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核酸相关> 菌种与质粒> 感受态及制备
Stable超级感受态细胞
产品编号: D1077S
产品包装:10×100μl
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价格: ¥ 258.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D1077S Stable超级感受态细胞 10×100μl 258.00元
D1077M Stable超级感受态细胞 50×100μl 1058.00元

碧云天生产的Stable超级感受态细胞,英文名Stable Super Competent Cells,是一种可以用于高效转化带有多次重复序列质粒的克隆用E. coli Stable即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,在严格按照使用说明进行操作时,转化效率可以达到5.0±0.5×108cfu/μg DNA。

Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率菌株,是逆转录病毒/慢病毒载体系统推荐使用的菌株,特别适合慢病毒或具有末端重复序列DNA片段的克隆。基因组含有重组酶recA1 rel A1突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;同时含有核酸酶endA1突变,避免了提取质粒过程中核酸酶的污染,大大提高了高纯度病毒质粒的产量和质量。lacZΔM15的存在使Stable可用于蓝、白斑筛选,此菌株具有四环素和链霉素抗性[1]。

Stable菌株的基因型为F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS -mcrBC)

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D1077S Stable超级感受态细胞 10×100μl
D1077M Stable超级感受态细胞 50×100μl
说明书 1份
保存条件:

-80ºC保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项:

感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用,放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞,加入DNA样品,例如质粒、连接产物或重组产物等,轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀,立即冰浴静置30min注意:所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10分钟,后续可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30min并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基,颠倒数次混匀,30℃摇床约250 rpm复苏1小时。当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率;若转化control pUC19计算转化效率则需37℃摇床约225 rpm复苏1小时。
5.收菌涂板。约5000g室温离心1min,沉淀细菌,吸除约900-950μl上清,余下的约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体,随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注意:如果用于质粒的转化扩增,可以仅取少量进行涂板;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于30℃培养20-24小时或37℃过夜培养。当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃培养过夜。
参考文献:
1.Schröfl L. Examination of the regulatory activity of a selected haplotype-block via an enhancer-reporter assay[J]. 2020.
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