产品简介:
T4 DNA Polymerase,即T4 DNA聚合酶,是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以在结合有引物的单链DNA 模板上,从5'→3'方向催化DNA合成反应。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性,但不具有5'→3'外切酶活性。
特点:T4 DNA Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性,可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高,即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约200倍。
用途:T4 DNA Polymerase可用于催化以下反应:DNA 5'或3'突出末端的平滑化;通过置换反应进行标记DNA探针合成;定点突变过程中第二链的合成;不依赖于连接反应的PCR产物克隆。
来源:本T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达,表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义:37℃30分钟时间内,催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:67mM Tris-HCl(pH8.8),6.7mM MgCl2,1mM DTT,16.7mM(NH4)2SO4,0.2mg/ml BSA,0.033mM of each dNTP,0.4MBq/ml[3H]-dTTP,0.2mM 热变性且经DNA酶部分消化过的小牛胸腺DNA。
纯度:不含DNA内切酶,不含RNase。
酶储存溶液:20mM potassium phosphate(pH7.5),200mM KCl,2mM DTT,and 50% glycerol。
Reaction Buffer(5X):335mM Tris-HCl(pH8.8 at 25℃),33mM MgCl2,5mM DTT,84mM
(NH4)2SO4。
缓冲液兼容性:在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性为100%,在1X B、1X G中的活性为75-100%。
失活或抑制:70℃加热10分钟可使T4 DNA Polymerase失活。金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA Polymerase的活性。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D7051-1 |
T4 DNA Polymerase(5U/μl) |
50U |
D7051-2 |
Reaction Buffer(5X) |
0.3ml |
- |
说明书 |
1份
|
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. DNA 5'或3'突出末端平滑化:
a. 参考如下表格设置反应体系:
Reaction Buffer(5X) |
4μl |
digested DNA |
1μg |
dNTP Mixture(2.5mM each) |
0.8μl |
补充无核酸酶的去离子水 |
至19.8μl |
T4 DNA Polymerase(5U/μl) |
0.2μl |
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后
离心沉淀液体。
c. 11℃孵育20分钟,或室温(20-25℃)孵育5分钟。
d. 70℃孵育10分钟终止反应。
2. 其他用途请自行参考T4 DNA Polymerase的相关文献资料进行。