使用说明：
1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后立即置于冰上并混匀。第一次使用时，把1.5ml
    PMSF(溶剂)加入到PMSF(晶体)中，溶解并混匀，即得到1.5ml 100mM PMSF。配制好的100mM PMSF溶
    液-20℃保存。如果最终目的是制备线粒体蛋白，根据样品数量，取适量相应的线粒体分离试剂备
    用，在线粒体分离试剂加入到组织样品中前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适量线
    粒体裂解液备用，在线粒体裂解液加入到线粒体样品中前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为
    1mM。
2. 从软组织(例如肝脏和脑)中分离线粒体：
2A. 使用新鲜的动物组织，通常要求动物处死后不超过一小时，并且保存在冰上的组织。请勿使用经过
    冷冻保存的组织。
2B. 剪取一小块组织，重量约为50-100mg。在1.5ml离心管内对剪取的组织进行称重。用PBS洗涤组织一
    次。
2C. 把组织放在一个置于冰上的离心管或培养皿中，用剪刀或刀片把组织剪切成非常细小的组织碎片。
2D. 加入10体积预冷的线粒体分离试剂A或临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂A，在冰浴上进行匀浆，
    匀浆10次左右。注：如果组织的重量为80mg，可以大致认为组织的体积接近80微升，此时需加入800
    微升线粒体分离试剂A。
2E. 把匀浆在600g，4℃离心5分钟。
    注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为1000g，其它离心条件不变；获得
    更高纯度线粒体的缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
2F. 小心把上清转移到另一离心管中，在11,000g，4℃离心10分钟。
    注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为3500g，其它离心条件不变；获得
    更高纯度线粒体的缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
2G. 小心去除上清。沉淀即为分离得到的线粒体。
    注：如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，在本步骤需收集上清，并且在收集上清时注意勿触及
    沉淀。随后把收集的上清12000g，4℃离心10分钟。取上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。
3. 从硬组织(例如心肌和骨骼肌)中分离线粒体：
3A. 对于心肌组织采用线粒体分离试剂A，对于骨骼肌组织采用线粒体分离试剂B，对于其它类似组织可
    以优先考虑使用线粒体分离试剂A，如遇到效果不佳的情况可以试用线粒体分离试剂B。
3B. 使用新鲜的动物组织，通常要求动物处死后不超过一小时，并且保存在冰上的组织。请勿使用经过
    冷冻保存的组织。
3C. 剪取一小块组织，重量约为50-100mg。在1.5ml离心管内对剪取的组织进行称重。用PBS洗涤组织一
    次。
3D. 把组织放在一个置于冰上的离心管或培养皿中，用剪刀或刀片把组织剪切成非常细小的组织碎片。
3E. 加入10体积预冷的PBS，冰浴3分钟。注：如果组织的重量为80mg，可以大致认为组织的体积接近80
    微升，此时需加入800微升PBS。
3F. 600g离心10-20秒，沉淀组织样品，弃上清。
3G. 再加入8体积预冷的胰酶消化液，冰浴20分钟。
    注：如果组织的重量为80mg，此时需加入约640微升相应的胰酶消化液。
3H. 600g离心10-20秒，沉淀组织样品，弃上清。
3I. 加入2体积相应线粒体分离试剂，重悬组织，用于洗去残余的胰酶。
    注：如果组织的重量为80mg，此时需加入约160微升线粒体分离试剂。
3J. 600g离心10-20秒，沉淀组织样品，弃上清。
3K. 加入8体积预冷的相应线粒体分离试剂或临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂，在冰浴上进行匀浆，
    匀浆20-30次。
    注：如果组织的重量为80mg，此时需加入约640微升相应的线粒体分离试剂。
3L. 把匀浆在600g，4℃离心5分钟。
    注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为1000g，其它离心条件不变；获得
    更高纯度线粒体的缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
3M. 小心把上清转移到另一离心管中，在11,000g，4℃离心10分钟。
    注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为3500g，其它离心条件不变；获得
    更高纯度线粒体的缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
3N. 小心去除上清。沉淀即为分离得到的线粒体。
    注：如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，在本步骤需收集上清，并且在收集上清时注意勿触及
    沉淀。随后把收集的上清12000g，4℃离心10分钟。取上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。
4. 线粒体的使用：
4A. 如果用于完整线粒体的功能或酶活性研究，可以加入适量线粒体储存液，重悬线粒体。通常每100mg
    组织获得的线粒体可以用40微升相应的线粒体储存液重悬，预期分离获得的线粒体样品的蛋白浓度
    为10-20mg/ml。蛋白浓度测定方法可以使用BCA法。BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/
    P0011/P0012/P0012S)可以向碧云天订购。
4B. 如果用于线粒体的蛋白分析，初始重量为50-100mg的组织样品分离得到的线粒体样品中可以加入
    150-200微升临用前添加了PMSF的线粒体裂解液裂解线粒体。裂解后的线粒体可以用于PAGE、
    Western、IP以及线粒体中的一些酶活性的测定等。裂解后的蛋白样品可以使用BCA法测定蛋白
    浓度。
4C. 如果用于双向电泳，请使用适当的用于双向电泳的裂解液处理线粒体。

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