 |
|
|
|||||||||||||||||||
|
|||||||||
产品简介
产品简介：
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| RG005 | 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100次 | 386.00元 |
碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一种以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。
萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪进行测定仪测定。本试剂盒的检测原理参考图1。
图1. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣
基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。
萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm(centered around 560nm)。
本试剂盒可以测定100个样品。
包装清单：
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
RG005-1 |
报告基因细胞裂解液 |
60ml |
RG005-2 |
萤火虫萤光素酶检测试剂 |
10ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件：
报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效，-20℃保存一年有效；萤光素酶检测试剂-20℃避光保存6个月有效，-80℃避光保存一年有效。
注意事项：
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽
量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时
间暴露于室温。经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
| 使用说明： 1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细 胞。 a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞： 离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。 | |||||||||||||||
|
|||||||||||||||
|
注：如果荧光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小 为100微升。 b. 充分裂解后，10,000-15,000g离心3-5分钟，取上清用于测定。 注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温 后再进行测定。 2. 融解萤光素酶检测试剂，并达到室温。 3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，将测定间隔设为2秒， 测定时间设为10秒。 4. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减 少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)。 5. 加入100微升萤光素酶检测试剂，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU(relative light unit)。以报告基因细胞裂解液为空白对照。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比 较可以参考图2。  图2. 本产品和P公司竞争产品(Competitor P)对相同样品的检测效果。实际读数会因细胞数量、转染效果、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 |
常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光
并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是
说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功
能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪
器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。
相关产品：
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
RG005 |
100次 |
|
RG006 |
1000次 |
|
RG016 |
100次 |
|
RG017 |
1000次 |
|
RG027 |
100次 |
|
RG028 |
1000次 |
|
RG0036 |
200次 |
产品图片
相关产品
相关论文
使用本产品的相关论文：
1. Zhou F, Zhang L, Gong K, Lu G, Sheng B, Wang A, Zhao N, Zhang X, Gong Y.
LEF-1 activates the transcription of E2F1.
Biochem Biophys Res Commun. 2008 Jan 4;365(1):149-53.
2. Chen H, Sun JG, Cao XW, Ma XG, Xu JP, Luo FK, Chen ZT.
Preliminary validation of ERBB2 expression regulated by miR-548d-3p and miR-559.
Biochem Biophys Res Commun. 2009 Aug 7;385(4):596-600.
3. Tian YP, Jiang W, Gao N, Zhang JL, Chen W, Fan DY, Zhou DS, An J.
Inhibitory effects of glutathione on dengue virus production.
Biochemical and Biophysical Research Communications 397 (2010) 420–424.
4. Zhang J, Chen Y, Xin XL, Li QN, Li M, Lin LP, Geng MY, Ding J.
Oligomannurarate sulfate blocks tumor growth by inhibiting NF-kappaB activation.
Acta Pharmacol Sin. 2010 Mar;31(3):375-81.
5. Zhang J, Xin X, Chen Q, Xie Z, Gui M, Chen Y, Lin L, Feng J, Li Q, Ding J, Geng M.
Oligomannurarate sulfate sensitizes cancer cells to doxorubicin by inhibiting atypical
activation of NF-κB via targeting of Mre11.
Int J Cancer. 2012 Jan 15;130(2):467-77. doi: 10.1002/ijc.26021.
6. Hou S, Shu Q, Jiang Z, Chen Y, Li F, Chen F, Kijlstra A, Yang P.
Replication study confirms the association between UBAC2 and Behςet's disease in
twoindependent Chinese sets of patients and controls.
Arthritis Res Ther. 2012 Mar 29;14(2):R70.
7. Zhang J, Chen J, Yang J, Xu CW, Pu P, Ding JW, Jiang H.
Resveratrol attenuates oxidative stress induced by balloon injury in the rat carotid
artery through actions on theERK1/2 and NF-kappa B pathway.
Cell Physiol Biochem. 2013;31(2-3):230-41. doi: 10.1159/000343364. Epub 2013 Feb 14.
8. Liu D, Duan X, Dong D, Bai C, Li X, Sun G, Li B.
Activation of the nrf2 pathway by inorganic arsenic in human hepatocytes and the role
of transcriptional repressorbach1.
Oxid Med Cell Longev. 2013;2013:984546. doi: 10.1155/2013/984546. Epub 2013 May 7.
9. Ding Q, Zhong H, Qi Y, Cheng Y, Li W, Yan S, Wang X.
Anti-arthritic effects of crocin in interleukin-1β-treated articular chondrocytes and
cartilage in a rabbitosteoarthritic model.
Inflamm Res. 2013 Jan;62(1):17-25. doi: 10.1007/s00011-012-0546-3. Epub 2012 Aug 18.
10.Yang CG, Liu SS, Sun B, Wang XL, Wang N, Chen SL.
Iron-metabolic function and potential antibacterial role of Hepcidin and its correlated
genes (Ferroportin 1 and Transferrin Receptor) in turbot (Scophthalmus maximus).
Fish Shellfish Immunol. 2013 Mar;34(3):744-55. doi: 10.1016/j.fsi.2012.11.049.
Epub 2012 Dec 27.
11.Song S, Zhou F, Chen WR, Xing D.
PDT-induced HSP70 externalization up-regulates NO production via TLR2 signal pathway in
macrophages.
FEBS Lett. 2013 Jan 16;587(2):128-35. doi: 10.1016/j.febslet.2012.11.026. Epub 2012
Dec 14.
12.Deng X, Rui W, Zhang F, Ding W.
PM2.5 induces Nrf2-mediated defense mechanisms against oxidative stress by activating
PIK3/AKT signaling pathway in human lung alveolar epithelial A549 cells.
Cell Biol Toxicol. 2013 Jun;29(3):143-57. doi: 10.1007/s10565-013-9242-5. Epub 2013
Mar 24.
13.Li C, Pan Z, Xu T, Zhang C, Wu Q, Niu Y.
Puerarin induces the upregulation of glutathione levels and nuclear translocation of
Nrf2 through PI3K/Akt/GSK-3β signaling events in PC12 cells exposed to lead.
Neurotoxicol Teratol. 2014 Sep 4;46C:1-9. doi: 10.1016/j.ntt.2014.08.007.
14.Gao X, He Y, Gao LM, Feng J, Xie Y, Liu X, Liu L.
Ser9-phosphorylated GSK3β induced by 14-3-3ζ actively antagonizes cell apoptosis in a
NF-κB dependent manner.
Biochem Cell Biol. 2014 Oct;92(5):349-56. doi: 10.1139/bcb-2014-0065. Epub 2014 Jul
17.
15.Li H, Liu F, Guo H, Zhu Z, Jiao Y.
Role of interferon-inducible protein 202 (p202) in the regulation of adipogenesis in
mouse adipose-derived stem cells.
Mol Cell Endocrinol. 2014 Feb 15;382(2):814-24. doi: 10.1016/j.mce.2013.11.006. Epub
2013 Nov 15.
16.Ruan GX, Chen YZ, Yao XL, Du A, Tang GP, Shen YQ, Tabata Y, Gao JQ.
Macrophage mannose receptor-specific gene delivery vehicle for macrophage engineering.
Acta Biomater. 2014 May;10(5):1847-55. doi: 10.1016/j.actbio.2014.01.012. Epub 2014
Jan 16.
17.Zeng W, Chang H, Ma M, Li Y.
CCL20/CCR6 promotes the invasion and migration of thyroid cancer cells via NF-kappa B
signaling-induced MMP-3 production.
Exp Mol Pathol. 2014 Aug;97(1):184-90. doi: 10.1016/j.yexmp.2014.06.012. Epub 2014
Jun 28.
18.Huang KF, Huang XP, Xiao GQ, Yang HY, Lin JS, Diao Y.
Kallistatin, a novel anti-angiogenesis agent, inhibits angiogenesis via inhibition of
the NF-κB signaling pathway.
Biomed Pharmacother. 2014 May;68(4):455-61. doi: 10.1016/j.biopha.2014.03.005. Epub
2014 Mar 18.
19.Qin W, Pan Y, Zheng X, Li D, Bu J, Xu C, Tang J, Cui R, Lin P, Yu X.
MicroRNA-124 regulates TGF-α-induced epithelial-mesenchymal transition in human
prostate cancer cells.
Int J Oncol. 2014 Sep;45(3):1225-31. doi: 10.3892/ijo.2014.2506. Epub 2014 Jun 19.
20.Gao F, Wang W.
MicroRNA-96 promotes the proliferation of colorectal cancer cells and targets tumor
protein p53 inducible nuclear protein 1, forkhead box protein O1 (FOXO1) and FOXO3a.
Mol Med Rep. 2014 Nov 4. doi: 10.3892/mmr.2014.2854.
21.Han L, Tang C, Yin C.
Oral delivery of shRNA and siRNA via multifunctional polymeric nanoparticles for
synergistic cancer therapy.
Biomaterials. 2014 May;35(15):4589-600. doi: 10.1016/j.biomaterials.2014.02.027. Epub
2014 Mar 6.
22.Ruan GX, Zhang TY, Li LM, Zhang XG, Shen YQ, Tabata Y, Gao JQ.
Hepatic-targeted gene delivery using cationic mannan vehicle.
Mol Pharm. 2014 Oct 6;11(10):3322-9. doi: 10.1021/mp5000899. Epub 2014 Apr 28.
23.Li K, Feng L, Shen J, Zhang Q, Liu Z, Lee ST, Liu J.
Patterned substrates of nano-graphene oxide mediating highly localized and efficient
gene delivery.
ACS Appl Mater Interfaces. 2014 Apr 23;6(8):5900-7. doi: 10.1021/am5008134. Epub
2014 Apr 9.
24.Wu WY, Yan H, Wang XB, Gui YZ, Gao F, Tang XL, Qin YL, Su M, Chen T, Wang YP.
Sodium tanshinone IIA silate inhibits high glucose-induced vascular smooth muscle cell
proliferation and migration through activation of AMP-activated protein kinase.
PLoS One. 2014 Apr 16;9(4):e94957. doi: 10.1371/journal.pone.0094957. eCollection
2014.
 苏ICP备06009238号 |