使用说明：
1.对于悬浮细胞：
  A.在进行完细胞凋亡刺激后，1000g(约1000-2000rpm)离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬
    细胞并计数。注意：PBS重悬不能省略，PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用，可以保证后
    续Annexin V-EGFP的结合。
  B.取5-10万重悬的细胞，1000g离心5分钟，弃上清，加入195μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细
    胞。
  C.加入5μl Annexin V-EGFP，轻轻混匀。
  D.加入10μl碘化丙啶染色液，轻轻混匀。
  E.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重
    悬细胞2-3次以改善染色效果。
  F.随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-EGFP为绿色荧光，碘化丙啶(PI)为红色荧光。如果用于荧光
    显微镜检测，1000g离心5分钟，收集细胞，用50-100μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细胞，涂片
    后，荧光显微镜下观察。
2.对于贴壁细胞：
  A.把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液(可含有
    EDTA)消化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰
    酶的过度消化。
  B.加入步骤2A中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000g离心5分钟，弃上清，收集细
    胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。注意：加入步骤2A中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生
    凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会
    消化并降解后续加入的Annexin V-EGFP导致染色失败。
  C.取5-10万重悬的细胞，1000g离心5分钟，弃上清，加入195μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细
    胞。
  D.加入5μl Annexin V-EGFP，轻轻混匀。
  E.加入10μl 碘化丙啶染色液，轻轻混匀。
  F.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重
    悬细胞2-3次以改善染色效果。
  G.随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-EGFP为绿色荧光，碘化丙啶(PI)为红色荧光。如果用于荧光
    显微镜检测，1000g离心5分钟，收集细胞，用50-100μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细胞，涂片
    后，荧光显微镜下观察。
3.对于贴壁细胞的原位荧光显微镜检测：
  注：本方法的优点是可以原位观察细胞凋亡，缺点是部分凋亡由于不贴壁而检测不到。
  A.(选做)如果条件许可，把细胞培养于24孔板、48孔板或96孔板内。在凋亡诱导结束后，用可以对多
    孔板进行离心的离心机1000g离心5分钟。
  B.吸除细胞培养液，加入PBS洗涤一次。(如果条件许可，在吸除PBS前1000g离心5分钟。)
  C.加入195μl Annexin V-EGFP结合液。
  D.加入5μl Annexin V-EGFP，轻轻混匀。
  E.加入10μl 碘化丙啶染色液，轻轻混匀。
  F.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重
    悬细胞2-3次以改善染色效果。
  G.随即在荧光显微镜下观察，Annexin V-EGFP为绿色荧光，碘化丙啶(PI)为红色荧光。