产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D6003S | Exonuclease T | 250U | 228.00元 |
D6003M | Exonuclease T | 1250U | 898.00元 |
D6003L | Exonuclease T | 5000U | 2898.00元 |
碧云天生产的Exonuclease T,即核酸外切酶T,也称RNase T,是一种从大肠杆菌中表达纯化获得的能够特异催化单链DNA或RNA从3'-5'方向降解的核酸外切酶[1]。Exonuclease T常用于单链DNA/RNA的消化,或将带有3'突出末端的双链DNA或双链RNA生成平末端[2]。
Exonuclease T对单链RNA和单链DNA 3'端外切酶的催化活性不同,对于单链DNA的活性要高很多。在标准反应条件下,完全消化1.0pmol的rA20需要1U的Exonuclease T。而1U的Exonuclease T 可以在30分钟内从50pmol Fam-labeled poly-dT酶切产生1nmol dT 。相当于两者的每活性相差约50倍左右。
Exonuclease T对3'端末端含有一个胞嘧啶的RNA底物,降解活性会降低100倍;对3'端末端含有两个连续的胞嘧啶的底物,没有降解活性。因此Exonuclease T难以降解3'端含有胞嘧啶的单链RNA。
碧云天生产的Exonuclease T用于催化降解双链DNA和单链DNA的效果可参考图1。
图1. 碧云天生产的Exonuclease T (D6003)用于催化降解双链DNA和单链DNA的效果图。A. 在20µl反应体系(50mM Potassium Acetate,20mM Tris-acetate,10mM Magnesium Acetate,1mM DTT (pH7.9 @ 25ºC))中加入20pmol的不同类型DNA底物,以及5U的Exonuclease T,25ºC孵育30分钟进行反应,反应完成后65ºC孵育20分钟以终止反应。取反应后产物5μl,加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳60分钟),之后用NA-Red (EB升级换代产品, 2000X) (D0128/D0130)室温染色5分钟,在紫外灯下观察实验结果。如图所示,碧云天生产的Exonuclease T可有效将ssDNA和3'突出的双链DNA,从3'-5'方向进行消化降解,但不能作用于平末端、5'突出的双链DNA。B. 在20µl反应体系(50mM Potassium Acetate,20mM Tris-acetate,10mM Magnesium Acetate,1mM DTT (pH7.9 @ 25ºC))中加入20pmol长度为50nt的ssDNA,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的Exonuclease T,25ºC孵育30分钟进行反应,反应完成后65ºC孵育20分钟以终止反应。取反应后产物5μl,加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),然后进行1%琼脂糖凝胶电泳(140V电泳30分钟),在紫外灯下观察实验结果。如图所示,本产品与N公司的Exonuclease T产品相比,具有类似的消化降解ssDNA的效果。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异,图中所示结果仅供参考。
用途:去除双链DNA的3'突出末端生成平末端;DNA测序或SNP分析前,去除PCR反应中的单链引物;去除nested PCR中的单链引物;去除样品中的单链DNA,保留双链DNA [3]。
来源:纯化自携带编码大肠杆菌Exonuclease T基因的E.coli重组菌株。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to release 1nmol of single dT nucleotides from 50pmol of Fam-labeled polythymidine substrate in 30 minutes at 25ºC。
纯度:不含除Exonuclease T以外的其它种类的DNA/RNA外切酶,不含DNA/RNA内切酶。
酶储存液:10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4 @ 25ºC)。
10X Reaction Buffer :500mM Potassium Acetate, 200mM Tris-acetate, 100mM Magnesium Acetate, 10mM DTT (pH7.9 @ 25ºC)。
失活或抑制:65ºC孵育20分钟可使Exonuclease T失活。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6003S-1 | Exonuclease T (5U/µl) | 50μl |
D6003S-2 | 10X Reaction Buffer | 0.25ml |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6003M-1 | Exonuclease T (5U/µl) | 250μl |
D6003M-2 | 10X Reaction Buffer | 1.25ml |
- | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6003L-1 | Exonuclease T (5U/µl) | 1ml |
D6003L-2 | 10X Reaction Buffer | 5ml |
- | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,至少两年有效。
注意事项:酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Reagent | Volume | Final Concentration |
Nuclease-Free Water | (47-x)μl | - |
10X Reaction Buffer | 2μl | 1X |
Substrate | xμl (5nmol bases) | 0.1nmol/µl |
Exonuclease T | 1μl | 0.1U/µl |
Total Volume | 50μl | - |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D6003S | Endonuclease T | 250U |
D6003M | Endonuclease T | 1250U |
D6003L | Endonuclease T | 5000U |
D6006S | RecJf Exonuclease | 1.5KU |
D6006M | RecJf Exonuclease | 7.5KU |
D6006L | RecJf Exonuclease | 30KU |
D7039 | Klenow Fragment, Exo- | 100U |
D7041S | Klenow Fragment, Exo- | 200U |
D7041M | Klenow Fragment, Exo- | 1000U |
D7041L | Klenow Fragment, Exo- | 5000U |
D7043S | E.coli DNA Polymerase I | 250U |
D7043M | E.coli DNA Polymerase I | 1000U |
D7043L | E.coli DNA Polymerase I | 5000U |
D7080S | T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) | 250U |
D7080M | T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) | 1250U |
D7080L | T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) | 5000U |
D7082S | T5 Exonuclease | 1000U |
D7082M | T5 Exonuclease | 5000U |
D7082L | T5 Exonuclease | 20kU |
D7084S | Lambda Exonuclease | 1KU |
D7084M | Lambda Exonuclease | 5KU |
D7084L | Lambda Exonuclease | 25KU |
R7088S | RNase H | 250U |
R7088M | RNase H | 1000U |
R7088L | RNase H | 5000U |
R7096S | RNase T1 | 100000U |
R7096M | RNase T1 | 500000U |