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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| P2065S | Active Rho Pull-down and Detection Kit | 50次 | 3798.00元 |
| P2065M | Active Rho Pull-down and Detection Kit | 250次 | 15198.00元 |
碧云天生产的Active Rho Pull-down and Detection Kit，也称活性Rho结合沉淀与检测试剂盒，是一种便捷、高效的用于定量检测组织或细胞裂解液中激活状态(Active state) Rho蛋白(包括RhoA、RhoB和RhoC)的试剂盒。本试剂盒基于Rhotekin-RBD Agarose (活性Rho结合琼脂糖凝胶)特异性地结合沉淀(Pull-down)激活状态的Rho蛋白，然后通过Western检测Rho蛋白的激活水平(图1)。
图1. 碧云天Active Rho Pull-down and Detection Kit (P2065)的Pull-down工作原理图。洗脱产物后续可以用于Western检测。
Rhotekin是与Rho蛋白(包括RhoA、RhoB和RhoC)相互作用的一种下游效应蛋白(Effector protein)，可控制神经前体细胞的增殖、神经突的生长和突触形成等多种细胞活动。Rhotekin中的“teki”来源于日语“目标”。Rhotekin全长563个氨基酸，理论分子量为61kDa，含有4个结构域：激活状态Rho的结合结构域(Active Rho-binding domain, RBD)、PH结构域(Pleckstrin homology)和2个脯氨酸富含区结构域(Proline-rich motifs)。Rhotekin的RBD结构域可以特异性的识别并结合激活状态的Rho蛋白，但不结合静息状态的Rho蛋白，因此Rhotekin-RBD重组蛋白可用于检测激活状态的Rho蛋白，在体内或体外也可以作为Rho蛋白的抑制剂使用[1]。
小GTP酶(Small GTPase)，也称Small G-proteins、Ras superfamily，是调节真核细胞信号转导、细胞增殖、细胞骨架重组和细胞内膜转运等过程的分子开关，小GTP酶通过结合和水解GTP，在“激活”和“静息”状态之间循环：在外界信号的刺激下，鸟苷酸交换因子(Guanine nucleotide-exchange factors, GEFs)辅助小GTP酶将结合的GDP置换为GTP，小GTP酶结合GTP进入激活状态(Active state)；激活状态的小GTP酶与下游效应蛋白(Effector protein)相互作用，从而刺激细胞发生相应的响应；GTP酶激活蛋白(GTPase-activating proteins, GAPs)催化小GTP酶结合的GTP水解为GDP，并释放自由磷酸盐(Free phosphate, Pi)，此时小GTP酶结合GDP进入静息状态(Inactive state)，鸟嘌呤核苷酸解离抑制蛋白(Guanine nucleotide dissociation inhibitors, GDIs)抑制小GTP酶释放GDP，直到GEFs受到刺激信号再次开启新一轮的循环(图2) [2-3]。
图2. 小GTP酶在“激活”和“静息”状态之间循环的原理图。
小GTP酶在人类中已发现超过150个家族成员，在果蝇(Drosophila)、秀丽隐杆线虫(C. elegans)、酿酒酵母(S. cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(S. pombe)、黏菌(Dictyostelium)和植物中也都发现了保守的同源物。小GTP酶根据结构和功能被分为5个家族分支：Ras家族、Rho家族、Ran家族、Rab家族和Arf家族。Ras家族本身又被分为6个亚家族：Ras亚家族、Ral亚家族、Rit亚家族、Rap亚家族、Rheb亚家族和Rad亚家族[4]。
Rho家族(Ras homologous GTPases)在真核生物中高度保守，是调节肌动蛋白重组的关键因子，因此在细胞迁移、伤口愈合、细胞粘附、细胞极性、膜转运和细胞分裂等过程中发挥着重要作用。目前有21个成员被发现，被分为8亚家族(见下表)，其中RhoA、Rac1和Cdc42研究的最为广泛[5]。
| Subfamily | Rho | Rac | Cdc42 | RhoH | RhoBTB | RhoUV | Rnd | RhoF |
| Rho family members |
RhoA RhoB RhoC |
Rac1 Rac2 Rac3 RhoG |
Cdc42 RhoQ (TC10) RhoJ (TCL) |
RhoH |
RhoBTB1 RhoBTB2 RhoBTB3 |
RhoU (Wrch) RhoV (Chp) |
Rnd1 Rnd2 Rnd3 (RhoE) |
RhoD RhoF (Rif) |
本试剂盒检测NIH 3T3细胞内源性激活状态RhoA蛋白的效果见图3。实验采用GppNHp (鸟苷酰亚胺二磷酸锂)作为GTP替代物，GppNHp与GTPγS类似，都是一种不可水解的GTP类似物[6]。
图3. 碧云天Active Rho Pull-down and Detection Kit (P2065)用于检测NIH 3T3细胞内源性激活状态RhoA蛋白的效果图。NIH 3T3细胞裂解液分别加入终浓度为1mM GppNHp或GDP使RhoA蛋白处于激活状态(Active state)或静息状态(Inactive state)，随后加入20μl Rhotekin-RBD Agarose，置于旋转混合仪上，4℃孵育1小时。后经离心，洗涤，加入1X SDS-PAGE上样缓冲液95℃加热5分钟，经BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 10孔) (P0468)电泳后进行Western检测，使用RhoA Rabbit Monoclonal Antibody孵育。Western印迹成像使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统完成(EI600)。Control为10ng Recombinant Human RhoA (泳道1，分子量略大于其它泳道的小鼠样品)，Input为NIH 3T3细胞裂解液(泳道2)。本试剂盒可特异性地结合并Pull-down激活状态的RhoA蛋白(RhoA-GppNHp) (泳道3)，但不结合静息状态的RhoA蛋白(RhoA-GDP) (泳道4)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
Rhotekin-RBD Agarose储存溶液: 50mM HEPES (pH7.4), 150mM NaCl, 5mM MgCl2, 0.5% Triton X-100, 1mM DTT, 10% glycerol.
按照单次使用20μl Rhotekin-RBD Agarose计算，本产品的小包装和中包装分别用于50次和250次实验。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2065S-1 | Rhotekin-RBD Agarose | 1ml |
| P2065S-2 | Recombinant Human RhoA (10ng/μl) | 10μl |
| P2065S-3 | RhoA Rabbit Monoclonal Antibody (1000X) | 20μl |
| P2065S-4 | GppNHp (100X) | 20μl |
| P2065S-5 | GDP (100X) | 20μl |
| P2065S-6 | Cell Lysis Buffer | 50ml |
| P2065S-7 | Wash Buffer | 50ml |
| P2065S-8 | 100mM EDTA (pH8.0) | 200μl |
| P2065S-9 | 500mM MgCl2 | 600μl |
| P2065S-10 | Protease Inhibitor Cocktail (100X) | 100μl |
| － | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2065M-1 | Rhotekin-RBD Agarose | 5ml |
| P2065M-2 | Recombinant Human RhoA (10ng/μl) | 50μl |
| P2065M-3 | RhoA Rabbit Monoclonal Antibody (1000X) | 100μl |
| P2065M-4 | GppNHp (100X) | 100μl |
| P2065M-5 | GDP (100X) | 100μl |
| P2065M-6 | Cell Lysis Buffer | 250ml |
| P2065M-7 | Wash Buffer | 250ml |
| P2065M-8 | 100mM EDTA (pH8.0) | 1ml |
| P2065M-9 | 500mM MgCl2 | 3ml |
| P2065M-10 | Protease Inhibitor Cocktail (100X) | 500μl |
| － | 说明书 | 1份 |
-80℃保存，一年有效。除Rhotekin-RBD Agarose外，-20℃保存，一年有效。Rhotekin-RBD Agarose，-20℃保存3个月内有效，4℃保存一个月内有效。Cell Lysis Buffer、Wash Buffer、100mM EDTA (pH8.0)、500mM MgCl2，4℃保存3个月内有效。
注意事项：Rhotekin-RBD Agarose到货后推荐-80℃冻存，冻融两次有效，避免反复冻融，第一次使用可适当分装。其余试剂可以-20℃冻存。
本试剂盒的使用次数按照单次使用20μl或50μl Rhotekin-RBD Agarose来设置。当使用不同量Rhotekin-RBD Agarose时，其它试剂用量也需要相应按比例进行调整。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| A0208 | 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L) | 1ml |
| AF2179 | RhoA Rabbit Monoclonal Antibody | 50μl |
| P0015B | SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X) | 5ml |
| P0023A-100ml | Western一抗稀释液 | 100ml |
| P0023A-500ml | Western一抗稀释液 | 500ml |
| P0023 | Western溶液套装 | 共400ml |
| P0025B | Western一抗二抗去除液(弱碱性) | 250ml |
| P0025S | Western一抗二抗去除液(酸性) | 250ml |
| P0025N | Western一抗二抗去除液(中性) | 250ml |
| P0025-250ml | Western一抗二抗去除液(强碱性) | 250ml |
| P0025-1L | Western一抗二抗去除液(强碱性) | 1L |
| P0239 | QuickBlock™ Western溶液套装 | 共400ml |
| P0256-100ml | QuickBlock™ Western一抗稀释液 | 100ml |
| P0256-500ml | QuickBlock™ Western一抗稀释液 | 500ml |
| P2061-1ml | Rhotekin-RBD Agarose (活性Rho结合琼脂糖凝胶) | 1ml |
| P0262 | QuickBlock™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P2063-10μg | Recombinant Human RhoA (Flag-Tag) | 10μg |
| P2063-100μg | Recombinant Human RhoA (Flag-Tag) | 100μg |
| P2063-1mg | Recombinant Human RhoA (Flag-Tag) | 1mg |
| P2065S | Active Rho Pull-down and Detection Kit | 50次 |
| P2065M | Active Rho Pull-down and Detection Kit | 250次 |
| P0272-100ml | SignalUp™ Western检测增敏剂 | 100ml |
| P0272-500ml | SignalUp™ Western检测增敏剂 | 500ml |
| P0273-100ml | SignalUp™ Western一抗稀释液 | 100ml |
| P0273-500ml | SignalUp™ Western一抗稀释液 | 500ml |
| P0277-100ml | SignalUp™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0277-500ml | SignalUp™免疫染色一抗稀释液 | 500ml |
| L19945 | RHOA基因敲除质粒 | 5µg |
| L19946 | RHOA基因敲除慢病毒 | 10KU |
| L19947 | RHOA基因敲除HEK293T细胞 | 1支/瓶 |
| L19948 | RHOA基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液 | 100µg |
| L19949 | RHOA基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液 | 500µl |
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