pp53-TA-luc(报告基因质粒)

 产品编号: D2223
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D2223 pp53-TA-luc(报告基因质粒) 1μg 862.00元

    pp53-TA-luc(报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于检测p53转录活性水平的报告基因质粒。
pp53-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个p53结合位点,可以高灵敏度地检测p53的激活水平。
    pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的
新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
    pp53-TA-luc质粒的主要信息如下:
    Base pairs                                                     5659
    p53 response element                                           20-73
    Minimal TA promoter (pTA)                                      96-118
    luc2 reporter gene                                             160-1812
    SV40 late poly(A) signal                                       1847-2068
    SV40 early enhancer/promoter                                   2116-2534
    Synthetic neomycin phosphotransferase
    (Neor) coding region                                           2559-3353
    Synthetic poly(A) signal                                       3378-3426
    Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region            3493-3512
    ColE1-derived plasmid replication origin                       3750
    Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region                  4541-5401
    Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site            5506-5659
    Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region            5608-5627
    pp53-TA-luc质粒的图谱如下:
             
    pp53-TA-luc的多克隆位点及p53 response element的详细图谱如下:
         BglI         KpnI                p53 response element
    1   GGCCTAACTG GCCGGTACCA CGTTTGCCTT GCCTGGACTT GCCTGGCCTT
        CCGGATTGAC CGGCCATGGT GCAAACGGAA CGGACCTGAA CGGACCGGAA
                                 BglII      HindIII
    51  GCCTTGGACA TGCCCGGGCT GTCAGATCTG CAGAAGCTTA GACACTAGAG
        CGGAACCTGT ACGGGCCCGA CAGTCTAGAC GTCTTCGAAT CTGTGATCTC
        Minimal TA promoter
    101 GGTATATAAT GGAAGCTCGA CTTCCAGCTT GGCAATCCGG TACTGTTGGT
        CCATATATTA CCTTCGAGCT GAAGGTCGAA CCGTTAGGCC ATGACAACCA

    pp53-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pp53-TA-luc)包括:
     Aat II   Afl II    Asc I    Ase I   Bsa I       BsaA I   BsiW I   BspM II
     BssH II  Eco72 I   EcoR I   EcoR V  Mlu I       Nde I    Nhe I    Nru I
     PaeR7 I  PflM I    Pme I    Pml I   Psp1406 I   Rsr II   Sac I    SnaB I
     Spl I    Tth111 I  Vsp I    Xcm I   Xho I       Xmn I
    pp53-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pp53-TA-luc once)包括:

Sfi I      GGCCN,NNN`NGGCC   9
Bgl I      GCCN,NNN`NGGC     9
Acc65 I    G`GTAC,C          15
Asp718     G`GTAC,C          15
Kpn I      G,GTAC`C          19
PspA I     C`CCGG,G          64
Xma I      C`CCGG,G          64
Srf I      GCCC|GGGC         66
Sma I      CCC|GGG           66
Bgl II     A`GATC,T          75
Hind III   A`AGCT,T          85
BsrG I     T`GTAC,A          651
Dra III    CAC,NNN`GTG       1307
Gsu I      CTGGAG 21/19      1540
Bpm I      CTGGAG 22/20      1541
Apo I      R`AATT,Y          1923
Mun I      C`AATT,G          1987
BamH I     G`GATC,C          2080
Stu I      AGG|CCT           2513

EcoN I      CCTNN`N,NNAGG     3034
BsiC I      TT`CG,AA          3429
BstB I      TT`CG,AA          3429
Sal I       G`TCGA,C          3443
Afl III     A`CRYG,T          3693
ApaL I      G`TGCA,C          4007
HgiE II     ACCNNNNNNGGT   -1/134272
Not I       GC`GGCC,GC        4513
BstX I      CCAN,NNNN`NTGG    4537
BstE II     G`GTNAC,C         4540
Ahd I       GACNN,N`NNGTC     4615
Bsu36 I     CC`TNA,GG         4971
Pvu I       CG,AT`CG          4985
Sac II      CC,GC`GG          5009
Bst1107 I   GTA|TAC           5125
Xca I       GTA|TAC           5125
Spe I       A`CTAG,T          5444
BsmA I      GTCTC`/9          5456
BsmB I      CGTCTC 7/11       5457

    pp53-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
    RVprimer3 (5608-5627):
    CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
    pp53-TA-luc的全序列信息: D2223 pp53-TA-luc-seq.txt
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D2223

pp53-TA-luc(报告基因质粒)

1μg

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保存条件:
   -20℃保存。
注意事项:
    本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人
或单位。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。
   抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pp53-TA-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用碧云天的萤火虫萤光素酶报告基因检测
   试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
3. 紫外照射、离子辐射等可以导致DNA损伤的作用或试剂可以激活p53,可以用作pp53-TA-luc报告基因检测
   时的阳性对照。

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