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BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)

 产品编号: D7166
 产品包装: 10次
 产品价格: 368.00元
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产品简介

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7166 BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNa
se H-)
10次 368.00元

    BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-),即BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H minus)是一种采用了经过改造和优化的BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-),用于在总RNA、mRNA等RNA模板的基础上反转录产生cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
    采用本试剂盒可以合成长达13kb的cDNA第一链。在采用BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)
情况下,由于缺失了RNase H,RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解,这样反转录出来的cDNA的长度就会更长,并且产量更高。
    试剂盒中提供了RNase Inhibitor,确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反
转录效果。
    试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物,前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA
反转录,后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
    试剂盒中提供的Control Primer为17聚,即引物的长度为17个碱基。试剂盒中提供的Control RNA为带有3’poly(A)的1.1kb RNA
    使用本试剂盒合成的第一链,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成
等。
    本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时足够进行10cDNA第一链样品的合成。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

D7166-1

BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)(200U/μl)

2000U

D7166-2

Reaction Buffer(5X)

50μl

D7166-3

RNase Inhibitor(20U/μl)

10μl

D7166-4

dNTP Mix(10 mM each)

20μl

D7166-5

Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μl)

10μl

D7166-6

Random Hexamer Primer(0.2μgμl)

10μl

D7166-7

Control RNA(20ng/>μl)

6μl

D7166-8

Control Primer(5pmol/μl)

6μl

D7166-9

DEPC-treated Water

0.2ml

说明书

1

保存条件:
    -20℃保存。
注意事项:
    对于GC含量比较高的RNA的反转录,试剂盒的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放
于普通住宅内。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. cDNA第一条链的合成(First-strand cDNA Synthesi)
   a. 参考如下表格设置反转录反应:

模板(后面4种任选一种)

Total RNA

0.01-5μg

或Poly(A) RNA/mRNA

1-500ng

或Specific RNA

0.01pg-500ng

或Control RNA 2μl

引物(后面3种任选一种)

Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl)

1μl

Random Hexamer Primer (0.2μg/μl)

1μl

Gene specific primer

15-25pmol

DEPC-treated Water

To 12μl*

70℃孵育5分钟,随后立即放置到冰浴冷却,4℃微离心,随后加入下述试剂**

Reaction Buffer (5X)

4μl

RNase Inhibitor (20U/μl)

1μl

dNTP Mix (10 mM each)

2μl

BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)

1μl

总体积

 

20μl

      * To 13.7μl表示加入DEPC-treated Water至最终体积为13.7μl
      ** 70℃孵育5分钟并且随后冰浴冷却,这样可以使RNA模板的二级结构充分打开。
   b. 轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀),随后离心沉淀液体。
   c. 如果使用Oligo(dT)18作为引物或使用基因特异性引物,在42℃孵育60分钟。如果使用random
      hexamer(随机六聚体)作为引物,先在25℃孵育10分钟,随后在42℃孵育60分钟。注意:对于
      GC含量比较高的RNA模板的反转录反应,可以设置为45℃孵育60分钟。
   d. 70℃孵育10分钟以失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)并终止反转录反应。说明:对于长
      片断的cDNA不推荐采用加热的方法失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-),这种操作可能
      会导致部分长片断DNA被剪切。
   e. 反转录产物可以直接用于后续的PCR等反应,也可以-20℃冻存以备以后使用。用于后续PCR反应
      时,如果PCR的反应体系为50微升,则推荐使用2微升反转录产物。
2. 其他用途请自行参考M-MuLV反转录酶(RNase H-)的相关文献资料进行。

常见问题:
1. RNA反转录产物电泳观察不到。
   反转录产物由于是从模板反转录而获得,而模板的量本身比较低,反转录的量通常还要少于模板量,
   因此通常RNA的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。
2. 反转录产物通过PCR扩增没有特异性条带。
   PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用actin、GAPDH等作为内参进行PCR扩增,看是否可以成
   功扩增。如果可以成功,则说明PCR扩增体系没有问题,此时通常是目的基因的引物设计欠佳,当然
   也有可能是反转录产物质量欠佳。如果内参不能被很好地扩增,则有可能PCR体系存在问题或反转录
   产物质量欠佳。

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产品编号 产品名称 包装
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R0016 Trizol(总RNA抽提试剂) 100ml
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1. Ren H, Zhu F, Zheng C, Sun X, Wang W, Shu H.
   Transcriptome analysis reveals genes related to floral development in chrysanthemum
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   Biochem Genet.2013 Feb;51(1-2):20-32.doi:10.1007/s10528-012-9541-1.Epub 2012 Sep 30.



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