产品简介:
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,简称TdT,中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶,是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。
用途:寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记;DNA末端加尾(DNA tailing);5'-RACE;合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义:37℃60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件:200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNase。
酶储存溶液:100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
Reaction Buffer(5X):0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
失活或抑制:70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D7093-1 |
TdT(20U/μl) |
500U |
D7093-2 |
Reaction Buffer(5X) |
0.4ml |
- |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. DNA 3'末端标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:
待标记DNA |
10 pmol of 3'-termini |
Reaction Buffer(5X) |
10μl |
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol(3000Ci/mmol) |
1.85 MBq(50μCi) |
TdT(20U/μl) |
2μl |
补充无核酸酶的去离子水 |
至50μl |
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后
离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
说明:标记的效率和3'羟基末端的类型有关,3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末
端的标记效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing):
a. 参考下表格设置反应体系:
DNA片断 |
1 pmol of 3'-termini |
Reaction Buffer(5X) |
4μl |
dATP or dTTP |
130pmol(20 μCi) |
或 dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种)
(3000 Ci/mmol) |
60pmol |
TdT(20U/μl) |
1.5μl |
补充无核酸酶的去离子水 |
至20μl |
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后
离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
说明:在上述反应条件下,每个3'羟基末端可以加上100-130个dA或dT,或20-30个dC或dG。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。