碧云天生产的BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X)，即BeyoRT™ III First Strand cDNA Synthesis Master Mix (5X) (with gDNA EZeraser)，是一种仅需加入RNA模板和水就能进行反转录的最简单、便捷、快速、稳定、高效并且能有效避免基因组DNA (genomic DNA, gDNA)干扰的cDNA第一链合成产品。本产品对于3kb以下片段，10min就能完成反转录；产物长度可以长达12kb；可以在55℃进行高温反转录，有效解决复杂二级结构RNA反转录难的问题；-20℃不会结冻，取用非常便捷。
BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X) (with gDNA EZeraser)包含了经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶、RNase Inhibitor、Oligo(dT)₁₈ Primer、Random Hexamer Primer、dNTPs、MgCl₂、反转录反应缓冲液能去除基因组DNA污染的gDNA EZeraser，只需加入RNA模板和水(DEPC-treated Water或DNase/RNase-Free Water)就能进行反转录反应，大大简化了反转录的实验操作，使操作最为便捷，能有效避免常规反转录非常复杂的操作过程中可能导致的操作误差、孔间污染等，使反转录的重复性和平行性大幅提升。
本产品可广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成，后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR (quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建，尤其是反转录所得目的基因的克隆等。BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记等，也可以通过引物延伸(primer extension)来分析和研究RNA。
本产品中的gDNA EZeraser其主要有效成分为热敏性dsDNase (Thermolabile dsDNAse)，能特异性地降解双链基因组DNA，效率高，作用时间短，在充分去除残留基因组DNA之后不会对cDNA造成显著影响。热敏性dsDNase在55℃加热5min就能导致完全失去酶活性。后续如果用于常规PCR或qPCR，PCR的首次变性条件能充分失活gDNA EZeraser，因此不必担心gDNA EZeraser对于后续的常规PCR或qPCR的干扰。使用本产品可以有效避免总RNA中的gDNA对于后续qPCR定量的干扰。另一方面，也有助于简化qPCR引物设计，无需进行跨内含子引物设计。
BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X) (with gDNA EZeraser)中的BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase，是一种经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的M-MLV反转录酶，具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能够以RNA或DNA为模板，在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成，即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成，同时它保留了RNase H的活力，能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，有利于后续cDNA第二链的合成。
BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X) (with gDNA EZeraser)的反转录效率与非预混液的反转录效率一致(参考图1)。

图1. 使用碧云天的BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X) (with gDNA EZeraser)和使用BeyoRT™ III M-MLV反转录酶的常规反转录体系的效果对比图。在20μl的反转录反应体系中，以HEK293T细胞中提取的1µg总RNA为模板，没有加入反转录酶、分别使用BeyoRT™ III M-MLV反转录酶的常规反转录体系和BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X) (with gDNA EZeraser)，42℃反转录60min。然后取1μl反转录产物分别进行两个目的基因(3.0kb的Fibrillin1基因和6.0kb的ADAR1基因)的PCR扩增和电泳检测。

如果希望进行常规的反转录操作，可以单独选购BeyoRT™ III M-MLV反转录酶(D7176),RNase Inhibitor (R0102)和dNTP mix (D7373)，或者选购BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒(D7178)进行反转录反应。
本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录，反转录的最大长度可以达到12 kb。BeyoRT™ III M-MLV反转录酶热稳定性好，反转录效率高。本产品最适反应温度为42℃，当温度达到50℃时仍具有很高活性，对于长度较短的cDNA反转录，温度达到55℃时也可获得较高产量的cDNA。高温反转录对于高GC含量RNA的反转录，能有效减少二级结构，提升反转录效率。本产品反转录速度快，6kb以下的cDNA反转录只需0.5h即可完成，3kb以下的cDNA反转录10min即可完成。
本产品操作便捷，作为即用型第一链合成预混液(5X)，即反转录预混液(5X)，只需加入模板RNA和水，即可快速进行反转录反应，并且BeyoRT™ III cDNA合成预混液(5X) (with gDNA EZeraser)在-20℃不会结冻，使用非常便捷。
本产品重复性好，反转录所有试剂预混合，大大减少操作步骤，有效降低污染几率和操作误差，使实验结果更加一致，重复性更好。
失活或抑制：80℃孵育10min可以导致本产品中的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ III M-MLV反转录酶有抑制作用。55℃孵育5min可以导致本产品中的gDNA EZeraser失活。
本试剂盒的不同包装分别足够进行20次、100次和500次反转录反应。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
由于本预混液(5X)含有适量甘油，使用时须注意与RNA样品及水充分混匀，否则可能会导致反转录不充分。
对于GC含量比较高的RNA的反转录，产品的使用说明中给予了特别说明，请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。