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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7009S | Instant T4 DNA Ligase | 40kU | 69.00元 |
| D7009M | Instant T4 DNA Ligase | 200kU | 268.00元 |
碧云天研发的Instant T4 DNA Ligase，即超快速T4 DNA连接酶，是T4 DNA连接酶的升级版本，可以快速高效催化粘端或平端双链DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时Instant T4 DNA Ligase可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合双链中的单链缺刻(single-strand nicks)。
用途：Instant T4 DNA Ligase常用于DNA片段和载体、linker或adaptor等的连接。也可用于缺刻修复及Ligase介导的RNA检测。
来源：本Instant T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因为T4嗜菌体T4 DNA Ligase基因的突变体。
活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of λ DNA in 30min at 16℃ in 20µl of the assay mixture containing 50mM Tris, pH7.5, 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1mM ATP, 25µg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12µM (300µg/ml)。200U等于1个Weiss unit，以Weiss unit计，本产品的包装分别为200U和1000U。
Instant T4 DNA Ligase和T4 DNA Ligase分别进行平末端连接后，连接产物转化感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果和菌落PCR鉴定结果参考图1。
图1. 碧云天Instant T4 DNA Ligase (D7009)和T4 DNA Ligase (D7006/D7008)的平末端连接实测效果图。如图所示，左侧为将Instant T4 DNA Ligase和T4 DNA Ligase分别用于平端连接后转化DH5α感受态细胞后涂板获得的LB平板的实测效果图，右侧为菌落PCR鉴定的结果。在20µl反应体系中，将SmaI单酶切线性化并用D7028 Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)去除末端磷酸根的载体pUC18，与PCR扩增的1100bp双平端DNA片段混合(载体与DNA片段的摩尔比为1:3)，然后加入2µl的10X Ligation Buffer, 0.5µl的Instant T4 DNA Ligase或T4 DNA Ligase，并用水补足至20µl，分别在16℃孵育1h后，取10µl转化到100µl的DH5α感受态细胞中。实验结果表明，Instant T4 DNA Ligase连接1小时得到的克隆数相当，Instant T4 DNA Ligase连接1h的阳性率可达100%，而T4 DNA Ligase连接1h的阳性率约为60%。菌落PCR引物为M13 forward sequencing primer (5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3')和M13 reverse sequencing primer (5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3')。实际检测效果会因实验条件的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规连接反应要求。
酶储存溶液：20mM Tris, pH7.5, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。
10X Ligation Buffer：400mM Tris, pH7.8, 100mM MgCl2, 100mM DTT, 10mM ATP。
失活或抑制：65℃孵育10min可以导致Instant T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl浓度大于200mM时会强烈抑制Instant T4 DNA Ligase。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7009S-1 | Instant T4 DNA Ligase (1kU/µl) | 40μl |
| D7009S-2 | 10X Ligation Buffer | 200µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7009M-1 | Instant T4 DNA Ligase (1kU/µl) | 200μl |
| D7009M-2 | 10X Ligation Buffer | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存，至少一年有效。
注意事项：对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后再进行电转。
需快速连接时，推荐使用碧云天的超快速DNA连接试剂盒(D7001)或快速DNA连接试剂盒(D7002/D7003)。
普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在65℃孵育10min使Instant T4 DNA Ligase失活，以避免Instant T4 DNA Ligase和DNA结合导致的条带位置迁移(Band shift)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Reagent | Amount |
| Vector | 50-100ng |
| Insert | 3:1 (mole ratio) VS Vector |
| 10X Ligation Buffer | 2µl |
| Ultrapure Water | To 20µl |
| Instant T4 DNA Ligase | 0.2-0.5µl |
| Total volume | ~20µl |
| Reagent | Amount |
| T vector | As recommended |
| Insert | 3:1 (mole ratio) VS Vector |
| 10X Ligation Buffer | 2µl |
| Ultrapure Water | To 20µl |
| Instant T4 DNA Ligase | 0.2-0.5µl |
| Total volume | ~20µl |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D7001S | 超快速DNA连接试剂盒 | 100次 |
| D7001M | 超快速DNA连接试剂盒 | 500次 |
| D7002 | 快速DNA连接试剂盒 | 100次 |
| D7003 | 快速DNA连接试剂盒 | 500次 |
| D7006 | T4 DNA Ligase | 40,000U |
| D7008 | T4 DNA Ligase | 200,000U |
| D7018S | PBCV-1 DNA Ligase | 1250U |
| D7018M | PBCV-1 DNA Ligase | 5kU |
| D7018L | PBCV-1 DNA Ligase | 25kU |
| D7028S | Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) | 1000U |
| D7028M | Antarctic Phosphatase (Thermosensitive) | 5000U |
| D7010S | Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒) | 20次 |
| D7010M | Seamless Cloning Kit (无缝克隆试剂盒) | 100次 |
| D0033 | PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒 | 50次 |
| D0056 | DNA凝胶回收试剂盒 | 50次 |
| D0041S | BeyoMag™磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒 | 50次 |
| D0041M | BeyoMag™磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒 | 200次 |
| D0043S | BeyoMag™磁珠法DNA凝胶回收试剂盒 | 50次 |
| D0043M | BeyoMag™磁珠法DNA凝胶回收试剂盒 | 200次 |
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