碧云天研发生产的Bst 6.0 DNA Polymerase，是一种Bst DNA Polymerase, large fragment (D7050)的同源蛋白，即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA聚合酶大片段的同源蛋白，和Bst DNA Polymerase大片段相比，具有更强的5′→3′DNA聚合酶活性、更强的链置换(Strand displacement)能力、dUTP耐受性、耐盐性以及非离子去垢剂耐受性。Bst 6.0 DNA Polymerase不具有5′→3′和3′→5的核酸外切酶活性，可应用于环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)、交叉引物扩增技术(Crossing priming amplification, CPA)、滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)和基于滚环扩增的等温扩增反应等。Bst 6.0 DNA Polymerase介导的等温扩增温度一般在50-68ºC之间，通常为65ºC，最佳温度与所使用的引物和扩增的产物有关，需要通过实验进行优化。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65°C。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase酶活性效果参考图1。

图1. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的效果图。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用不同量的碧云天的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，65ºC孵育1小时，80ºC加热20分钟灭活，然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品相比，具有相当的酶活性效果。-, 仅未添加酶的阴性对照；+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的dUTP参考图2。

图2. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的高dUTP耐受性的效果图。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用不同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，1.4mM dUTP，0.04U UDGase（D7360S/D7360M），在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，65ºC孵育1小时，80ºC加热20分钟灭活，然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品相比，具有类似的高dUTP耐受性。-, 仅未添加酶的阴性对照；+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的非离子去垢剂参考图3。

图3. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的高非离子去垢剂耐受性的效果图。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用相同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，5%非离子去垢剂（A, Tween-20; B, NP-40; C, TritonX-100），在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，65ºC孵育1小时，80ºC加热20分钟灭活，然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品相比，具有类似对非离子洗涤剂的高耐受性。-, 仅未添加酶的阴性对照；+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

碧云天生产的Bst 6.0 DNA Polymerase进行环介导等温扩增反应可耐受高浓度的钾离子(K+)参考图4。

图4. 碧云天Bst 6.0 DNA Polymerase (D7046)进行环介导等温扩增反应的耐盐性(K+)效果图。在25μl体系，以相同量(0.1ng)的pCMV-Cre-EGFP (D2608)为模板，使用不同量的本产品或N公司(Competitor)的Bst 2.0 DNA Polymerase，引物：1.6µM FIP/BIP，0.2µM F3/B3，0.4µM Loop F/B，1.4mM dNTP each，在1X Bst 6.0 Reaction Buffer (2mM MgSO4)中补加MgSO4至终浓度为8mM，同时补加KCl至终浓度为10mM、50mM或100mM，65ºC孵育1小时，80ºC加热20分钟灭活，然后进行2.0%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品相比，具有类似的耐盐性(K+)。-, 仅未添加酶的阴性对照；+, 仅未添加模板的阴性对照; M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。

来源：Bst 6.0 DNA Polymerase通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。

纯度：无DNA内切酶和外切酶活性。

用途：环介导等温扩增LAMP、交叉引物扩增技术(CPA) 、滚环扩增(RCA)和解旋酶等温扩增（HDA）等DNA等温扩增，多重置换扩增(MDA)，链置换DNA合成，全基因组扩增(WGA)，高GC含量的DNA的测序，纳克级DNA模板的快速测序，建库测序等。

酶储存液：10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol (pH 7.5 @ 25℃）。

10X Bst 6.0 Reaction Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl, 100mM (NH4)2S04, 20mM MgS04, 1%Tween-20 (pH 8.8 @ 25℃)。

失活或抑制：80ºC加热20分钟可使Bst 6.0 DNA Polymerase失活。

-20ºC保存，两年有效。

Bst 6.0 DNA Polymerase不具有5′→3′的核酸外切酶活性。

建议等温扩增反应温度不能高于70ºC，否则会导致酶失活。

Bst 6.0 DNA Polymerase不能用于热循环测序或PCR。

每次等温扩增实验建议设置仅无模板DNA的阴性对照，以排除背景性扩增。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存；

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。