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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2933-1μg | pET-Dual-N-GST-PreScission | 1μg | 888.00元 |
| D2933-100μg | pET-Dual-N-GST-PreScission | 100μg | 1169.00元 |
pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与第一个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7 transcription start-1 | 1 |
| GST-taq coding sequence | 71-727 |
| PreScission Protease recognation site sequence | 728-751 |
| Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) | 752-802 |
| T7 promoter-2 | 859-875 |
| T7 transcription start-2 | 876 |
| Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) | 943-1004 |
| S Tag coding sequence | 1011-1055 |
| T7 terminator | 1107-1154 |
| f1 origin | 1192-1639 |
| bla(Ap) coding sequence | 1764-2621 |
| pBR322 origin | 3382 |
| lacI coding sequence | 4576-5658 |
| T7 promoter-1 | 6049-6065 |
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.pdf。
pET-Dual-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括：
| AgeI | AleI | BbvCI | BmgBI | BmtI | BseRI | BsiWI |
| BsmI | Bsu36I | CspCI | NheI | NruI | NsiI | PmeI |
| PmlI | PspAI | RsrII | SacII | SexAI | SfiI | SmaI |
| SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | TspMI | XmaI |
pET-Dual-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括：
| XbaI | T`CTAG,A | 30 | PspXI | VC`TCGA,GB | 999 |
| NcoI | C`CATG,G | 69 | AvaI | C`YCGR,G | 999 |
| MscI | TGG|CCA | 281 | BsoBI | C`YCGR,G | 999 |
| BstBI | TT`CG,AA | 471 | PaeR7I | C`TCGA,G | 999 |
| SwaI | ATTT|AAAT | 501 | XhoI | C`TCGA,G | 999 |
| BamHI | G`GATC,C | 752 | PacI | TTA,AT`TAA | 1072 |
| EcoRI | G`AATT,C | 758 | AvrII | C`CTAG,G | 1078 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 766 | BlpI | GC`TNA,GC | 1096 |
| SacI | G,AGCT`C | 764 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 1421 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 770 | PsiI | TTA|TAA | 1549 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 770 | SspI | AAT|ATT | 1629 |
| AscI | GG`CGCG,CC | 771 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 1833 |
| PstI | C,TGCA`G | 777 | BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 1895 |
| SbfI | CC,TGCA`GG | 777 | BglI | GCCN,NNN`NGGC | 1951 |
| SalI | G`TCGA,C | 783 | FspI | TGC|GCA | 2056 |
| HindIII | A`AGCT,T | 789 | AlwNI | CAG,NNN`CTG | 3027 |
| NotI | GC`GGCC,GC | 796 | BstZ17I | GTA|TAC | 3672 |
| AflII | C`TTAA,G | 808 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3697 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 835 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3697 |
| NdeI | CA`TA,TG | 943 | Bpu10I | CC`TNA,GC | 4334 |
| BglII | A`GATC,T | 950 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4434 |
| MfeI | C`AATT,G | 956 | HpaI | GTT|AAC | 4801 |
| EcoRV | GAT|ATC | 964 | BstEII | G`GTNAC,C | 5121 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 969 | MluI | A`CGCG,T | 5303 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 980 | BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5624 |
| ZraI | GAC|GTC | 989 | SphI | G,CATG`C | 5832 |
| AatII | G,ACGT`C | 987 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5984 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 993 | ClaI | AT`CG,AT | 6028 |
| KpnI | G,GTAC`C | 993 | BspDI | AT`CG,AT | 6028 |
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息：D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt。
不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2933-1μg | pET-Dual-N-GST-PreScission | 1μg |
| D2933-100μg | pET-Dual-N-GST-PreScission | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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