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产品简介
产品简介：
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D7166 | BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNa se H-) |
10次 | 368.00元 |
BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)，即BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H minus)是一种采用了经过改造和优化的BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)，用于在总RNA、mRNA等RNA模板的基础上反转录产生cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
采用本试剂盒可以合成长达13kb的cDNA第一链。在采用BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)的
情况下，由于缺失了RNase H，RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解，这样反转录出来的cDNA的长度就会更长，并且产量更高。
试剂盒中提供了RNase Inhibitor，确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反
转录效果。
试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物，前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的
反转录，后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
试剂盒中提供的Control Primer为17聚，即引物的长度为17个碱基。试剂盒中提供的Control RNA为带有3’poly(A)的1.1kb RNA。
使用本试剂盒合成的第一链，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成
等。
本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时足够进行10个cDNA第一链样品的合成。
包装清单：
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D7166-1 |
BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)(200U/μl) |
2000U |
D7166-2 |
Reaction Buffer(5X) |
50μl |
D7166-3 |
RNase Inhibitor(20U/μl) |
10μl |
D7166-4 |
dNTP Mix(10 mM each) |
20μl |
D7166-5 |
Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μl) |
10μl |
D7166-6 |
Random Hexamer Primer(0.2μgμl) |
10μl |
D7166-7 |
Control RNA(20ng/>μl) |
6μl |
D7166-8 |
Control Primer(5pmol/μl) |
6μl |
D7166-9 |
DEPC-treated Water |
0.2ml |
－ |
说明书 |
1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
对于GC含量比较高的RNA的反转录，试剂盒的使用说明中给予了特别说明，请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放
于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明：
1. cDNA第一条链的合成(First-strand cDNA Synthesi)：
a. 参考如下表格设置反转录反应：
模板(后面4种任选一种) |
Total RNA |
0.01-5μg |
或Poly(A) RNA/mRNA |
1-500ng |
|
或Specific RNA |
0.01pg-500ng |
|
| 或Control RNA | 2μl | |
引物(后面3种任选一种) |
Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) |
1μl |
Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) |
1μl |
|
Gene specific primer |
15-25pmol |
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DEPC-treated Water |
－ |
To 12μl* |
70℃孵育5分钟，随后立即放置到冰浴冷却，4℃微离心，随后加入下述试剂** |
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Reaction Buffer (5X) |
－ |
4μl |
RNase Inhibitor (20U/μl) |
－ |
1μl |
dNTP Mix (10 mM each) |
－ |
2μl |
BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-) |
－ |
1μl |
总体积 |
|
20μl |
* To 13.7μl表示加入DEPC-treated Water至最终体积为13.7μl。
** 70℃孵育5分钟并且随后冰浴冷却，这样可以使RNA模板的二级结构充分打开。
b. 轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 如果使用Oligo(dT)18作为引物或使用基因特异性引物，在42℃孵育60分钟。如果使用random
hexamer(随机六聚体)作为引物，先在25℃孵育10分钟，随后在42℃孵育60分钟。注意：对于
GC含量比较高的RNA模板的反转录反应，可以设置为45℃孵育60分钟。
d. 70℃孵育10分钟以失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)并终止反转录反应。说明：对于长
片断的cDNA不推荐采用加热的方法失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)，这种操作可能
会导致部分长片断DNA被剪切。
e. 反转录产物可以直接用于后续的PCR等反应，也可以-20℃冻存以备以后使用。用于后续PCR反应
时，如果PCR的反应体系为50微升，则推荐使用2微升反转录产物。
2. 其他用途请自行参考M-MuLV反转录酶(RNase H-)的相关文献资料进行。
常见问题：
1. RNA反转录产物电泳观察不到。
反转录产物由于是从模板反转录而获得，而模板的量本身比较低，反转录的量通常还要少于模板量，
因此通常RNA的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。
2. 反转录产物通过PCR扩增没有特异性条带。
PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用actin、GAPDH等作为内参进行PCR扩增，看是否可以成
功扩增。如果可以成功，则说明PCR扩增体系没有问题，此时通常是目的基因的引物设计欠佳，当然
也有可能是反转录产物质量欠佳。如果内参不能被很好地扩增，则有可能PCR体系存在问题或反转录
产物质量欠佳。
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使用本产品的文献：
1. Ren H, Zhu F, Zheng C, Sun X, Wang W, Shu H.
Transcriptome analysis reveals genes related to floral development in chrysanthemum
responsive tophotoperiods.
Biochem Genet.2013 Feb;51(1-2):20-32.doi:10.1007/s10528-012-9541-1.Epub 2012 Sep 30.
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