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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
RecJf Exonuclease
产品编号: D6006S
产品包装:1.5KU
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价格: ¥ 298.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6006S RecJf Exonuclease 1.5KU 298.00元
D6006M RecJf Exonuclease 7.5KU 1128.00元
D6006L RecJf Exonuclease 30KU 3386.00元

碧云天生产的RecJf Exonuclease,即RecJf核酸外切酶,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种Mg2+依赖的、特异性作用于单链DNA的5’端核酸外切酶。

RecJf Exonuclease是RecJ Exonuclease和maltose binding protein的融合表达蛋白,和RecJ Exonuclease有相同的酶活性。

RecJf Exonuclease能够沿5'→3'方向降解单链DNA;RecJf Exonuclease也可以外切降解双链DNA中的长度大于6nt的5’突出末端(5’-overhang);RecJf Exonuclease对于5’端为磷酸或羟基(5’-P or 5’-OH)的单链DNA有相近的酶切效果;RecJf Exonuclease不能消化和降解RNA;RecJf Exonuclease的酶活性依赖于镁离子[1]。

碧云天生产的RecJf Exonuclease消化线性ssDNA的效果请参考图1:

图1. 碧云天生产的RecJf Exonuclease (D6006)消化线性单链DNA的效果图。在50µl反应体系(50mM NaCl, 10mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT )中,加入合成的1μg 136nt单链DNA (A)或者经PCR扩增产生的1μg 136bp双链DNA片段(B),以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的RecJf Exonuclease,37℃孵育1小时,然后立即置于65℃孵育20分钟以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有基本相当的降解单链线性DNA的效果,但均不能降解双链DNA。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。

用途:本产品可用于从5'端降解单链DNA,也可用于部分消除双链DNA的5'单链突出末端(不能完全得到平末端的双链DNA)。RecJf Exonuclease常应用于同源重组(Homologous recombination)、碱基切除(Base excision)和甲基定向错配修复(Methyl-directed mismatch repair)等的遗传学和生化实验中[2]。

来源:由大肠杆菌的recJ基因和maltose binding protein融合表达,经纯化而获得。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 0.05nmol TCA soluble deoxyribonucleotide in a total reaction volume of 50μl in 30 minutes at 37℃。

纯度:不含除RecJf Exonuclease之外的其它种类的DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4 @ 25℃)。

10X Reaction Buffer:500mM NaCl, 100mM Tris-HCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT (pH7.9 @ 25℃)。

失活或抑制:65℃孵育20分钟可使RecJf Exonuclease失活。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6006S-1 RecJf Exonuclease (30U/μl) 50μl
D6006S-2 10X Reaction Buffer 250μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6006M-1 RecJf Exonuclease (30U/μl) 250μl
D6006M-2 10X Reaction Buffer 1.25ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6006L-1 RecJf Exonuclease (30U/μl) 1ml
D6006L-2 10X Reaction Buffer 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少一年有效。

注意事项:

由于RecJf Exonuclease只特异性催化5'→3'方向单链线性DNA的降解,不能从3'→5'方向降解单链线性DNA,也不能作用于双链DNA,因而使用RecJf Exonuclease时,请注意选择适当的相应底物类型。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.参考下表在冰浴中设置反应体系(以50μl体系为例):
Reagent Volume Final Concentration
ssDNA xμl 0.02ug/μl
10X Reaction Buffer 5μl 1X
RecJf Exonuclease (30U/μl) 1μl 0.6U/μl
Nuclease-free Water (44-x)μl -
Total Volume 50μl -
注:如果同时进行多个反应,可把上表中除底物ssDNA之外的所有组分预先混合,然后再分装到各反应管;RecJf Exonuclease使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。
2.适当轻轻混匀反应体系,随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。
3.反应条件:37℃孵育20分钟。反应时间可以根据实际情况酌情适当延长。
4.终止反应:反应结束后立即将反应产物在65℃条件下孵育20分钟,以终止反应。
5.将反应后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳,拍照观察并分析酶切效果。
6.其它用途请自行参考RecJf Exonuclease的相关文献资料进行。
常见问题:
1.能否用RecJf Exonuclease生成平末端的DNA?
不能。由于RecJf Exonuclease对作用的底物具有一定的选择性,当双链DNA的5'端只有6个甚至更少的碱基突出时,RecJf Exonuclease不能很好地发挥其5'→3'的外切酶活性。建议使用碧云天的D7012 DNA末端平滑试剂盒,或使用D7052 T4 DNA Polymerase等进行双链DNA末端的平末端化。
2.RecJf Exonuclease与外切酶Ⅰ (Exonuclease Ⅰ)之间有什么不同?
RecJf Exonuclease是特异性沿5'→3'方向降解单链线性DNA分子,而Exonuclease Ⅰ是催化单链线性DNA分子3'→5'方向的降解。
3.RecJf Exonuclease能否被热失活?
可以。将RecJf Exonuclease在65℃条件下孵育20分钟,即可使其完全失活。
4.RecJf Exonuclease能否沿5'→3'方向降解单链RNA分子?
不能。RecJf Exonuclease是特异性作用于单链DNA的核酸外切酶。只能以ssDNA或带有5'突出末端(> 6nt)的dsDNA为底物,催化单链部分沿着5'→3'方向脱氧核糖核苷酸的移除反应,而不能作用于RNA分子。
参考文献:
1.Han ES, Cooper DL, Persky NS, Sutera VA Jr, Whitaker RD, et al. Nucleic Acids Res. 2006. 34(4):1084-91.
2.Sutera VA, Jr., Han ES, Rajman LA and Lovett ST. J Bacteriol. 1999. 181(19):6098-102.
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