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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7001S | 超快速DNA连接试剂盒 | 100次 | 248.00元 |
| D7001M | 超快速DNA连接试剂盒 | 500次 | 968.00元 |
超快速DNA连接试剂盒(Instant DNA Ligation Kit)，也被称为瞬时DNA连接试剂盒或即时DNA连接试剂盒，是碧云天研发的一种把粘末端或平末端DNA片段在室温(20-25℃)短至0-1分钟内快速插入到载体(Vector)中的连接试剂盒。同时本试剂盒也可以用于其它各种常规的双链DNA连接反应。
本试剂盒可以用于PCR片段和载体的连接、酶切产物和载体的连接、linker和载体的连接、linker和linker的连接等各种双链DNA的连接。
为了获得快速高效的连接效果，本试剂盒采用了一种特殊的高活力Instant T4 DNA Ligase以及相应的Instant Ligation Buffer。通常连接0-1分钟和连接60min的效果相近。本试剂盒用于双平端片段插入到pUC18载体的连接，后续转化DH5α感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果参考图1A，菌落PCR鉴定结果参考图1B。
图1. 碧云天超快速DNA连接试剂盒(D7001)用于平末端DNA连接的效果图。本试剂盒用于平末端片段插入到载体的连接，随后转化涂板的效果见图A。在20µl反应体系中，将SmaI单酶切线性化并用D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)去除末端磷酸根的载体pUC18与PCR扩增的1100bp双平端DNA片段混合(载体与DNA片段的摩尔比为1:3)，然后加入4µl的5X Instant Ligation Buffer，1µl Instant T4 DNA Ligase，并用水补足至20µl，室温反应0min、1min、5min、60min。然后取10µl转化到100µl的DH5α感受态细胞中，随后涂板。如图所示，连接0、1、5或60min后转化后得到的克隆数相近。菌落PCR鉴定使用本试剂盒连接获得的克隆效果见图B。菌落PCR引物为M13 forward sequencing primer (5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')和M13 reverse sequencing primer (5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3')。如图所示，0min连接阳性率可达100%，连接时间越长，阳性率略有减少趋势，连接60min后，阳性率达60%。实际检测效果会因实验条件的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
在确保连接效果的同时，确保完成连接后不必进行任何纯化即可直接转化细菌。另外，Instant Ligation Buffer中已经含有ATP、镁离子等各种必需物质，无需再添加其它任何试剂。
本试剂盒用于总体积为10µl的连接体系时，小包装和中包装分别可以进行100个和500个连接反应；用于总体积为20µl的连接体系时，小包装和中包装分别可以进行50个和250个连接反应。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7001S-1 | Instant Ligation Buffer (5X) | 250µl |
| D7001S-2 | Instant T4 DNA Ligase | 50µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7001M-1 | Instant Ligation Buffer (5X) | 1.25ml |
| D7001M-2 | Instant T4 DNA Ligase | 250µl |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存，至少一年有效。
注意事项：连接反应完成后即可直接转化细菌，请勿加热失活Instant T4 DNA Ligase。加热处理会导致后续的转化效率显著下降。
对于载体单酶切插入外源片段的情况，需注意对载体使用磷酸酶，如D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)或D7027 BeyoAP Alkaline Phosphatase进行脱磷处理，以避免质粒自连。
Instant Ligation Buffer (5X)使用前一定要完全溶解并混匀，加入到连接体系后也须注意混匀。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Amount | Amount |
| Vector | 25-50ng | 50-100ng |
| Insert | 3:1 (mole ratio) VS Vector | 3:1 (mole ratio) VS Vector |
| Instant Ligation Buffer (5X) | 2µl | 4µl |
| Ultrapure Water | To 9.5µl | To 19µl |
| Instant T4 DNA Ligase | 0.5µl | 1µl |
| Total volume | 10µl | 20µl |
| Reagent | Amount | Amount |
| T vector | As recommended | As recommended |
| Insert | 3:1 (mole ratio) VS Vector | 3:1 (mole ratio) VS Vector |
| Instant Ligation Buffer (5X) | 2µl | 4µl |
| Ultrapure water | To 9.5µl | To 19µl |
| Instant T4 DNA Ligase | 0.5µl | 1µl |
| Total volume | 10µl | 20µl |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7002 | 快速DNA连接试剂盒 | 100次 |
| D7003 | 快速DNA连接试剂盒 | 500次 |
| D7006 | T4 DNA Ligase | 40,000U |
| D7008 | T4 DNA Ligase | 200,000U |
| D7009S | Instant T4 DNA Ligase | 40kU |
| D7009M | Instant T4 DNA Ligase | 200kU |
| D7018S | PBCV-1 DNA Ligase | 1250U |
| D7018M | PBCV-1 DNA Ligase | 5kU |
| D7018L | PBCV-1 DNA Ligase | 25kU |
| D7028S | Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) | 1000U |
| D7028M | Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) | 5000U |
| D7010S | Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒) | 20次 |
| D7010M | Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒) | 100次 |
| D0033 | PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒 | 50次 |
| D0056 | DNA凝胶回收试剂盒 | 50次 |
| D0041S | BeyoMag™磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒 | 50次 |
| D0041M | BeyoMag™磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒 | 200次 |
| D0043S | BeyoMag™磁珠法DNA凝胶回收试剂盒 | 50次 |
| D0043M | BeyoMag™磁珠法DNA凝胶回收试剂盒 | 200次 |
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