产品简介
产品简介:
碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),即DNA寡核苷酸退火缓冲液,是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,极易自身形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本试剂盒操作非常简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约90分钟即可完成。
如果一次退火反应体积为100微升,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D0251 |
Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) |
1ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) 只适合于DNA oligo的退火,不能用于RNA oligo 的退火。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明:
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for
DNA Oligos(5X),混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:
Nuclease-Free Water |
40μl |
Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) |
20μl |
DNA oligo A(50μM) |
20μl |
DNA oligo B(50μM) |
20μl |
总体积 |
100μl |
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的PCR仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止
蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:
步骤 |
温度 |
时间 |
说明 |
1 |
95℃ |
2分钟 |
让oligo充分变性 |
2 |
每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) |
约90分钟 |
退火 |
3 |
4℃ |
长时间保持 |
暂时存放 |
注1:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反
应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing
Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
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