产品简介:
产品编号 |
产品名称 |
产品包装 |
产品价格 |
D6633 |
SmaI |
500U |
132.00元 |
SmaI内切酶为进口分装,基本信息如下:
识别序列 |
缓冲液兼容性(%) |
酶切温度 |
失活条件 |
甲基化干扰? |
CCC^GGG
GGG^CCC |
1X B |
1X G |
1X O |
1X R |
1X Y |
2X Y |
30℃ |
65℃
20min |
有时有干扰 |
50-100 |
0-20 |
0-20 |
0-20 |
100 |
0-20 |
根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
酶储存液组成为:10mM Tris-HCl(pH7.4 at 25℃),100mM KCl,1mM DTT,1mM EDTA,0.2mg/ml BSA and 50% glycerol。
1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,0.1mg/ml BSA。
酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>90%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
活性单位定义:在37℃,50微升反应体系中反应1小时,将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D6633-1 |
SmaI(10U/μl) |
500U |
D6010Y |
10X Buffer Y |
1ml |
- |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
特别注意:本SmaI的推荐孵育温度为30℃,37℃孵育有50%的酶活性,25℃孵育有100%的酶活性。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:
待酶切DNA |
不超过1μg |
双蒸水或MilliQ水 |
适量 |
10X Buffer Y |
2μl |
SmaI |
0.5-1μl |
总体积 |
20μl |
37℃孵育1小时或更长时间 |
说明:请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混
匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果
酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按
比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。
如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切
反应。