碧云天生物技术-Rosetta2(DE3)超级感受态细胞(D1067S)

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Rosetta2(DE3)超级感受态细胞

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产品编号: D1067S

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D1067S	Rosetta2(DE3)超级感受态细胞	10×100μl	388.00元
D1067M	Rosetta2(DE3)超级感受态细胞	50×100μl	1588.00元

碧云天生产的Rosetta2(DE3)超级感受态细胞，英文名Rosetta2(DE3) Super Competent Cells，是一种兼容真核生物7种稀有密码子进而实现重组真核蛋白高效表达的E. coli. Rosetta2(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化，在严格按照使用说明进行操作时，转化效率可以达到1.0±0.5×10⁸cfu/μg DNA。

Rosetta2(DE3)是BL21的衍生菌株。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21(DE3)细胞中即是Rosetta2(DE3)。pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平[1]。

Rosetta2(DE3)在Rosetta2(DE3)的基础上增加了第7个稀有密码子(CGG)。

Rosetta2(DE3)基因组整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，因而可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等系统，在IPTG诱导下表达重组蛋白。

Rosetta2(DE3)也是lon蛋白酶和膜外蛋白酶ompT的缺陷型菌株，这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。

Rosetta2(DE3)菌株的基因型为F- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^-) gal dcm (DE3) pRARE2 (Cam^R)。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D1067S	Rosetta2(DE3)超级感受态细胞	10×100μl
D1067M	Rosetta2(DE3)超级感受态细胞	50×100μl
－	说明书	1份

保存条件：

-80℃保存，一年内有效。避免反复冻融，通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项：

感受态细胞禁止反复冻融，并应尽可能避免冻融，反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后，须尽快加入待转化样品，不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间，以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感，需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作，不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化，这样万一遇到转化失败的情况，还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用，放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞，加入DNA样品，例如质粒、连接产物或重组产物等，轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀，立即冰浴静置30分钟。注：所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10分钟，后续可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增，复苏培养10-20分钟也完全足够了；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议严格进行复苏培养操作。
5.收菌涂板。约5000×g室温离心1分钟，沉淀细菌，吸除约900-950μl上清，余下约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体，随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注：如果用于质粒的转化扩增，可以仅取少量进行涂板；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献：
1.Hölsch K, Weuster-Botz D. Enzyme and Microbial Technology. 2010. 47(5): 228-235.
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