碧云天生产的E.coli DNA Polymerase I，即大肠杆菌DNA聚合酶I，是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种DNA模板依赖的DNA聚合酶，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'→3'方向的DNA合成[1]。E.coli DNA Polymerase I同时还具备双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性、单链特异性的3'→5'外切酶活性以及核糖核酸酶H活性[2]。E.coli DNA Polymerase I的DNA合成酶活性和双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性，可以实现缺刻处3'-OH起始的DNA合成和5'端单链DNA的降解，实现缺口平移。E.coli DNA Polymerase I的单链特异性的3'→5'外切酶活性可以起到DNA合成的校验作用(proofreading)。在有dNTP存在的情况下，E.coli DNA Polymerase I更多地表现为DNA聚合酶活性；而当dNTP不存在的情况下，E.coli DNA Polymerase I更多表现为单链特异性的外切酶活性，例如可以表现为平末端双链DNA中的任一条链的5'端的5'→3'外切酶活性。

E.coli DNA Polymerase I的多功能性可实现以双链DNA中的缺刻或缺口为起点合成新的DNA链；从缺口处降解与模板链互补的DNA链，实现DNA的缺口平移；保证DNA复制过程中错配的校对，并对复制和修复中出现的空隙进行填补[3]。

碧云天生产的E.coli DNA Polymerase I补平双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的E.coli DNA Polymerase I (D7043)补平双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的E.coli DNA Polymerase I，37ºC孵育20分钟进行反应，反应完成后75ºC孵育20分钟以终止反应。取出5μl反应产物，加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60分钟，之后用Gel-Red (EB升级换代产品，10000X) (D0139)室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20µl): 10mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 100µM dNTP Mix, 0.5µM dsDNA with 5' overhang (pH7.9 @ 25ºC)。dsDNA with 5' overhang (也称具有5'突出末端的双链线性DNA)是使用Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)并按照该产品说明书推荐的程序，把5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'和5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'这两条寡核苷酸链进行退火反应得到的产物，并以此退火产物为底物，进行双链DNA 5'突出末端的补平。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的E.coli DNA Polymerase I对3'端带有氨基修饰的双链线性DNA消化(5'→3'外切酶活性)的效果参考图2。

图2. 碧云天生产的E.coli DNA Polymerase I (D7043)对3'端带有氨基修饰的双链线性DNA消化(5'→3'外切酶活性)的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的E.coli DNA Polymerase I，37ºC孵育20分钟进行反应，反应完成后75ºC孵育20分钟以终止反应。取出5μl反应产物，加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。180V电泳60分钟，之后用Gel-Red (EB升级换代产品，10000X) (D0139)室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。反应体系(20μl)：10mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 0.5µM dsDNA。3'端带有氨基修饰的单链DNA不会被E.coli DNA Polymerase I 的3'→5'外切酶活性所降解。3'端带有氨基修饰的dsDNA是使用Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)并按照该产品说明书推荐的程序，把5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3'NH2和5'-GTAAAACGACGGCCAGTCTATGTATCTATGTAT-3'NH2这两条寡核苷酸链进行退火反应得到的产物，并以此退火产物为底物，进行双链线性DNA消化。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

用途：DNA合成；双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平；双链DNA 3'突出末端(3' overhang)的削平；cDNA第二条链合成[4]；与DNase I一起使用，进行DNA切口平移；DNA的切口翻译以获得具有高比活性的探针。

来源：纯化自携带编码E.coli DNA Polymerase I基因的E.coli重组菌株。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 37°C.

纯度：不含除E.coli DNA Polymerase I之外的其它种类的DNA外切酶，不含内切酶，不含RNase。

酶储存液：25mM Tris-HCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol (pH7.4 @25ºC)。

10X Reaction Buffer: 100mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT (pH7.9 @25ºC)。

失活或抑制：75ºC孵育20分钟可使E.coli DNA Polymerase I失活。

-20ºC保存，两年有效。

由于E.coli DNA Polymerase I具有外切酶活性，在进行反应前应尽量避免环境温度偏高导致的DNA链被切除。

E.coli DNA Polymerase I不具有内切酶活性，且本产品不包含DNase I，进行切口翻译反应时必须另外添加DNase I。

对E.coli DNA Polymerase I剧烈震荡或搅拌会使酶失活。

E.coli DNA Polymerase I与DNA的亲和力较高，加入过量的酶易发生凝集作用(Aggregation)，影响反应的进行。

E.coli DNA Polymerase I可使用带修饰的核苷酸(例如生物素、地高辛、荧光标记核苷酸)作为DNA合成的底物，以用于DNA探针的标记。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。