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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2931-1μg | pET-Dual-N-GST | 1μg | 888.00元 |
| D2931-100μg | pET-Dual-N-GST | 100μg | 1169.00元 |
pET-Dual-N-GST是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种蛋白可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点，并在其N端引物设计时加入PreScission蛋白酶识别的八肽序列(LEVLFQGP)，宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物，配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜，第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签的目的蛋白。
pET-Dual-N-GST质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| T7 transcription start-1 | 1 |
| GST-taq coding sequence | 71-727 |
| Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) | 730-780 |
| T7 promoter-2 | 838-854 |
| T7 transcription start-2 | 855 |
| Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) | 922-983 |
| S Tag coding sequence | 990-1034 |
| T7 terminator | 1086-1133 |
| f1 origin | 1171-1618 |
| bla(Ap) coding sequence | 1743-2600 |
| pBR322 origin | 3361 |
| lacI coding sequence | 4555-5637 |
| T7 promoter-1 | 6028-6044 |
pET-Dual-N-GST质粒(6044bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-GST质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2931 pET-Dual-N-GST.pdf。
pET-Dual-N-GST中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括：
| AgeI | AleI | BbvCI | BmgBI | BmtI | BseRI | BsiWI |
| BsmI | Bsu36I | CspCI | NheI | NruI | NsiI | PmeI |
| PmlI | PspAI | RsrII | SacII | SexAI | SfiI | SmaI |
| SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | TspMI | XmaI |
pET-Dual-N-GST中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括：
| XbaI | T`CTAG,A | 30 | AvaI | C`YCGR,G | 978 |
| NcoI | C`CATG,G | 69 | PaeR7I | C`TCGA,G | 978 |
| MscI | TGG|CCA | 281 | XhoI | C`TCGA,G | 978 |
| BstBI | TT`CG,AA | 471 | AvrII | C`CTAG,G | 1057 |
| SwaI | ATTT|AAAT | 501 | BlpI | GC`TNA,GC | 1075 |
| BamHI | G`GATC,C | 730 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 1404 |
| EcoRI | G`AATT,C | 736 | PsiI | TTA|TAA | 1528 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 744 | SspI | AAT|ATT | 1608 |
| SacI | G,AGCT`C | 742 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 1812 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 748 | BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 1874 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 748 | BglI | GCCN,NNN`NGGC | 1930 |
| AscI | GG`CGCG,CC | 749 | FspI | TGC|GCA | 2035 |
| PstI | C,TGCA`G | 755 | AlwNI | CAG,NNN`CTG | 3006 |
| SalI | G`TCGA,C | 761 | BstZ17I | GTA|TAC | 3651 |
| HindIII | A`AGCT,T | 767 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3676 |
| NotI | GC`GGCC,GC | 774 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3676 |
| AflII | C`TTAA,G | 787 | Bpu10I | CC`TNA,GC | 4313 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 814 | PpuMI | RG`GWC,CY | 4413 |
| NdeI | CA`TA,TG | 922 | HpaI | GTT|AAC | 4780 |
| BglII | A`GATC,T | 929 | PspoMI | G`GGCC,C | 5075 |
| MunI | C`AATT,G | 935 | ApaI | G,GGCC`C | 5075 |
| EcoRV | GAT|ATC | 943 | BstEII | G`GTNAC,C | 5100 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 948 | MluI | A`CGCG,T | 5282 |
| AsiSI | GCG,AT`CGC | 959 | BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 5603 |
| ZraI | GAC|GTC | 968 | SphI | G,CATG`C | 5811 |
| AatII | G,ACGT`C | 966 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5963 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 972 | BspDI | AT`CG,AT | 6007 |
| KpnI | G,GTAC`C | 972 | ClaI | AT`CG,AT | 6007 |
| PspXI | VC`TCGA,GB | 978 |
pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
pET-Dual-N-GST的全序列信息：D2931 pET-Dual-N-GST.txt。
不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2931-1μg | pET-Dual-N-GST | 1μg |
| D2931-100μg | pET-Dual-N-GST | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pET-Dual-N-GST质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
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