使用说明：
1. 免疫荧光染色的准备工作：
A. 固定液的准备：
   推荐使用碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)，也可以用4%多聚甲醛作为固定液，或根据特定的一
   抗或样品采用有效成分为乙醇、甲醇或其它类型的固定液。
B. 洗涤液的准备：
   推荐使用碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，也可以按照如下方法配制TBSTx作为洗涤液：
   10XTBS的配制：称取24.2g Tris (Tris碱), 80g NaCl；用盐酸调节pH值至7.6，定容至一升。
   TBS配制：把10XTBS按照1:9的比例用水稀释至1X即为TBS。
   TBSTx的配制：在TBS中加入Triton X-100使最终浓度为0.1%，混匀，即为TBSTx。
C. 封闭液的准备：
   推荐使用碧云天生产的免疫染色封闭液(P0102)，也可以按照如下方法配制含5%BSA的TBSTx作为封闭
   液：
   含5%BSA的TBSTx的配制：在100毫升TBSTx中加入5克BSA，溶解并混匀，即为含5%BSA的TBSTx。
D. 一抗稀释液的准备：
   推荐使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)，也可以使用上述封闭液，即含5%BSA的TBSTx，
   作为一抗稀释液。
E. 一抗的稀释：
   按照一抗说明书中推荐的用于免疫荧光染色的稀释比例用一抗稀释液稀释一抗。
F. 荧光标记二抗的稀释：
   把荧光标记的二抗，按照1:1000的比例用本试剂盒提供的免疫荧光染色二抗稀释液进行稀释。根据荧
   光的强弱，稀释的比例可以适当提高或降低。
2. 对于贴壁细胞：
A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或
   0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，
   使约为50%-80%满。
B. 按照特定的实验目的处理细胞后，吸尽培养液，加入1ml固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃固定
   过夜)。
C. 去固定液，用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 用封闭液封闭60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。
E. 去封闭液，用稀释的特定一抗作用60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。为增强与一抗的结合，可以4℃
   作用过夜。
F. 去除一抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。每次洗涤时都可以在摇床上轻轻摇动。
G. 去除洗涤液，加入1毫升稀释好的荧光标记的二抗避光孵育60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。
H. 回收荧光标记的二抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，期间适当注意避光操作。每次洗涤时都
   可以在摇床上轻轻摇动。
I. 滴一滴本试剂盒提供的抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细
   胞接触封片液，切勿弄反。
J. 如果一抗选用适当，在荧光显微镜下可以观察到蓝色的荧光。
3. 对于悬浮细胞：
A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，吸除上清后轻轻弹散细胞。
B. 加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
C. 离心去固定液，用洗涤液洗3次，每次3-5分钟。洗涤期间可以用手或摇床轻轻晃动。
D. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50微升液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞
   分布均匀。
E. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。如果条件许可，可以使用适当的离心机，通过离心把
   细胞贴紧在载玻片上。
F. 用封闭液封闭60分钟。封闭及后续的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。
G. 去封闭液，用稀释的特定一抗作用60分钟。为增强与一抗的结合，可以4℃作用过夜。
H. 去除一抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
I. 去除洗涤液，加入稀释的荧光标记的二抗避光孵育60分钟。
J. 回收荧光标记的二抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，期间适当注意避光操作。
K. 滴一滴本试剂盒提供的抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上盖玻片，尽量避免气泡。
L. 如果一抗选用适当，在荧光显微镜下可以观察到蓝色的荧光。
4. 对于组织切片：
A. 对于石蜡切片，需先完成脱蜡、水化和抗原修复。对于冰冻切片可以直接按照下面的步骤操作。
B. 用固定液固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。固定及后续的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或
   邮寄夹进行操作。
C. 去固定液，用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 用封闭液封闭60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。
E. 去封闭液，用稀释的特定一抗作用60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。为增强与一抗的结合，可以4℃
   作用过夜。
F. 去除一抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。每次洗涤时都可以在摇床上轻轻摇动。
G. 去除洗涤液，加入1毫升稀释好的荧光标记的二抗避光孵育60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。
H. 回收荧光标记的二抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，期间适当注意避光操作。每次洗涤时都
   可以在摇床上轻轻摇动。
I. 滴一滴本试剂盒提供的抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上盖玻片，尽量避免气泡。
J. 如果一抗选用适当，在荧光显微镜下可以观察到蓝色的荧光。

使用本产品的文献：
1. Liu X, Zhang Z, Li P, Zhu L, Wang Y, Wang C.
   Polypeptide from Chlamys farreri modulates UVB-induced activation of NF-kappaB signaling
   pathway and protection HaCaT cells from apoptosis.
   Regul Pept. 2009 Feb 25;153(1-3):49-55.
2. Liu HT, Li WM, Li XY, Xu QS, Liu QS, Bai XF, Yu C, Du YG.
   Chitosan oligosaccharides inhibit the expression of interleukin-6 in
   lipopolysaccharide-inducedhuman umbilical vein endothelial cells through p38 and ERK1/2
   protein kinases.
   Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2010 May;106(5):362-71.
3. Wang XH, Fu ZG, Zhao Y, Shen W, Wu XY, Wang CY.
   Survivin: an overexpression protein with notable cellular localization and multiple
   roles in colon cancer.
   THE CHINESE-GERMAN JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY，2010，9（9），519-523.
4. Wang X, Fu Z, Zhao Y, Wu X, Shen W.
   Profile of protein expression of the colon cancer cell line SW480 with survivin/shRNA.
   Eur J Cancer Prev. 2011 May;20(3):190-8.
5. Wang X, Zhao Y, Fu Z, He Y, Xiang D, Zhang L.
   Prelining autogenic endothelial cells in allogeneic vessels inhibits thrombosis and
   intimalhyperplasia: an efficacy study in dogs.
   J Surg Res. 2011 Jul;169(1):148-55.
6. Wang F, Liang YJ, Wu XP, Su XD, Fu LW.
   ABCG2-overexpressing S1-M1-80 cell xenografts in nude mice keep original biochemistry
   and cellbiological properties.
   Chin J Cancer. 2012 Mar;31(3):150-8.
7. Zhou L, Xue H, Wang Z, Ni J, Yao T, Huang Y, Yu C, Lu L.
   Angiotensin-(1-7) attenuates high glucose-induced proximal tubular
   epithelial-to-mesenchymaltransition via inhibiting ERK1/2 and p38 phosphorylation.
   Life Sci. 2012 Mar 10;90(11-12):454-62.
8. Nie J, Cao X, Zhou M, Zhang X, Zhang R, Niu L, Xia Y, Hou L, Wang C.
   Musca domestica pupae lectin induces apoptosis in HepG2 cells through a NF-κB/p65-
   mediated caspasepathway.
   Bull Cancer. 2012 Apr 1;99(4):E49-54. doi: 10.1684/bdc.2012.1557.
9. Meng X, Li F, Chen S, Tang C, Zhang W, Wang Z, Zhao S.
   Cloning and expression of neuron-specific enolase in the corpus luteum of dairy goats.
   Gene. 2012 Jul 25;503(2):222-8. doi: 10.1016/j.gene.2012.04.058. Epub 2012 May 8.