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支原体染色检测试剂盒

 产品编号: C0296
 产品包装: >100次
 产品价格: 255.00元
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产品简介

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0296 支原体染色检测试剂盒 >100次 255.00元

    支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是用于在培养细胞中原位染色检测支原体或其它原核生物的试剂盒。主要用于检测培养细胞中是否存在支原体污染。
    培养细胞中的细菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光学显微镜下可见,但支原体污染在光学显微镜下不可见,必须通过特定的检测方法进行检测。
    检测支原体污染的方法有很多种,包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、RT-PCR检测以及DNA荧光染色检测。上述检测方法中,除DNA荧光染色检测外操作步骤相对比较烦琐并且所需时间较长。本支原体染色检测试剂盒是通过Hoechst染色来检测支原体的。本试剂盒的荧光染色可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染。
                
    本试剂盒的检测效果图参考上图。左图为无支原体污染情况,中图为支原体轻度污染情况,箭头所指为微粒状的一些支原体,右图为支原体重度污染情况,可见大量微粒状的支原体。
    如果发现有支原体污染,建议更换无污染的细胞进行培养。如果有必要去除支原体,可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原体污染。
    本试剂盒如用于六孔板样品检测,至少可以检测100个样品。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

C0296-1

固定液

100ml

C0296-2

Hoechst染色液

10ml

C0296-3

抗荧光淬灭封片液

10ml

说明书

1份

保存条件:
    4℃保存,一年有效,其中Hoechst染色液需避光保存。
注意事项:
    Hoechst染色试剂对人体有害,请注意适当防护。
    固定液含有乙酸,有刺激性气味,宜在通风橱内进行固定操作。
    荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
    检测支原体前最好用不含抗生素的培养液培养2-3代,这样更容易检测出支原体,因为一些抗生素可以抑制支原体生长。
    需自备PBS。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 细胞样品的准备:
    a. 对于贴壁细胞,在六孔板或其它多孔板内或盖玻片上培养细胞至50%-80%满。
       细胞培养过满会导致很难判断是否存在支原体污染。
    b. 对于悬浮细胞,离心沉淀细胞,取少量细胞做细胞涂片,空气中充分晾干。
2. 用PBS按照1:10稀释Hoechst染色液(1体积Hoechst染色液加入9体积PBS)。
    稀释后的Hoechst染色液宜在24小时内使用。
3. 加适量固定液固定10-20分钟。
    对于六孔板的一个孔,加入1ml固定液。确保固定液充分覆盖样品,固定前切勿对细胞进行洗涤。另外
    对于贴壁细胞,固定前需去除培养液。
4. 去除固定液,空气中晾干。
5. 加适量10倍稀释的Hoechst染色液室温染色10-30分钟。
    对于六孔板的一个孔,加入1ml染色液。确保染色液充分覆盖样品,染色时注意避光。可以用铝箔纸避
    光。
6. 去除染色液,空气中晾干。
7. 滴加试剂盒中提供的抗荧光淬灭封片液,封片后荧光显微镜下观察蓝色荧光。
    荧光显微镜观察时需400倍或1000倍放大观察(需使用油镜)。参考上图判断支原体污染情况。没有支原
    体污染或其它原核生物污染的细胞样品,仅观察到细胞核的蓝色荧光,线粒体DNA不会被染色。有支原
    体污染的细胞样品可以观察到细胞核周围微粒状或丝状蓝色荧光。支原体污染严重的细胞可以观察到大
    量微粒状或丝状蓝色荧光。有细菌、酵母或霉菌污染的情况虽然Hoechst染色也会呈阳性,但细菌、酵
    母或霉菌污染在光学显微镜下可以观察到,而支原体观察不到,由此可以初步区分是支原体还是其它微
    生物。如有必要进一步鉴定,可以通过把支原体接种培养和RT-PCR等方法进行进一步检测。

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