用本产品时,仅需反转录5-10分钟,即可以用于后续的qPCR,可以大幅缩短实验时间。
反转录性能优,扩增特异性强,反应稳定性好
产品用途:
1. 总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成,特别适合用于常规RNA样品的反转录和qPCR检测或一步法qRT-PCR检测,也非常适合于內源低丰度RNA、外源病毒RNA等微量RNA的反转录及后续的qPCR检测;
2. 反转录产物也适合用于常规PCR、cDNA的第二链合成、cDNA文库构建、克隆;
3. DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记;
4. 通过引物延伸(primer extension)分析和研究RNA。
产品效果:
图1.BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶对总RNA进行反转录后用于qPCR检测的效果图。从HEK293T细胞抽提获得的总RNA 2µg,在20μl反转录体系(2µg Total RNA, 0.5μg Oligo(dT)18 primer, 0.2μg Random Hexamer primer, 1X Reaction Buffer, 20U RNase Inhibitor, dNTP Mix (1mM each), 200U BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶)中进行反转录,反转录后取1μl (100%)或不同稀释比例(1μl的10%、1%、0.1%、0.01%)反转录产物进行GAPDH cDNA 151bp目的片段的qPCR扩增和电泳检测。A.扩增曲线图。B.溶解曲线图。C.qPCR扩增产物的电泳图。NTC (no-template control),用水代替反转录产物。qPCR反应体系20µl,使用碧云天生产的D7260 BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X)。实际检测效果会和特定实验条件有关,图中结果仅供参考。
图2.使用BeyoRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒对总RNA反转录后,对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见本产品可以轻松完成长度为8 kb以下基因的反转录,反转录的最大长度可以达到12 kb。图中的扩增效果仅供参考。
小编贴心为大家整理了碧云天不同反转录酶的特点,大家可根据实验需求进行选择哦~
产品编号 | 反转录酶名称 | 扩增长度 | RNaseH活性 | 高速反转录活性 | 耐热性 | cDNA克隆 | qPCR |
D7153 | BeyoRT™ M-MuLV反转录酶 | 13kb | 有 | 无,建议反转录60分钟 | 有,耐受42℃-50℃ | ★★★★ | ★★ |
D7159 D7166 |
BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-) | 13kb | 无 | 无,建议反转录60分钟 | 有, 42-45℃最佳,耐受55℃ | ★★★★ | ★★ |
D7160 D7168 D7170 |
BeyoRT™II M-MLV反转录酶(RNase H-) | >10kb | 无 | 无,建议反转录60分钟 | 有, 42-45℃最佳,耐受50℃ | ★★★★ | ★★ |
D7176 D7178 D7180 D7182 D7185 |
BeyoRT™III M-MLV反转录酶(RNase H-) | 12kb | 无 | 有,小于3kb建议反转录10分钟 | 有, 42℃最佳,耐受50-55℃ | ★★★★★ | ★★★ |
D7188 D7190 |
BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | >3kb | 有 | 有,建议反转录5-10分钟 | 无,42℃最佳 | ★★ | ★★★★★ |
选择指南:
1. 如果反转录后的用途是qPCR,最优先推荐选购D7188 BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶。对于待检测的目的RNA的丰度比较高的时候,可以适当优先考虑BeyoRT™III M-MLV反转录酶(RNase H-),通常仅需反转录10分钟即可用于qPCR,也可以大幅缩短实验时间。
2. 如果希望克隆一个目的基因,最优先推荐BeyoRT™III M-MLV反转录酶(RNase H-),该酶不仅能反转录长达12kb的RNA,并且具有快速反转录能力,小于3kb的目的基因仅需反转录10分钟,可以大幅缩短实验时间。用于克隆目的基因时,BeyoRT™II M-MLV反转录酶(RNase H-)、BeyoRT™ M-MuLV反转录酶和BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)也是比较好的选择。
产品信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
D7188S | BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | 10KU | |
D7188M | BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | 50KU | |
D7188L | BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | 200KU | |
D7190L | BeyoRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒 | 500次 | |
D7190S | BeyoRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒 | 20次 | |
D7190M | BeyoRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒 | 100次 |