产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D2777-1μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 1μg | 888.00元 |
D2777-100μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-N-Flag-Hyg是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Flag标签(Flag Tag,DYKDDDDK)的目的蛋白的表达质粒。质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5′端含有一个编码Flag标签的序列,可以表达含有Flag标签的融合蛋白,因此可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。
pCMV-N-Flag-Hyg质粒为氨苄青霉素抗性和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可利用其Hygromycin B抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Hygromycin B (ST1389)可以从碧云天购买。
Hygromycin B是来源于吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的一种氨基糖苷类抗生素,可通过中断易位并增加80S核糖体上的错误翻译而抑制蛋白质的合成,从而杀死原核或真核细胞。大肠杆菌来源的Hygromycin B抗性基因(hyg或hph)所编码的Hygromycin B磷酸转移酶可将Hygromycin B磷酸化,导致其失活,从而使细胞对Hygromycin B产生抗性。因此,Hygromycin B可用于筛选成功转染Hygromycin B抗性基因的原核或真核细胞。
Hygromycin B用于细胞筛选的浓度范围是100~1000μg/ml,实际应用时应针对不同的细胞系测试Hygromycin B的浓度梯度,确定最佳使用浓度。
pCMV-N-Flag-Hyg质粒(5586bp)的图谱如下:
pCMV-N-Flag-Hyg质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
CMV promoter | 1405-1608 |
T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
Flag tag | 1713-1736 |
Multiple cloning site (XmaI-ApaI) | 1739-1811 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 1857-1875 |
SV40 polyA signal | 2149-2270 |
f1 origin of ss-DNA replication | 2277-2732 |
SV40 promoter | 2865-3222 |
Hygromycin resistance ORF | 3257-4282 |
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4514-4561 |
pUC origin | 4890-5478 |
pCMV-N-Flag-Hyg的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2777 pCMV-N-Flag-Hyg.pdf
pCMV-N-Flag-Hyg中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag-Hyg)包括:
Afe I | Afl II | Age I | Asc I | Bae I | BbsI |
BbvC I | Blp I | BmgB I | Bpu10 I | Bsg I | BsiW I |
BsmB I | BspQ I | BsrG I | BssH II | BstE II | BstZ17 I |
EcoN I | Esp3 I | Fse I | Kas I | Msc I | Nar I |
Nru I | PflM I | PluT I | Pme I | Pml I | PpuM I |
PspX I | Sap I | Sbf I | Sfo I | SgrA I | Swa I |
Xcm I |
pCMV-N-Flag-Hyg中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag-Hyg once)包括:
AccI | GT`MK,AC | 1777 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
AleI | CACNN|NNGTG | 1695 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
ApaI | G,GGCC`C | 1806 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1788 |
AsiSI | GCG,AT`CGC | 3619 | PciI | A`CATG,T | 5534 |
BamHI | G`GATC,C | 1746 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3761 |
BcgI | NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 639 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3284 |
BclI | T`GATC,A | 2042 | PspOMI | G`GGCC,C | 1806 |
BglII | A`GATC,T | 1782 | PstI | C,TGCA`G | 1758 |
BmtI | G,CTAG`C | 1631 | PvuII | CAG|CTG | 2883 |
BsaXI | NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2432 | RsrII | CG`GWC,CG | 3665 |
BseRI | GAGGAG(N)8,NN` | 3201 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
BspDI | AT`CG,AT | 3225 | SacII | CC,GC`GG | 1694 |
BstBI | TT`CG,AA | 4298 | SalI | G`TCGA,C | 1776 |
BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1693 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3157 |
ClaI | AT`CG,AT | 3225 | SmaI | CCC|GGG | 1741 |
CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
EarI | CTCTTCN`NNN, | 931 | SpeI | A`CTAG,T | 1800 |
Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | SrfI | GCCC|GGGC | 1741 |
EcoRI | G`AATT,C | 1764 | StuI | AGG|CCT | 3206 |
EcoRV | GAT|ATC | 1772 | TspMI | C`CCGG,G | 1739 |
HindIII | A`AGCT,T | 1752 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3761 |
HpaI | GTT|AAC | 2148 | XbaI | T`CTAG,A | 1794 |
MfeI | C`AATT,G | 2135 | XhoI | C`TCGA,G | 1788 |
MluI | A`CGCG,T | 2271 | XmaI | C`CCGG,G | 1739 |
NdeI | CA`TA,TG | 1274 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
pCMV-N-Flag-Hyg质粒中对插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1857-1875): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-N-Flag-Hyg的全序列信息:D2777 pCMV-N-Flag-Hyg-seq.txt
不同真核表达质粒的比较和选择,以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页:
https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2777-1μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 1μg |
D2777-100μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
ST1389-50mg | Hygromycin B(潮霉素B) | 50mg |
ST1389-250mg | Hygromycin B(潮霉素B) | 250mg |
ST1389-1g | Hygromycin B(潮霉素B) | 1g |
ST1389-5g | Hygromycin B(潮霉素B) | 5g |
D2771-1μg | pCMV-N-Flag-Bla | 1μg |
D2771-100μg | pCMV-N-Flag-Bla | 100μg |
D2772-1μg | pCMV-N-HA-Bla | 1μg |
D2772-100μg | pCMV-N-HA-Bla | 100μg |
D2773-1μg | pCMV-N-Myc-Bla | 1μg |
D2773-100μg | pCMV-N-Myc-Bla | 100μg |
D2774-1μg | pCMV-C-Flag-Bla | 1μg |
D2774-100μg | pCMV-C-Flag-Bla | 100μg |
D2775-1μg | pCMV-C-HA-Bla | 1μg |
D2775-100μg | pCMV-C-HA-Bla | 100μg |
D2776-1μg | pCMV-C-Myc-Bla | 1μg |
D2776-100μg | pCMV-C-Myc-Bla | 100μg |
D2777-1μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 1μg |
D2777-100μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 100μg |
D2778-1μg | pCMV-N-HA-Hyg | 1μg |
D2778-100μg | pCMV-N-HA-Hyg | 100μg |
D2779-1μg | pCMV-N-Myc-Hyg | 1μg |
D2779-100μg | pCMV-N-Myc-Hyg | 100μg |
D2780-1μg | pCMV-C-Flag-Hyg | 1μg |
D2780-100μg | pCMV-C-Flag-Hyg | 100μg |
D2781-1μg | pCMV-C-HA-Hyg | 1μg |
D2781-100μg | pCMV-C-HA-Hyg | 100μg |
D2782-1μg | pCMV-C-Myc-Hyg | 1μg |
D2782-100μg | pCMV-C-Myc-Hyg | 100μg |
D2783-1μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 1μg |
D2783-100μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 100μg |
D2784-1μg | pCMV-N-HA-Zeo | 1μg |
D2784-100μg | pCMV-N-HA-Zeo | 100μg |
D2785-1μg | pCMV-N-Myc-Zeo | 1μg |
D2785-100μg | pCMV-N-Myc-Zeo | 100μg |
D2786-1μg | pCMV-C-Flag-Zeo | 1μg |
D2786-100μg | pCMV-C-Flag-Zeo | 100μg |
D2787-1μg | pCMV-C-HA-Zeo | 1μg |
D2787-100μg | pCMV-C-HA-Zeo | 100μg |
D2788-1μg | pCMV-C-Myc-Zeo | 1μg |
D2788-100μg | pCMV-C-Myc-Zeo | 100μg |
D2789-1μg | pCMV-N-Flag-Pur | 1μg |
D2789-100μg | pCMV-N-Flag-Pur | 100μg |
D2790-1μg | pCMV-N-HA-Pur | 1μg |
D2790-100μg | pCMV-N-HA-Pur | 100μg |
D2791-1μg | pCMV-N-Myc-Pur | 1μg |
D2791-100μg | pCMV-N-Myc-Pur | 100μg |
D2792-1μg | pCMV-C-Flag-Pur | 1μg |
D2792-100μg | pCMV-C-Flag-Pur | 100μg |
D2793-1μg | pCMV-C-HA-Pur | 1μg |
D2793-100μg | pCMV-C-HA-Pur | 100μg |
D2794-1μg | pCMV-C-Myc-Pur | 1μg |
D2794-100μg | pCMV-C-Myc-Pur | 100μg |
D2632-1μg | pCMV-C-Flag | 1μg |
D2632-100μg | pCMV-C-Flag | 100μg |
D2639-1μg | pCMV-C-HA | 1μg |
D2639-100μg | pCMV-C-HA | 100μg |
D2650-1μg | pCMV-C-His | 1μg |
D2650-100μg | pCMV-C-His | 100μg |
D2672-1μg | pCMV-C-Myc | 1μg |
D2672-100μg | pCMV-C-Myc | 100μg |
D2722-1μg | pCMV-N-Flag | 1μg |
D2722-100μg | pCMV-N-Flag | 100μg |
D2733-1μg | pCMV-N-HA | 1μg |
D2733-100μg | pCMV-N-HA | 100μg |
D2737-1μg | pCMV-N-His | 1μg |
D2737-100μg | pCMV-N-His | 100μg |
D2756-1μg | pCMV-N-Myc | 1μg |
D2756-100μg | pCMV-N-Myc | 100μg |