碧云天生物技术-EPI300超级感受态细胞(D1035S)

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EPI300超级感受态细胞

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产品编号: D1035S

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D1035S	EPI300超级感受态细胞	10×100μl	366.00元
D1035M	EPI300超级感受态细胞	50×100μl	1496.00元

碧云天生产的EPI300超级感受态细胞，英文名EPI300 Super Competent Cells，是一种可以用于高效扩增长度高达145kb质粒DNA以及在常规菌株中得率偏低的质粒克隆的E. coli EPI300即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化，在严格按照使用说明进行操作时，转化效率可以达到3.0±0.5×10⁸cfu/μg DNA。

EPI300菌株含有一个突变的trfA基因，该基因表达的蛋白产物可以促进含有oriV复制子质粒的高拷贝复制，在非诱导情况下，当含有oriV复制子质粒的EPI300菌株在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，oriV复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂后，oriV复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，进而提高了质粒产量[1]。

EPI300菌株的基因型为F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ–rpsL nupG trfA dhfr。其中mrr-hsdRMS-mcrBC基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (例如哺乳动物基因组DNA等)；recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取；lacZ∆M15标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选；rpsL赋予其链霉素抗性。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D1035S	EPI300超级感受态细胞	10×100μl
D1035M	EPI300超级感受态细胞	50×100μl
－	说明书	1份

保存条件：

-80℃保存，一年内有效。避免反复冻融，通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项：

感受态细胞禁止反复冻融，并应尽可能避免冻融，反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后，须尽快加入待转化样品，不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间，以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感，需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作，不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化，这样万一遇到转化失败的情况，还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用，放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞，加入DNA样品，例如质粒、连接产物或重组产物等，轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀，立即冰浴静置30分钟。注：所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10分钟，后续可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增，复苏培养10-20分钟也完全足够了；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议严格进行复苏培养操作。
5.收菌涂板。约5000×g室温离心1分钟，沉淀细菌，吸除约900-950μl上清，余下约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体，随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注：如果用于质粒的转化扩增，可以仅取少量进行涂板；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献：
1.Westenberg M, Bamps S, Soedling H, Hope IA, Dolphin CT. BMC biotechnology. 2010. 10(1): 1-8.
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