碧云天生物技术-Tuner(DE3)超级感受态细胞(D1091M)

试剂

技术服务

订货电话

400-1683301

800-8283301

电话订货时间:

工作日9:00-17:00

订货邮件

order@beyotime.com

订货QQ

4001683301

订货须知

订单下载

碧云天订单.xls

资源下载

试剂> 核酸相关> 菌种与质粒> 感受态及制备

Tuner(DE3)超级感受态细胞

一键复制产品信息

产品编号: D1091M

产品包装:50×100μl

选择包装

10×100μl 50×100μl

数

量

说明书下载

价格: ¥ 1588.00

加入购物车

				产品简介
			
				使用说明
			
				产品文件
			
				相关产品
			
				相关论文
			
				产品问答

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D1091S	Tuner(DE3)超级感受态细胞	10×100μl	388.00元
D1091M	Tuner(DE3)超级感受态细胞	50×100μl	1588.00元

碧云天生产的Tuner(DE3)超级感受态细胞，英文名Tuner(DE3) Super Competent Cells，是一种可以精确控制重组蛋白在所有菌体中均一化表达用的E. coli Tuner(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化，在严格按照使用说明进行操作时，转化效率可以达到1.0±0.5×10⁷cfu/μg DNA。

很多原核表达系统利用IPTG诱导重组蛋白在BL21菌株中完成表达，这种诱导具有随机效应, IPTG低浓度时只能在少数几个细胞中出现重组蛋白表达。要使所有细胞都表达，往往需要极高浓度的IPTG，且单个细胞内的重组蛋白水平差异较大。这种IPTG浓度带来的开-关效应让重组蛋白的得率难以控制。

Tuner(DE3)菌株解决了该弊端，确保了重组蛋白在所有细胞中均一化表达，且得率和IPTG的浓度呈现一定程度的正相关性。

Tuner(DE3)是lon和ompT蛋白酶缺陷型的B菌株，也是BL21菌株的lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于Tuner的染色体上，所以称为Tuner(DE3)，它可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，从而用于pET系列、pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达。

Tuner(DE3)菌株的基因型为F- ompT hsdS_B(r_B^-, m_B^-) gal dcm lacY1 (DE3) [1]。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D1091S	Tuner(DE3)超级感受态细胞	10×100μl
D1091M	Tuner(DE3)超级感受态细胞	50×100μl
－	说明书	1份

保存条件：

-80℃保存，一年内有效。避免反复冻融，通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项：

感受态细胞禁止反复冻融，并应尽可能避免冻融，反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后，须尽快加入待转化样品，不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间，以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感，需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作，不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化，这样万一遇到转化失败的情况，还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用，放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞，加入DNA样品，例如质粒、连接产物或重组产物等，轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀，立即冰浴静置30分钟。注：所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10分钟，后续可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增，复苏培养10-20分钟也完全足够了；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议严格进行复苏培养操作。
5.收菌涂板。约5000×g室温离心1分钟，沉淀细菌，吸除约900-950μl上清，余下约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体，随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注：如果用于质粒的转化扩增，可以仅取少量进行涂板；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献：
1.Speer SL, Guseman AJ, Patteson JB, Ehrmann BM, Pielak GJ. Protein Sci. 2019. 28(7):1307-1311.
相关产品：

产品编号	产品名称	包装
D0301	一步法感受态细菌制备试剂盒	200次
D0302	超级感受态细菌制备试剂盒	100次
D0303	农杆菌感受态制备试剂盒	100次
D0391	细菌冻存液	50ml
ST156	BeyoPure™ LB Broth (premixed powder)	10瓶共5升
ST158	BeyoPure™ LB Broth with Agar (premixed powder)	10瓶共5升
ST800	Tryptone/胰蛋白胨	500g
ST802	BeyoPure™ Tryptone/BeyoPure™胰蛋白胨	500g
ST968	Yeast extract/酵母膏	500g
ST969	BeyoPure™ Yeast Extract/BeyoPure™酵母膏	500g
ST004D	Agar (琼脂粉)	100g
ST004E	Agar	500g
ST007	Ampicillin	5g
ST008	Ampicillin (100mg/ml,1000X)	5ml
ST101	Kanamycin	1g
ST102	Kanamycin (10mg/ml,1000X)	5ml
D1001S/M	ArcticExpress(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1003S/M	ArcticExpress (DE3) pRARE2超级感受态细胞	10/50×100μl
D1005S/M	BJ5183超级感受态细胞	10/50×100μl
D1007S/M	BJ5183-AD-1超级感受态细胞	10/50×100μl
D1009S/M	BL21超级感受态细胞	10/50×100μl
D1011S/M	BL21(AI)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1013S/M	BL21(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1015S/M	BL21(DE3) PLysS超级感受态细胞	10/50×100μl
D1017S/M	BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL超级感受态细胞	10/50×100μl
D1019S/M	BL21 Star(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1021S/M	BL21 Star (DE3)pLysS超级感受态细胞	10/50×100μl
D1023S/M	C43(DE3)PLysS超级感受态细胞	10/50×100μl
D1025S/M	DB3.1超级感受态细胞	10/50×100μl
D1027S/M	DH10B超级感受态细胞	10/50×100μl
D1029S/M	DH10Bac超级感受态细胞	10/50×100μl
D1033S/M	DH5α λpir超级感受态细胞	10/50×100μl
D1035S/M	EPI300超级感受态细胞	10/50×100μl
D1037S/M	EPI400超级感受态细胞	10/50×100μl
D1039S/M	ER2566超级感受态细胞	10/50×100μl
D1041S/M	GT115超级感受态细胞	10/50×100μl
D1043S/M	HB101超级感受态细胞	10/50×100μl
D1045S/M	HT115(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1047S/M	JM109超级感受态细胞	20/100×100μl
D1049S/M	JM109(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1051S/M	JM110超级感受态细胞	10/50×100μl
D1053S/M	Mach1-T1超级感受态细胞	20/100×100μl
D1055S/M	MG1655超级感受态细胞	10/50×100μl
D1057S/M	Origami2(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1059S/M	OrigamiB(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1061S/M	OrigamiB(DE3)pLyss超级感受态细胞	10/50×100μl
D1063S/M	OverExpress C43(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1065S/M	Rosetta(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1067S/M	Rosetta2(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1069S/M	Rosetta-gami 2(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1071S/M	Rosetta-gami B(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1073S/M	Rosetta-gami(DE3)pLysS超级感受态细胞	10/50×100μl
D1075S/M	S17-1λpir超级感受态细胞	10/50×100μl
D1077S/M	Stable超级感受态细胞	10/50×100μl
D1079S/M	Stbl2超级感受态细胞	10/50×100μl
D1081S/M	Stbl3超级感受态细胞	10/50×100μl
D1083S/M	SURE超级感受态细胞	10/50×100μl
D1085S/M	TG1超级感受态细胞	10/50×100μl
D1087S/M	TOP10超级感受态细胞	20/100×100μl
D1089S/M	TOP10F`超级感受态细胞	10/50×100μl
D1091S/M	Tuner(DE3)超级感受态细胞	10/50×100μl
D1093S/M	Turbo超级感受态细胞	10/50×100μl
D1095S/M	XL10-Gold超级感受态细胞	10/50×100μl
D1097S/M	XL1-Blue超级感受态细胞	10/50×100μl
D1099S/M	XL2-Blue超级感受态细胞	10/50×100μl