生物制品(如单克隆抗体、重组蛋白、疫苗、基因治疗载体等)在生产过程中通常使用哺乳动物细胞(如HEK293细胞、Vero细胞）、细菌(如大肠杆菌)或其他细胞系作为“工厂”来生产目标蛋白或病毒。这些宿主细胞的DNA会不可避免地残留在最终产品中。宿主残留DNA是指在生物制品中来源于宿主细胞中的DNA片段分子。由于其具有潜在的理论风险，如致癌性和感染性。所以，宿主DNA残留检测是必不可少的。
表：生物制品残留DNA标准
| 药典 | 标准 |
| 中国药典 | 以细胞基质生产的生物制剂DNA残留量不能超过100 pg/剂； 以细菌或真菌基质生产的疫苗，其宿主DNA残留量应≤10 ng/剂。 |
| WHO | 推荐非肠道接种成品中残留DNA不高于10 ng/剂； 口服类成品中残留DNA不高于100ug/剂。 |
| FDA | 生物制品宿主细胞DNA残余限度为100 pg/剂； 对于大剂量生物制品如单克隆抗体，根据其残留DNA来源及给药途径不同，DNA残留量可放宽至10 ng/剂； 对于选用连续非致瘤性细胞生产的生物制品成品，其DNA残留量应控制在10 ng/剂以下，长度不大于200 bp。 |
| 欧洲药典 | 规定生物制品残留DNA限度不超过10 ng/剂 |
所以，宿主DNA残留检测是必不可少的质检环节。
碧云天生物推出HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒D7705、质粒DNA残留探针法qPCR检测试剂盒D7707和Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒D7709，高特异性的检测低至飞克级别的DNA残留。
碧云天同时提供BeyoMag™磁珠法残留DNA样品制备试剂盒D0051、大肠杆菌DNA残留探针法qPCR检测试剂盒D7701、CHO DNA残留探针法qPCR检测试剂盒D7703，全方位满足不同物种残留DNA检测。
产品特点与性能数据
灵敏度度高：最低检测限可至飞克级别。
HEK293 DNA残留检测低至30fg/μl。
图1：HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7705)用于不同浓度梯度的阳性对照的扩增曲线及标准曲线。
质粒DNA残留检测低至40 copies/μl，约0.2fg/μl。
图2.碧云天质粒DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7707)用于不同浓度梯度的阳性对照的扩增曲线及标准曲线。
Vero DNA残留检测低至3fg/μl。
图3.碧云天Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7709)用于不同浓度梯度的阳性对照的扩增曲线及标准曲线。
特异性强，不相关基因组DNA对残留检测无干扰。
只检测HEK293宿主细胞DNA，与其它物种DNA无交叉反应。
图4.碧云天HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7705)检测不同浓度梯度阳性对照以及分别加入3ng CHO细胞和E. coli基因组DNA的阳性对照的标准曲线。
只检测质粒DNA残留，与其它物种DNA无交叉反应。对于不相关DNA (3ng)检测的平均CT值见下表，均低于检测下限，不在标曲范围内。
只检测Vero宿主细胞DNA，与其它物种DNA无交叉反应。
图5.碧云天Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7709)检测不同浓度梯度阳性对照以及分别加入3ng CHO细胞和E. coli细胞基因组DNA的阳性对照的标准曲线。
重复性好，重复多次检测，CV值(变异系数)均小于5%。
HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7705)重复12次检测3pg/μl、30fg/μl HEK293 DNA的CT值见下表，CV值(变异系数)均小于5%。
| 重复次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | CV |
| 3pg/μl CT值 | 24.90 | 24.81 | 25.16 | 23.98 | 24.27 | 24.24 | 24.06 | 23.92 | 24.26 | 24.07 | 24.24 | 24.42 | 1.55% |
| 30fg/μl CT值 | 31.40 | 30.77 | 30.58 | 29.82 | 30.04 | 30.35 | 30.18 | 30.47 | 30.72 | 30.45 | 31.01 | 31.37 | 1.53% |
质粒DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7707)重复10次检测2×10⁴ 或2×10³ copies/μl非线性化质粒DNA的CT值见下表，CV值(变异系数)均小于5%。
| 重复次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | CV |
| 2×10⁴ copies/μl CT值 | 26.91 | 26.84 | 26.53 | 26.13 | 26.84 | 26.03 | 26.53 | 26.23 | 26.05 | 26.49 | 1.21% |
| 2×10³ copies/μl CT值 | 30.05 | 29.73 | 30.04 | 29.53 | 29.00 | 29.12 | 29.54 | 30.03 | 29.54 | 29.13 | 1.27% |
Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7709)重复12次检测3pg/μl、30fg/μl Vero DNA的CT值见下表，CV值(变异系数)均小于5%。
| 重复次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | CV |
| 3pg/μl CT值 | 23.14 | 23.37 | 23.52 | 23.03 | 23.36 | 22.79 | 22.96 | 23.01 | 22.80 | 22.87 | 23.34 | 23.51 | 1.11% |
| 30fg/μl CT值 | 30.03 | 30.08 | 29.64 | 30.21 | 29.72 | 30.13 | 29.64 | 29.36 | 30.09 | 29.80 | 29.42 | 30.54 | 1.12% |
稳定性高，不同程度的碎片化DNA对DNA残留检测基本无干扰。
利用不同量微球菌核酸酶(D7201)将HEK293 DNA Control碎片化至不同程度，然后使用本试剂盒进行qPCR检测。结果显示，不同碎片化程度的DNA，基本都会被检测到，不影响检测效果。
图6.碧云天HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7705)对不同程度碎片化HEK293 DNA的检测效果。
利用不同量微球菌核酸酶 (D7201)将Vero DNA Control碎片化至不同程度，然后使用本试剂盒进行qPCR检测。结果显示，超过200bp的DNA，基本都会被检测到，不影响检测效果；但如果碎片化程度过于严重，导致200bp以下的DNA居多，会使DNA残留量检测值偏小。
图7.碧云天Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒(D7709)对不同程度碎片化Vero DNA的检测效果。
碧云天提供生物制品残留检测全方位解决方案，包括残留DNA提取、多种残留DNA检测和残留核酸酶检测，全方位为助力生物医药开发质量控制。
产品信息
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
| D7705S | HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒 | 50次 | |
| D7705M | HEK293 DNA残留探针法qPCR检测试剂盒 | 200次 | |
| D7707S | 质粒DNA残留探针法qPCR检测试剂盒 | 50次 | |
| D7707M | 质粒DNA残留探针法qPCR检测试剂盒 | 200次 | |
| D7709S | Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒 | 50次 | |
| D7709M | Vero DNA残留探针法qPCR检测试剂盒 | 200次 |
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