碧云天的增强型NADP+/NADPH检测试剂盒(WST-8法) (Enhanced NADP+/NADPH Assay Kit with WST-8)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中NADP+ (氧化型辅酶II)和NADPH (还原型辅酶II)各自的量、比值和总量的检测试剂盒。

本产品的性能和用途与碧云天生产的普通型NADP+/NADPH检测试剂盒(WST-8法) (S0179)基本相同，但本产品的增强型NADP+/NADPH提取液中添加了特殊的除粘增溶剂，可以有效解决普通型NADP+/NADPH检测试剂盒(WST-8法) (S0179)在提取细胞和组织样品时可能出现的粘稠问题，使得样品易于吸取、操作更加便利。

NADP+/NADPH以及NAD+/NADH的传统检测方法是检测NADPH或者NADH在340nm处吸收波长的变化，该方法灵敏度较低并易受样品中有类似紫外吸收物质的干扰，并且在紫外检测过程中通常需要加大检测样品量以弥补NADPH在340nm处吸光度过小的不足，因此该检测方法具有很大的局限性。

WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。

WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。

本试剂盒使用便捷，无需分离纯化细胞、组织或其它样品中的NADP+和NADPH，且特异性检测NADP+和NADPH，而不检测NAD+和NADH。本试剂盒可以检测含量低至0.05μM (2.5pmol)的NADP+或NADPH，在0.05μM (2.5pmol)至6μM (300pmol)之间呈现良好的线性关系。

NADP (Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)是很多氧化还原反应的辅酶，包括NADP+ (氧化型)和NADPH (还原型)两种形式。NADP+也参与到生物合成反应中，比如脂质和核酸的合成。在动物细胞中，戊糖磷酸途径(pentose phosphate pathway，PPP)的氧化阶段是NADPH最主要的来源。

本试剂盒可检测样品中的NADP+、NADPH以及它们的比值，具体原理如下：

a.测定NADP+/NADPH的总量：葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate, G6P)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸内酯(6-phosphogluconate, 6-PG)，在这一反应过程中NADP+被还原为NADPH；生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的formazan，在450nm左右检测有最大吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中总的NADP+/NADPH的总量呈比例关系。WST-8法检测NADP+和NADPH总量的原理参考图1。

b.单独测定NADPH的量：60ºC水浴加热30分钟后，样品中NADP+会分解而只保留NADPH。NADPH将WST-8还原成formazan，通过比色法确定反应生成的formazan的量，最终可以确定样品中NADPH的量。

c.测定NADP+以及NADP+/NADPH比值：根据前两步检测获得的NADP+和NADPH总量以及NADPH的量，即可得到样品中NADP+的量以及NADP+/NADPH的比值。

图1.增强型NADP+/NADPH检测试剂盒(WST-8法) (S0180)的工作原理图。

本试剂盒适用于检测细胞、组织以及其它适当样品中的NADP+和NADPH各自的量、比值和总量。

本试剂盒提供的增强型NADP+/NADPH提取液有一定的通用性。使用本试剂盒中的增强型NADP+/NADPH提取液提取获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的增强型NAD+/NADH检测试剂盒(WST-8法) (S0176)的检测。

当仅检测NADP+和NADPH的总量或者样品中的NADPH的量时，一个本试剂盒可以进行100次检测；当检测NADP+或者NADP+/NADPH的比值时，一个本试剂盒可以进行50次检测。

-20ºC保存，一年有效。显色液(S0180-2)和NADPH (S0180-3)须-20ºC避光保存。NADPH配制成溶液后，须适当分装后-80ºC保存。所有试剂避免反复冻融。

本试剂盒中的所有试剂均需要冷冻保存，请严格按照保存条件进行保存。如果不是一次用完，为避免反复冻融导致产品失效，请适当分装后保存。

NADPH不太稳定，取出NADPH后请尽快使用。如果发现标准曲线不理想，很有可能是标准品发生了降解。

由于增强型NADP+/NADPH提取液本身比较粘稠，以该提取液作为稀释液时，无论对标准品还是样品进行稀释，在稀释过程中务必保证稀释均匀，否则易造成实验数据产生较大波动。

经测试，尽管本试剂盒中的增强型NADP+/NADPH提取液冻融3次、4℃保存7天对其除粘增溶活性无显著影响，为保证本产品的稳定性、取得良好的使用效果，第一次解冻后可以采取适当分装低温保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。在反复冻融或室温存放过程中，可能会导致增强型NADP+/NADPH提取液中的除粘增溶剂逐渐失效，进而影响本产品的使用效果。

细胞或组织样品的提取，请按照每100万个细胞或10mg组织加入200μl提取液的比例加入增强型NADP+/NADPH提取液。通常情况下，本产品中的的增强型NADP+/NADPH提取液加入样品后作用数秒粘稠状就会消失，由于样品种类、提取液的加入比例等实验条件的差异，本产品加入后粘稠状消失的时间可能会有所不同。

在样品加样和混匀过程中，须尽量避免产生气泡，以免影响最终的吸光度测定。

如果不能非常严格地控制反应温度和反应时间，每次检测都需要设置标准曲线。

如果样品溶液中NADP+和NADPH浓度过高或过低，不在试剂盒的线性检测范围内时，可适当调整样品或者提取液的用量。

由于NADP+和NADPH很不稳定，在冻存过程中较易降解，所以宜尽量使用新鲜样品进行检测。如果需要进行样品中NADP+以及NADP+/NADPH比值的测定，在样品加热30分钟以分解NADP+的过程中，可以先进行样品中NADP+和NADPH的总量的测定，即将NADP+和NADPH的总量的测定和单独NADPH的测定分开进行，尽量减少样品在等待过程中因为可能的降解导致的误差。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。