Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

 产品编号: D7093
 产品包装: 500U
 产品价格: 406.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7093 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase 500U 406.00元

    Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,简称TdT,中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶,是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。
    用途:寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记;DNA末端加尾(DNA tailing);5'-RACE;合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
    来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为小牛胸腺。
    活性定义:37℃60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
    酶活性检测条件:200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
    纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNase。
    酶储存溶液:100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
    Reaction Buffer(5X):0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2
    失活或抑制:70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

D7093-1

TdT(20U/μl)

500U

D7093-2

Reaction Buffer(5X)

0.4ml

说明书

1份

保存条件:
    -20℃保存。
注意事项:
    酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. DNA 3'末端标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:

待标记DNA

10 pmol of 3'-termini

Reaction Buffer(5X)

10μl

[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol(3000Ci/mmol)

1.85 MBq(50μCi)

TdT(20U/μl)

2μl

补充无核酸酶的去离子水

至50μl

b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后
   离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
   说明:标记的效率和3'羟基末端的类型有关,3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末
   端的标记效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing):
a. 参考下表格设置反应体系:

DNA片断

1 pmol of 3'-termini

Reaction Buffer(5X)

4μl

dATP or dTTP

130pmol(20 μCi)

或 dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种)
(3000 Ci/mmol)

60pmol

TdT(20U/μl)

1.5μl

补充无核酸酶的去离子水

至20μl

b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后
   离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
   说明:在上述反应条件下,每个3'羟基末端可以加上100-130个dA或dT,或20-30个dC或dG。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。


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