使用说明：
1. 涂平板：
   为取得最佳的感受态效率，必须先把甘油菌或其它形式保存的菌种涂LB平板，并培养过夜。
2. 接种：
   取一有新鲜培养的菌种的LB平板，后续操作均在超净台内进行。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，
   并在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，从
   平板上挑取一个单克隆，然后把蘸有菌种的塑料枪头或牙签放到装有3毫升LB的细菌培养试管内。上
   述操作也可以使用接种环等进行操作。
3. 培养：
   37℃约200rpm培养过夜，通常培养时间控制在16小时左右为宜。不宜超过18小时。
4. 再接种培养：
   根据需要制备的超级感受态细菌的量，按照1:500的比例用新鲜培养的过夜菌接种培养。例如取100微
   升的新鲜过夜菌到50毫升本试剂盒提供的超级感受态细菌培养液中，37℃约200rpm培养。通常在大约
   培养2.5-3.5小时后OD₆₀₀可以达到0.6-0.7。
5. 制备感受态细菌：
   (1) 在培养的细菌OD₆₀₀达到0.6-0.7时，把培养的菌液置于冰浴中，冷却15分钟。注意：后续所有操
       作均须在4度或冰浴进行。
   (2) 4℃4000g离心5分钟收集细菌，弃上清。 注意：离心机必须预先冷却。
   (3) 如果离心沉淀前的菌量为50毫升，按后续操作进行，如果是其它体积则按比例换算后进行后续操
       作。
   (4) 用20毫升预冷的超级感受态制备试剂A轻轻重悬细菌沉淀。悬浮时一定要很轻很慢，否则会影
      响效果。
   (5) 冰浴15分钟。
   (6) 4℃4000g离心5分钟收集细菌，弃上清。注意：离心机必须预先冷却。
   (7) 用2毫升预冷的超级感受态制备试剂B轻轻重悬细菌沉淀。悬浮时一定要很轻很慢，否则会影
      响效果。
   (8) 冰浴15分钟。
   (9) 在冰浴上进行分装，可以根据需要适当分装成50-200微升/管。
   (10) 立即使用或用液氮或乙醇干冰浴速冻后-70℃保存。通常6个月内效率不会有明显的变化。
6. 感受态细菌的使用：
   (1) 对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进
       行)：
   a) 在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了)，如果检测感受态细菌的
      效率，加入10pg-1ng质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物，每50
      微升感受态细菌加入2-10微升连接产物。
   b) 轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放置30分钟。
   c) 42℃水浴，热休克2分钟。
   d) 热休克后立即置于冰水浴中，2分钟。
   e) 加入900微升LB，37℃200rpm培养1小时。
   f) 如果检测感受态效率，取100微升涂布到含有相应抗生素的LB平板上。如果转化的是连接产物，
      2000-3000g离心1分钟或更长时间使细菌充分沉淀下来。去除约900-950微升LB培养液。细菌沉淀
      用余下的LB培养液重悬，然后全部涂布到含有适当抗生素的LB平板上。37℃培养过夜。
   (2) 对于质粒的转化：
   a) 融解感受态细菌，加入不少于50ng质粒到30-50微升感受态细菌中。质粒的量可以是1微克或更
      多，但体积不宜超过感受态细菌量的10%。
   b) 轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒。冰浴或冰水浴放置10分钟。
   c) 取全部菌液直接涂布到含有适当抗生素的LB平板上，37℃培养过夜。