产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D5010-1μg | pT7-N-His-SUMO-WELQ | 1μg | 888.00元 |
D5010-100μg | pT7-N-His-SUMO-WELQ | 100μg | 1169.00元 |
pT7-N-His-SUMO-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化,而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠,增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签,也可以通过WELQ Protease (P2311)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。
本质粒含有T7启动/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。
本质粒在N端SUMO标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签和SUMO标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。
可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。
本质粒为卡那霉素抗性。
pT7-N-His-SUMO-WELQ质粒(5637bp)的图谱如下:
pT7-N-His-SUMO-WELQ质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
f1 origin | 12-467 |
Kanamycin resistance ORF | 560-1375 |
PBR322 origin | 1497-2085 |
LacI coding sequence | 3515-4597 |
LacI promoter | 4598-4675 |
T7 promoter | 4988-5004 |
lac operator | 5007-5031 |
RBS | 5046-5068 |
His tag coding sequence | 5088-5105 |
PreScission recognition site sequence | 5115-5138 |
SUMO tag coding sequence | 5151-5444 |
WELQ site | 5454-5465 |
Multiple cloning site (PstI-XhoI) | 5460-5498 |
T7 Terminator | 5565-5612 |
pT7-N-His-SUMO-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5010 pT7-N-His-SUMO-WELQ.pdf
pT7-N-His-SUMO-WELQ中没有的酶切位点包括:
AarI | AatII | AbsI | Acc65I | AgeI | AhdI | AscI |
AvrII | BaeI | BbvCI | BfuAI | BmgBI | BplI | BsaI |
BseRI | BsiWI | BspMI | BsrGI | BstBI | Bsu36I | CspCI |
EcoRV | FalI | FseI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI |
KpnI | MauBI | MfeI | MreI | MscI | NcoI | PacI |
PasI | PI-PspI | PI-SceI | PmeI | PmlI | PsrI | RsrII |
SacII | SalI | SbfI | ScaI | SexAI | SfiI | SgrDI |
SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | SwaI | ZraI |
pT7-N-His-SUMO-WELQ中的单酶切位点包括:
AccI | GT`MK,AC | 2373 | NheI | G`CTAG,C | 5145 |
AflII | C`TTAA,G | 5336 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 4042 |
AleI | CACNN|NNGTG | 5495 | NotI | GC`GGCC,GC | 5485 |
AlwNI | GAG,NNN`CTG | 1732 | NruI | TCG|CGA | 1286 |
AsiSI | GCG,AT`CGC | 945 | PaeR7I | C`TCGA,G | 5493 |
BamHI | G`GATC,C | 5442 | PciI | A`CATG,T | 2141 |
Bg1I | GCCN,NNN`NGGC | 3182 | PflFI | GACN`N,NGTC | 2399 |
Bg1II | A`GATC,T | 5251 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3136 |
BmtI | G,CTAG`C | 5149 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3401 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 | PsiI | TTA|TAA | 370 |
BssHII | G`CGCG,C | 3831 | PspXI | VC`TCGA,GB | 5493 |
BssSaI | C`ACGA,G | 1968 | PstI | C,TGCA`G | 5464 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4566 | PvuI | CG,AT`CG | 945 |
BstEII | G`GTNAC,C | 4060 | SacI | G,AGCT`C | 5476 |
BstZ17I | GTA|TAC | 2374 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2258 |
DraI | TTT|AAA | 5227 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 4923 |
DraIII | CAC,NNN`GTG | 245 | SmaI | CCC|GGG | 1069 |
EagI | C`GGCC,G | 5485 | SphI | G,CATG`C | 4775 |
Eco53kI | GAG|CTC | 5474 | StyI | C`CWWG,G | 5576 |
EcoRI | G`AATT,C | 5466 | TatI | W`GTAC,W | 2337 |
FspI | TGC|GCA | 3164 | TspMI | C`CCGG,G | 1067 |
FspAI | RTGC|GCAY | 3164 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 2399 |
HincII | GTY|RAC | 3740 | XbaI | T`CTAG,A | 5034 |
HindIII | A`AGCT,T | 5478 | XhoI | C`TCGA,G | 5493 |
HpaI | GTT|AAC | 3740 | XmaI | C`CCGG,G | 1067 |
MluI | A`CGCG,T | 4242 |
pT7-N-His-WELQ质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
Forward primer (4988-5004): 5'-TAATACGACTCACTATA-3'
Reverse primer (5551-5570): 5'-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
pT7-N-His-SUMO-WELQ的全序列信息:D5010 pT7-N-His-SUMO-WELQ序列.txt
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D5010-1μg | pT7-N-His-SUMO-WELQ | 1μg |
D5010-100μg | pT7-N-His-SUMO-WELQ | 100μg |
- | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。