RNase H

 产品编号: D7089
 产品包装: 100U
 产品价格: 162.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7089 RNase H 100U 162.00元

    RNase H,即Ribonuclease H,中文名为核糖核酸酶H,是一种核糖核酸内切酶,可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键,即不能消化单链或双链DNA或RNA。
    特点:特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA,常用于cDNA第二链的合成。
    用途:DNA-RNA杂合链中去除RNA,例如cDNA第二条链合成前去除mRNA;通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切;除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A);体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
    来源:E.coli MRE-600细胞。
    分子量:约18.4kDa(单体)。
    活性定义:37℃20分钟内,能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
    活性检测条件:20mM Tris-HCl(pH7.8),40mM KCl,8mM MgCl2,1mM DTT,24μM[3H]-poly(A).poly(dT),0.03mg/ml BSA ,4%(v/v)glycerol。
    纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含其它核糖核酸酶。
    酶储存溶液:25mM HEPES-KOH(pH8.0),50mM KCl,1mM DTT,1mM EDTA,0.1mg/ml BSA,50%(v/v)glycerol。
    Reaction Buffer(10X):200mM Tris-HCl(pH7.8),400mM KCl,80mM MgCl2,10mM DTT。
    失活或抑制:65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

D7089-1

RNase H(5U/μl)

100U

D7089-2

Reaction Buffer(10X)

0.2ml

说明书

1份

保存条件:
    -20℃保存。
注意事项:
    酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. DNA-RNA杂合链中去除RNA:
a. 用反转录酶,例如BeyoRT M-MuLV反转录酶或BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链,
   70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer(10X)

2μl

无核酸酶去离子水

17.8μl

RNase H(5U/μl)

0.2μl

c. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心
   沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒
   进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
   说明:其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在
   7.5-8.3均可。
2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成:
a. 用反转录酶,例如BeyoRT M-MuLV反转录酶(D7153)BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(D7159)
   BeyoRT cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)(D7166)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I

8μl

无核酸酶去离子水

68.8μl

RNase H(5U/μl)

0.2μl

DNA Polymerase I, E.coli

3μl(30U)

c. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心
   沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意:反应温度不能超过15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀,以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒
   进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
   注:Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃),100mM
   MgCl2,10mM DTT。
3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。


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