质粒大量抽提试剂盒/Plasmid Maxi Preparation Kit/Plasmid Maxipreps Kit/大抽试剂盒

产品简介

产品简介：

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D0026	质粒大量抽提试剂盒	20次	798.00元

    碧云天的质粒大量抽提试剂盒(Plasmid Maxi Preparation Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行大量质粒的快速抽提的试剂盒。
    本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，6个样品只需不足90分钟即可完成。
    两步过柱纯化，使质粒纯度进一步提高，达到转细胞级要求。
    每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限大于500微克。每个纯化柱可用于抽提100毫升左右用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。
    由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等。本试剂盒抽提的含Firefly luciferase或Renila luciferase报告基因的质粒，用Lipofectmine 2000或Fugene 6转细胞，报告基因检测结果表明仅0.5微克受SV40启动子控制的质粒转化12孔板内的一孔原代贴壁细胞，总RLU值约为五百万，测定时间为10秒。
    内毒素(endotoxin)含量低。用对内毒素敏感的细胞转染受内毒素响应的报告基因质粒，与Qiagen昂贵的Endotoxin Free大抽试剂盒相比，检测结果完全一致。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D0026-1	溶液I (悬浮液)	105ml
D0026-2	溶液II (裂解液)	105ml
D0026-3	溶液III (结合液)	150ml
D0026-4	溶液IV (洗涤液)	84ml×3 (第一次使用前每瓶加入126ml无水乙醇)
D0026-5	溶液V (洗脱液)	90ml
D0026-6	溶液VI (DNA纯化结合液)	210ml
D0026-7	RNase A (100mg/ml)	105μl
D0026-8	大抽质粒纯化柱及废液收集管	20套
—	说明书	1份

保存条件：
    室温保存，一年有效。
注意事项：
    第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I(悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
    第一次使用前在每瓶溶液IV(洗涤液)中加入126ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
    温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
    溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
    溶液II有强碱性，溶液II、溶液III和溶液VI对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
    本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
    废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明：
1.取过夜菌至50毫升离心管内，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清。再重复一次，每管总共收集100毫升过夜菌沉淀。
通常大肠杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2-4。建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟，如沉淀不充分，则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于加入溶液I后散开沉淀。直接倒掉上清，再倒入约50毫升菌液并重复上述操作，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。如果细菌密度明显偏低，可考虑使用更多菌液，再重复上述操作1-2次。对于高拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过150毫升，对于低拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过200毫升。过量的细菌会导致后续的裂解不充分。
2.每管加入5毫升溶液I，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块。
确认溶液I中已添加了RNase A。最高速度vortex 10-20秒或更长时间，悬起沉淀。一定要充分混匀，对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液，无明显细菌团块或絮块。如果没有vortex，可以用枪吹打沉淀使沉淀逐渐散开。
3.每管加入5毫升溶液II，轻轻颠倒离心管4-6次，室温放置3-5分钟，使细菌完全裂解，溶液透明。
切勿vortex！vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂，易导致最终所得质粒被基因组DNA污染。颠倒4-6次后，溶液应变得透明，无团块或絮状物。如果加入溶液I后细菌没有完全散开，那么颠倒4-6次后，可能还会有团块或絮状物。遇到有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3-5次，但总裂解时间不可超过5分钟。
4.每管加入5毫升溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。
切勿vortex！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。
5.高速(5,000-10,000rpm)室温离心10-20分钟。
如果速度较高例如10,000rpm左右，一般离心10分钟已经足够。离心更长时间例如20分钟，会使沉淀更加紧密，更集中于管底，对于进一步提高质粒质量会有所帮助。速度较低时必须适当延长离心时间，使沉淀更加充分。离心时可以准备好质粒纯化柱，自制漏斗等，并在纯化柱上标上记号。
6.将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。高速离心2分钟，倒弃收集管内液体。
质粒倒入质粒纯化柱后，可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。本步骤及后续的高速离心2分钟步骤，在离心速度达到10,000rpm时，离心2分钟即足够；在离心速度为5,000rpm时，则离心时间可以延长到3-4分钟。
7.在质粒纯化柱内加入7毫升溶液IV，高速离心2分钟，洗去杂质，倒弃收集管内液体。
加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
8.高速离心2分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。
9.将质粒纯化柱置于50毫升离心管上，加入2毫升溶液V至管内柱面上，放置2分钟。
也可以用重蒸水或Milli-Q级纯水替代溶液V，但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会略有帮助。
10.高速离心2分钟，所得液体中加入10毫升溶液VI，混匀后加到原质粒纯化柱内。
加入溶液VI后必须混匀！可颠倒混匀，混匀后切勿离心。
11.高速离心2分钟，倒弃收集管内液体。
12.在质粒纯化柱内加入15毫升溶液IV，最高速离心2分钟，进一步洗去杂质，倒弃收集管内液体。
加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。
13.高速再离心2分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。
14.将质粒纯化柱置于50毫升离心管上，加入2毫升溶液V至管内柱面上，放置2分钟。
也可以用重蒸水或Milli-Q级纯水替代溶液V，但是水的pH 应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会略有帮助。如想得到较高浓度的质粒，可以加入1.3毫升溶液V洗脱。
15.高速离心2分钟，所得液体即为转细胞级超纯质粒。
通常所得质粒浓度为0.1-0.3mg/ml。如果想得到高浓度的质粒，可以采用常规的乙醇沉淀的方法浓缩质粒。

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