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order@beyotime.com
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Lipotap脂质体转染试剂

 产品编号: C0520
 产品包装: 0.6ml
 产品价格: 322.00元
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产品简介

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0520 Lipotap脂质体转染试剂 0.6ml 322.00元

    Lipotap脂质体转染试剂(Lipotap Liposomal Transfection Reagent)是一种适合于把质粒或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸,以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到培养的真核细胞中的高效阳离子脂质体转染试剂。Lipotap还可以进行活体动物的细胞转染,用于基因治疗等。
    为了实现在真核细胞中高效转染的目的,磷酸钙沉淀法、脂质体、阳离子聚合物、病毒、显微注射、电转等许多方法被发展起来。但这些方法存在一个或多个缺点,包括有细胞毒性、重复性差、操作烦琐、转染效率相对较低或价格非常昂贵等。
    碧云天独立研发的Lipotap脂质体转染试剂,尽量避免了上述缺点,实现了无明显细胞毒性、重复性好、操作简单、转染效率较高,并且价格非常优惠。用Lipotap转染细胞后,对于大多数细胞,72小时内不更换培养液无明显细胞毒性。
    Lipotap转染试剂是一种经过精心优化配制的阳离子脂质体。Lipotap不仅适用于常规的质粒转染,也适用于siRNA转染。
    和其它一些阳离子脂质体不同的是,使用Lipotap转染时血清的存在不影响转染效率,这样可以减小去除血清对细胞的损伤。
    Lipotap对于贴壁细胞和悬浮细胞均适用,并且可以用于稳定表达细胞株的筛选。
    Lipotap的转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
    关于不同的细胞转染试剂的主要特点和差异方面的比较,以及如何选择适当的细胞转染试剂,可参考碧云天的相关网页:http://www.beyotime.com/transfection.htm
    对于六孔板而言,一个包装的本转染试剂可以转染40个孔。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

C0520

Lipotap脂质体转染试剂

0.6ml

说明书

1份

保存条件:
    4℃保存,一年有效。
注意事项:
    使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提,以保证可以获得较高的转染效率。
    转染前细胞必须处于良好的生长状态。
    需自备不含抗生素和glutamine的DMEM溶液。
    Lipotap不能vortex或离心,宜缓慢晃动混匀。
    Lipotap使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1 .细胞培养(以六孔板为例,其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作):
   在转染前一天(20-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)

   培养到六孔板内,使第二天细胞能达到约70-80%满。
2. 在进行下述转染步骤前,把六孔板每孔内换成新鲜的细胞培养液。培养液的体积约为2ml左右,

   可以含有血清和抗生素。
3. 把Lipotap脂质体转染试剂轻轻混匀。
4. 参考下表,对于待转染的六孔板中一个孔的细胞,在一洁净无菌离心管内依次加入适量不含抗

   生素和glutamine的DMEM溶液,15μl Lipotap,及2.5μg DNA,使最终体积为75μl,用枪轻轻

   吹打混匀。注意:不可Vortex或离心。

 

One well for 6-well plate

One well for 24-well plate

60mm dish

100mm dish

DMEM

(60-x)μl

(15-x)μl

(120-x)μl

(240-x)μl

Lipotap

15μl

4μl

30μl

60μl

DNA

xμl(2.5μg)

xμl(0.6μg)

xμl(5μg)

xμl(10μg)

Final volume

75μl

19μl

150μl

300μl

   注1:对于六孔板中一个孔的细胞,Lipotap的用量可以在8-20μl内进行适当调节,DNA用量可

    以在1-4μg的范围内进行适当调节。最佳的转染条件,因具体的细胞和培养条件而定,可以在

    上述推荐范围内自行优化转染条件。对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所

    需的Lipofecter和DNA混合物配置在一个离心管内,后续混匀孵育等步骤后可以分加到各个孔内。
   注2:对于其它培养板或培养器皿,各种试剂的用量可以参考上表按照细胞培养面积按比例进行换
    算。如果转染RNA或寡核苷酸等可以参考转染DNA的条件进行。
   注3:转染siRNA或其它类似的数十个碱基对双链核酸可以参考下表进行:

For siRNA

One well for 6-well plate

DMEM

(65-x)μl

Lipotap

10μl

DNA

xμl(1.6μg)

Final volume

75μl

5. 15-25℃孵育10-15分钟。有可能出现絮状沉淀物,属正常现象,不会影响转染效率。
6. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞,均把75μl Lipotap-DNA混合物全部加入六孔板的一个孔内。加入

   时注意尽量均匀加入到整个孔内,随后轻轻混匀。
7. 细胞培养箱内培养3-6小时后,去除含有Lipotap-DNA的培养液。每孔加入2ml新鲜细胞培养液继

   续培养。注:通常Lipotap-DNA混合物和细胞一起孵育3-10小时已经足够产生较高的转染效率。

   大多数细胞和Lipotap-DNA一起培养长达72小时未见明显细胞毒性。但转染后3-6小时更换新鲜

   培养液对于一些生长非常快速的细胞有助于提高转染效率。
8. 对于基因表达,再培养24-40小时后即可检测转染效果;对于RNAi通常需要培养3-5天,并且期间

   需要更换培养液。如果用于筛选稳定表达细胞株,则在转染后24-40小时即可加入适当的筛选药

   物,例如G418等,进行稳定表达细胞株的筛选。



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