支原体染色检测试剂盒/Mycoplasma Stain Assay Kit

产品简介

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
C0296	支原体染色检测试剂盒	>100次	255.00元

    支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是用于在培养细胞中原位染色检测支原体或其它原核生物的试剂盒。主要用于检测培养细胞中是否存在支原体污染。
    培养细胞中的细菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光学显微镜下可见，但支原体污染在光学显微镜下不可见，必须通过特定的检测方法进行检测。
    检测支原体污染的方法有很多种，包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、RT-PCR检测以及DNA荧光染色检测。上述检测方法中，除DNA荧光染色检测外操作步骤相对比较烦琐并且所需时间较长。本支原体染色检测试剂盒是通过Hoechst染色来检测支原体的。本试剂盒的荧光染色可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染。

    本试剂盒的检测效果图参考上图。左图为无支原体污染情况，中图为支原体轻度污染情况，箭头所指为微粒状的一些支原体，右图为支原体重度污染情况，可见大量微粒状的支原体。
    如果发现有支原体污染，建议更换无污染的细胞进行培养。如果有必要去除支原体，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原体污染。
    本试剂盒如用于六孔板样品检测，至少可以检测100个样品。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C0296-1	固定液	100ml
C0296-2	Hoechst染色液	10ml
C0296-3	抗荧光淬灭封片液	10ml
—	说明书	1份

保存条件：
    4℃保存，一年有效，其中Hoechst染色液需避光保存。
注意事项：
    Hoechst染色试剂对人体有害，请注意适当防护。
    固定液含有乙酸，有刺激性气味，宜在通风橱内进行固定操作。
    荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
    检测支原体前最好用不含抗生素的培养液培养2-3代，这样更容易检测出支原体，因为一些抗生素可以抑制支原体生长。
    需自备PBS。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明：
1．细胞样品的准备：
    a. 对于贴壁细胞，在六孔板或其它多孔板内或盖玻片上培养细胞至50%-80%满。
       细胞培养过满会导致很难判断是否存在支原体污染。
    b. 对于悬浮细胞，离心沉淀细胞，取少量细胞做细胞涂片，空气中充分晾干。
2．用PBS按照1:10稀释Hoechst染色液(1体积Hoechst染色液加入9体积PBS)。
    稀释后的Hoechst染色液宜在24小时内使用。
3．加适量固定液固定10-20分钟。
    对于六孔板的一个孔，加入1ml固定液。确保固定液充分覆盖样品，固定前切勿对细胞进行洗涤。另外
    对于贴壁细胞，固定前需去除培养液。
4．去除固定液，空气中晾干。
5．加适量10倍稀释的Hoechst染色液室温染色10-30分钟。
    对于六孔板的一个孔，加入1ml染色液。确保染色液充分覆盖样品，染色时注意避光。可以用铝箔纸避
    光。
6．去除染色液，空气中晾干。
7．滴加试剂盒中提供的抗荧光淬灭封片液，封片后荧光显微镜下观察蓝色荧光。
    荧光显微镜观察时需400倍或1000倍放大观察(需使用油镜)。参考上图判断支原体污染情况。没有支原
    体污染或其它原核生物污染的细胞样品，仅观察到细胞核的蓝色荧光，线粒体DNA不会被染色。有支原
    体污染的细胞样品可以观察到细胞核周围微粒状或丝状蓝色荧光。支原体污染严重的细胞可以观察到大
    量微粒状或丝状蓝色荧光。有细菌、酵母或霉菌污染的情况虽然Hoechst染色也会呈阳性，但细菌、酵
    母或霉菌污染在光学显微镜下可以观察到，而支原体观察不到，由此可以初步区分是支原体还是其它微
    生物。如有必要进一步鉴定，可以通过把支原体接种培养和RT-PCR等方法进行进一步检测。

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相关论文

使用本产品的文献：
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3. Zhao W, Li D, Liu Z, Zheng X, Wang J, Wang E.
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   PLoS One. 2013 Jun 20;8(6):e66362. doi: 10.1371/journal.pone.0066362. Print 2013.
4. Hou H, Sun H, Lu P, Ge C, Zhang L, Li H, Zhao F, Tian H, Zhang L, Chen T, Yao M, Li J.
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6. Jiang F, Wang X, Liu Q, Shen J, Li Z, Li Y, Zhang J.
   Inhibition of TGF-β/SMAD3/NF-κB signaling by microRNA-491 is involved in arsenic
   trioxide-induced anti-angiogenesis in hepatocellular carcinoma cells.
   Toxicol Lett. 2014 Sep 6;231(1):55-61. doi: 10.1016/j.toxlet.2014.08.024.

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