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细胞相关> 亚细胞研究> 外泌体
BeyoExo™外泌体专用裂解液
产品编号: C3632-100ml
产品包装:100ml
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价格: ¥ 489.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C3632-20ml BeyoExo™外泌体专用裂解液 20ml 139.00元
C3632-100ml BeyoExo™外泌体专用裂解液 100ml 489.00元

碧云天研发生产的BeyoExo™外泌体专用裂解液(BeyoExo™ Lysis Buffer for Exosome),是一种针对外泌体样品研发的专用裂解液。经本产品裂解得到的外泌体蛋白样品可用于Western、BCA法检测蛋白浓度等。

外泌体(Exosome)是膜包裹的细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs),直径约为40-160nm,具有脂质双分子层结构,天然存在于血液、尿液、脑脊液,以及体外培养细胞的上清液中[1],几乎所有类型的细胞都可以产生并释放外泌体[2]。

外泌体标志蛋白(Protein biomarkers for exosome),也称外泌体蛋白标志物(Protein markers for exosome),可以用于鉴定、观察、标记和纯化外泌体。据外泌体数据库(ExoCarta, http://www.exocarta.org)统计来自不同生物、细胞类型和体液的外泌体中已发现9769种蛋白质,ExoCarta列出了100种常见外泌体蛋白标志物(http://exocarta.org/exosome_markers_new),其中Tumor susceptibility gene 101 (TSG101)、Hsp70、CD9、CD63、CD81、Alix、Flotillin和Ceramide是最常用的外泌体蛋白标志物(如图1所示) [3]。

图1. 常见的外泌体蛋白标志物示意图。

BeyoExo™外泌体专用裂解液含Tris (pH7.4),NaCl,Triton X-100,Sodium deoxycholate,SDS,EDTA,Protease如AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E64、Leupeptin等成分,不仅可以充分溶解常见的外泌体膜蛋白,也可以有效抑制蛋白降解。

用BeyoExo™外泌体专用裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用常规的Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

本裂解液裂解后的样品,进一步添加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液后进行Western的效果图参见图2。

图2. 碧云天BeyoExo™外泌体专用裂解液(C3632)裂解的外泌体通过Western检测TSG101、Hsp70和CD9的效果图。对于外泌体样品,其中TSG101 (对应的抗体为AF0608)、Hsp70 (对应的抗体为AF0601)的Western检测是添加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015)后进行,CD9 (对应的抗体为AF0611)的Western检测是添加变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X) (P0016P)后进行。实际效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C3632-20ml BeyoExo™外泌体专用裂解液 20ml
C3632-100ml BeyoExo™外泌体专用裂解液 100ml
- 说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,一年有效。首次使用时建议适当分装,须避免反复冻融。

注意事项:

裂解样品的所有步骤都需在冰上或4ºC进行。

如有需要可自备PMSF。建议使用碧云天的PMSF (ST506/ST507)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 实验前请将BeyoExo™外泌体专用裂解液置于4ºC融化,冰上备用。
2. 推荐使用BeyoExo™增强型细胞上清外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3622)、细胞上清外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3620)或BeyoExo™血清血浆外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3629)进行相应样品的外泌体提取。
3. 提取的外泌体可以使用重悬液重悬后进行裂解,也可以直接使用裂解液裂解。例如,对于使用10ml的HeLa细胞上清提取外泌体,可以使用10-20μl重悬液进行重悬,然后按1:2的体积比例加入BeyoExo™外泌体专用裂解液进行裂解,轻轻吹打混匀,置于冰上裂解10分钟。例如每10μl重悬液加入20μl本裂解液,也可考虑在1:1-1:5范围内酌情调整用量。对于使用10ml的HeLa细胞上清提取外泌体外泌体沉淀,也可以直接加入20-40μl本裂解液,轻轻吹打混匀,置于冰上裂解10分钟。
注1:裂解后蛋白浓度通常应小于2μg/μl,以保证充分裂解。
注2:不同样品提取获得的外泌体的量会有所不同,相应的重悬液和裂解液的用量也需要适当调整。例如对于B16-F10 (小鼠黑色素瘤高转移细胞)等分泌外泌体较多的外泌体样品,可适当增加重悬液及裂解液的用量。
4. 裂解完成后,4ºC,12,000×g离心5分钟取上清,使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)测定蛋白浓度,或根据检测的外泌体标志蛋白,添加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015)或变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X) (P0016P)并变性后进行Western等后续实验。通常取10-20μl上样,就能获得比较理想的外泌体标志蛋白的Western条带。
参考文献:
1. Metzelaar MJ, Wijngaard PL, Peters PJ, Sixma JJ, Nieuwenhuis HK, et al. J Biol Chem. 1991. 266(5):3239-45.
2. Luo W, Dai Y, Chen Z, Yue X, Andrade-Powell KC, et al. Commun Biol. 2020. 3(1):114.
3. Kalluri R, LeBleu VS. Science. 2020. 367(6478).
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