产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
P1215S | BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) | 50-500次 | 1698.00元 |
P1215L | BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) | 200-2000次 | 5068.00元 |
碧云天研发生产的BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) (BeyoClick™ HPG Protein Synthesis Kit by Western Blot),也称BeyoClick™ HPG新生蛋白质检测试剂盒(WB法) (BeyoClick™ HPG Nascent Protein Assay Kit by Western Blot),是一种基于蛋白合成过程中蛋氨酸(Methionine)类似物HPG(L-homopropargylglycine)的掺入,并通过随后的点击反应(Click reaction)使HPG被Biotin-azide所标记,从而通过Western blot实现简单、快速、高灵敏地检测新合成蛋白的试剂盒。
本试剂盒可以定量检测培养的活细胞中新生蛋白质的合成[1-2]。该检测过程不需要放射性同位素(如35S-methionine)和抗体,只需要简单的两步反应即可完成。新生蛋白质又称新生蛋白、新生成蛋白质、初生蛋白质或新合成蛋白。
HPG (L-homopropargylglycine),中文名为L-高炔丙基甘氨酸,是一种蛋氨酸(Methionine)类似物,HPG可以在蛋白合成过程中替代蛋氨酸掺入到新合成的蛋白中。另一方面,HPG上的炔基能与生物素或荧光标记的小分子叠氮化物(如Biotin Azide、Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速高效,被称作点击反应(Click reaction),其反应原理参见图1。通过点击反应,新合成的蛋白会被生物素或相应的荧光探针所标记,从而可以使用适当的检测方法检测到新合成蛋白。本试剂盒处理后,新合成的蛋白标记上Biotin Azide,经Western blot后,可用Streptavidin-HRP识别并检测。
图1.碧云天BeyoClick™系列蛋白合成检测试剂盒中的点击反应(Click reaction)原理图。生物素或相应的荧光探针等标记的叠氮化物(Labeled Azide)与掺入到细胞蛋白中的HPG,在铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,最终使细胞蛋白标记上荧光探针或其它探针。
本试剂盒反应简单、检测灵敏度高。本试剂盒基于简单高效的点击反应,无需特殊温度,只需少量的Biotin Azide即可非常有效地标记掺入到新合成蛋白质的HPG。
本试剂盒使用便捷、兼容性好。本试剂盒只需裂解细胞,就可与Biotin Azide发生点击反应,不会产生多余的附加产物。可以兼容后续的抗体孵育和质谱检测。
本试剂盒操作流程请参考图2。
图2.碧云天BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) (P1215)实验操作流程图。
本试剂盒检测HeLa细胞新合成蛋白的效果参见图3。
图3.碧云天BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) (P1215)检测HeLa细胞新合成蛋白的效果图。HPG孵育0.5小时后裂解细胞进行Western blot检测,无HPG组无条带(图A样品1);HPG组有明显的条带(图A样品2);而用蛋白合成抑制剂茴香霉素(Ansiomycin) (50μM)提前预处理0.5小时后,无明显条带,说明蛋白合成抑制后,HPG的掺入被显著抑制(图A样品3)。图B为电泳后考马斯亮蓝染色总蛋白结果,三组均可以观察到明显的条带。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
本试剂盒小包装如果用于6孔板培养细胞的检测,可以检测50个样品,每个样品的反应体系为500μl的Click反应液;如果用于96孔板检测,可以检测500个样品,每个样品的检测体系为50μl的Click反应液;如果用于12孔、24孔或48孔板样品的检测,分别可以检测125、250和350个样品,每个样品推荐的Click反应液用量为200μl、100μl和70μl。大包装可检测样品的数量为小包装的4倍。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P1215S-1 | HPG (100X) | 1.1ml |
P1215S-2 | 细胞裂解液 | 11ml |
P1215S-3 | Biotin Azide | 200μl |
P1215S-4 | Click Reaction Buffer | 10ml |
P1215S-5 | CuSO4 | 0.25ml |
P1215S-6 | Click Additive | 1管 |
P1215S-7 | Streptavidin-HRP | 100μl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P1215L-1 | HPG (100X) | 4.4ml |
P1215L-2 | 细胞裂解液 | 44ml |
P1215L-3 | Biotin Azide | 800μl |
P1215L-4 | Click Reaction Buffer | 40ml |
P1215L-5 | CuSO4 | 1ml |
P1215L-6 | Click Additive | 1瓶 |
P1215L-7 | Streptavidin-HRP | 400μl |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,一年有效。Biotin Azide须避光保存。
注意事项:Click Additive配制成溶液后请注意适当分装冻存。如果溶解后有白色物质析出,请上下颠倒多次,待全部溶解后使用。如果该溶液颜色变成棕色,说明该组分的有效成分已失效,请弃用。
如果需要使用茴香霉素(Anisomycin)作为对照,可以从碧云天订购Anisomycin (JNK激活剂) (SC0132)。
如果需要更多HPG,可以从碧云天订购L-Homopropargylglycine (HPG) (≥98%, BioReagent) (ST2057)。
含蛋氨酸培养液和血清因为含正常蛋氨酸,所以会竞争性影响HPG的掺入,进而影响Western蛋白条带的强度,推荐使用DMEM高糖培养液(无蛋氨酸) (C0891)或RPMI 1640培养液(无蛋氨酸) (C0893)。
由于动物体内无法去除内源蛋氨酸,所以本试剂盒不建议用于动物组织切片样品的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Components | Volume |
Click Reaction Buffer | 122μl |
CuSO4 | 4μl |
Biotin Azide | 4μl |
Click Additive Solution | 20μl |
Total Volume | 150μl |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C0071S/L | BeyoClick™ EdU-488细胞增殖检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
C0075S/L | BeyoClick™ EdU-555细胞增殖检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
C0078S/L | BeyoClick™ EdU-594细胞增殖检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
C0081S/L | BeyoClick™ EdU-647细胞增殖检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
C0085S/L | BeyoClick™ EdU细胞增殖检测试剂盒(DAB法) | 50-500/200-2000次 |
C0088S/L | BeyoClick™ EdU细胞增殖检测试剂盒(TMB法) | 500/2000次 |
R0301S/L | BeyoClick™ EU-488 RNA合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
R0305S/L | BeyoClick™ EU-555 RNA合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
R0309S/L | BeyoClick™ EU-594 RNA合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
R0311S/L | BeyoClick™ EU-647 RNA合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
P1202S/L | BeyoClick™ HPG-488蛋白合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
P1206S/L | BeyoClick™ HPG-555蛋白合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
P1209S/L | BeyoClick™ HPG-594蛋白合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
P1213S/L | BeyoClick™ HPG-647蛋白合成检测试剂盒 | 50-500/200-2000次 |
P1215S/L | BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) | 50-500/200-2000次 |
P1217S/L | BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(DAB法) | 50-500/200-2000次 |
C0891-100ml/500ml | DMEM高糖培养液(无蛋氨酸) | 100ml/500ml |
C0893-100ml/500ml | RPMI 1640培养液(无蛋氨酸) | 100ml/500ml |
ST067-50mg/250mg/1g | EdU | 50mg/250mg/1g |
ST2055-50mg/250mg/1g | 5-Ethynyl Uridine (EU) (≥98%, BioReagent) | 50mg/250mg/1g |
ST2057-5mg/25mg/100mg | L-Homopropargylglycine (HPG) (≥98%, BioReagent) | 5mg/25mg/100mg |