产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D2793-1μg | pCMV-C-HA-Pur | 1μg | 888.00元 |
D2793-100μg | pCMV-C-HA-Pur | 100μg | 1169.00元 |
pCMV-C-HA-Pur是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端带有HA标签的目的蛋白的表达质粒。质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3′端含有一个编码HA标签的序列,可以表达含有HA标签的融合蛋白,因此可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。
pCMV-C-HA-Pur质粒为氨苄青霉素抗性和嘌呤霉素(Puromycin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可利用其Puromycin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Puromycin (ST551)可以从碧云天购买。
Puromycin是来源于白黑链霉菌的一种氨基苷类抗生素,可通过打乱核糖体上的肽转运,造成翻译过程中不成熟终止,从而抑制蛋白质合成,抑制或杀死细胞。链霉菌(Streptomyces alboniger)来源的pac基因所编码的嘌呤霉素N-乙酰转移酶 (Puromycin N-acetyl-tranferase)可以催化Puromycin发生乙酰化修饰而失活,使细胞对Puromycin产生抗性。因此,Puromycin可用来筛选成功转染携带Puromycin抗性基因质粒的原核或真核细胞。
Puromycin是一种强效翻译抑制剂,作用迅速。一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞,通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Puromycin抗性的稳定哺乳动物细胞系。推荐工作浓度范围为0.5-5μg/ml,实际使用时应针对不同的细胞系测试Puromycin的浓度梯度,以确定最佳使用浓度。
pCMV-C-HA-Pur质粒(5159bp)的图谱如下:
pCMV-C-HA-Pur质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
CMV promoter | 1405-1608 |
T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
HA tag | 1775-1801 |
Multiple cloning site (SacI-XbaI) | 1685-1774 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 1856-1874 |
SV40 polyA signal | 2148-2269 |
f1 origin of ss-DNA replication | 2276-2731 |
SV40 promoter | 2864-3221 |
Puromycin resistance ORF | 3256-3855 |
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4087-4134 |
pUC origin | 4463-5051 |
pCMV-C-HA-Pur的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2793 pCMV-C-HA-Pur.pdf
pCMV-C-HA-Pur中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-HA-Pur)包括:
Afe I | Age I | Asc I | AsiS I | Bae I | Bbs I |
BbvC I | Blp I | BmgB I | Bsg I | BspQ I | BsrG I |
BstZ17 I | EcoN I | Fse I | Nru I | PflM I | Pme I |
Pml I | PpuM I | PshA I | PspX I | Sap I | Sbf I |
SgrA I | Spe I | Swa I | Xcm I |
pCMV-C-HA-Pur中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-HA-Pur once)包括:
AccI | GT`MK,AC | 1752 | HpaI | GTT|AAC | 2147 |
AflII | C`TTAA,G | 1800 | MfeI | C`AATT,G | 2134 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 135 | MluI | A`CGCG,T | 2270 |
AleI | CACNN|NNGTG | 1695 | MscI | TGG|CCA | 3631 |
ApaI | G,GGCC`C | 1805 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
BamHI | G`GATC,C | 1721 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
BclI | T`GATC,A | 2041 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3907 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1763 |
BglII | A`GATC,T | 1757 | PciI | A`CATG,T | 5107 |
BmtI | G,CTAG`C | 1631 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3298 |
Bpu10I | CC`TNA,GC | 3852 | PspOMI | G`GGCC,C | 1805 |
BseRI | GAGGAG(N)8,NN | 3200 | PstI | C,TGCA`G | 1733 |
BsiWI | C`GTAC,G | 3312 | PvuII | CAG|CTG | 2882 |
BsmBI | CGTCTCN`NNNN | 3648 | RsrII | CG`GWC,CG | 3372 |
BspDI | AT`CG,AT | 3224 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
BspEI | T`CCGG,A | 3369 | SalI | G`TCGA,C | 1751 |
BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3907 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
BssHII | G`CGCG,C | 3711 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3156 |
BstBI | TT`CG,AA | 3871 | SmaI | CCC|GGG | 1716 |
BstEII | G`GTNAC,C | 3390 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1693 | SrfI | GCCC|GGGC | 1716 |
ClaI | AT`CG,AT | 3224 | TspMI | C`CCGG,G | 1714 |
CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3298 |
Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | XbaI | T`CTAG,A | 1769 |
EcoRI | G`AATT,C | 1739 | XhoI | C`TCGA,G | 1763 |
EcoRV | GAT|ATC | 1747 | XmaI | C`CCGG,G | 1714 |
Esp3I | CGTCTCN`NNNN | 3648 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
HindIII | A`AGCT,T | 1727 |
pCMV-C-HA-Pur质粒中对插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer (1654-1672): 5'AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1856-1874): 5'TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-C-HA-Pur的全序列信息:D2793 pCMV-C-HA-Pur-seq.txt
不同真核表达质粒的比较和选择,以及标签和抗性的考虑可以参考如下网页:
https://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001001001004
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2793-1μg | pCMV-C-HA-Pur | 1μg |
D2793-100μg | pCMV-C-HA-Pur | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
ST551-10mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 10mg/ml×1ml |
ST551-50mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 10mg/ml×5ml |
ST551-250mg | Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) | 250mg |
D2771-1μg | pCMV-N-Flag-Bla | 1μg |
D2771-100μg | pCMV-N-Flag-Bla | 100μg |
D2772-1μg | pCMV-N-HA-Bla | 1μg |
D2772-100μg | pCMV-N-HA-Bla | 100μg |
D2773-1μg | pCMV-N-Myc-Bla | 1μg |
D2773-100μg | pCMV-N-Myc-Bla | 100μg |
D2774-1μg | pCMV-C-Flag-Bla | 1μg |
D2774-100μg | pCMV-C-Flag-Bla | 100μg |
D2775-1μg | pCMV-C-HA-Bla | 1μg |
D2775-100μg | pCMV-C-HA-Bla | 100μg |
D2776-1μg | pCMV-C-Myc-Bla | 1μg |
D2776-100μg | pCMV-C-Myc-Bla | 100μg |
D2777-1μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 1μg |
D2777-100μg | pCMV-N-Flag-Hyg | 100μg |
D2778-1μg | pCMV-N-HA-Hyg | 1μg |
D2778-100μg | pCMV-N-HA-Hyg | 100μg |
D2779-1μg | pCMV-N-Myc-Hyg | 1μg |
D2779-100μg | pCMV-N-Myc-Hyg | 100μg |
D2780-1μg | pCMV-C-Flag-Hyg | 1μg |
D2780-100μg | pCMV-C-Flag-Hyg | 100μg |
D2781-1μg | pCMV-C-HA-Hyg | 1μg |
D2781-100μg | pCMV-C-HA-Hyg | 100μg |
D2782-1μg | pCMV-C-Myc-Hyg | 1μg |
D2782-100μg | pCMV-C-Myc-Hyg | 100μg |
D2783-1μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 1μg |
D2783-100μg | pCMV-N-Flag-Zeo | 100μg |
D2784-1μg | pCMV-N-HA-Zeo | 1μg |
D2784-100μg | pCMV-N-HA-Zeo | 100μg |
D2785-1μg | pCMV-N-Myc-Zeo | 1μg |
D2785-100μg | pCMV-N-Myc-Zeo | 100μg |
D2786-1μg | pCMV-C-Flag-Zeo | 1μg |
D2786-100μg | pCMV-C-Flag-Zeo | 100μg |
D2787-1μg | pCMV-C-HA-Zeo | 1μg |
D2787-100μg | pCMV-C-HA-Zeo | 100μg |
D2788-1μg | pCMV-C-Myc-Zeo | 1μg |
D2788-100μg | pCMV-C-Myc-Zeo | 100μg |
D2789-1μg | pCMV-N-Flag-Pur | 1μg |
D2789-100μg | pCMV-N-Flag-Pur | 100μg |
D2790-1μg | pCMV-N-HA-Pur | 1μg |
D2790-100μg | pCMV-N-HA-Pur | 100μg |
D2791-1μg | pCMV-N-Myc-Pur | 1μg |
D2791-100μg | pCMV-N-Myc-Pur | 100μg |
D2792-1μg | pCMV-C-Flag-Pur | 1μg |
D2792-100μg | pCMV-C-Flag-Pur | 100μg |
D2793-1μg | pCMV-C-HA-Pur | 1μg |
D2793-100μg | pCMV-C-HA-Pur | 100μg |
D2794-1μg | pCMV-C-Myc-Pur | 1μg |
D2794-100μg | pCMV-C-Myc-Pur | 100μg |
D2632-1μg | pCMV-C-Flag | 1μg |
D2632-100μg | pCMV-C-Flag | 100μg |
D2639-1μg | pCMV-C-HA | 1μg |
D2639-100μg | pCMV-C-HA | 100μg |
D2650-1μg | pCMV-C-His | 1μg |
D2650-100μg | pCMV-C-His | 100μg |
D2672-1μg | pCMV-C-Myc | 1μg |
D2672-100μg | pCMV-C-Myc | 100μg |
D2722-1μg | pCMV-N-Flag | 1μg |
D2722-100μg | pCMV-N-Flag | 100μg |
D2733-1μg | pCMV-N-HA | 1μg |
D2733-100μg | pCMV-N-HA | 100μg |
D2737-1μg | pCMV-N-His | 1μg |
D2737-100μg | pCMV-N-His | 100μg |
D2756-1μg | pCMV-N-Myc | 1μg |
D2756-100μg | pCMV-N-Myc | 100μg |