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产品简介
产品简介：
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| S0027 | 200次 | 1228.00元 |
增强型ATP检测试剂盒(Enhanced ATP Assay Kit)可以用于检测普通溶液、细胞或组织内的ATP
(adenosine 5'- triphosphate)水平。细胞和组织样品一步裂解即可完成样品制备，检测灵敏度高达0.1nmol/L，化学发光可以持续稳定达30分钟。本试剂盒的多项指标优于许多国外的同类产品。并且获得的样品还可以同时进行Western检测。
ATP，作为最重要的能量分子，在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降；而高葡萄糖刺激等可上调某些细胞的细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。
样品制备非常简单。本试剂盒提供了可以用于细胞和组织裂解的ATP检测裂解液，简单裂解后即可用于ATP检测。无需进行高氯酸或三氯乙酸(TCA)抽提，或样品裂解后的煮沸等繁琐操作。
本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)催化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本试剂盒在样品体积为100微升时可以检测浓度低达0.1nmol/L的ATP。而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μmol/L，一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg蛋白。并且本试剂盒的检测浓度范围非常大，检测上限可以高达10μmol/L，并在0.1nmol/L-10μmol/L范围内可以形成良好的标准曲线。
本试剂盒进行了特殊的优化设计，使检测ATP时的化学发光非常稳定。对于ATP标准曲线的检测结果显示，在开始反应后10分钟内化学发光无明显下降，开始反应后30分钟内化学发光的下降不超过10%。
使用本试剂盒中的ATP检测裂解液裂解获得的细胞或组织样品，不仅可以用于ATP检测，还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些常规的较易溶解蛋白的Western检测。
本试剂盒的使用方便快捷，通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。
一个包装的本试剂盒至少可以进行200次测试。
包装清单：
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
S0027-1 |
ATP检测试剂 |
3.5ml(0.7ml/管，共5管) |
S0027-2 |
ATP检测试剂稀释液 |
20ml |
S0027-3 |
ATP标准溶液(0.5mM) |
0.1ml |
S0027-4 |
ATP检测裂解液 |
100ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件：
-20℃保存，半年有效。-70℃保存，一年有效。ATP检测试剂需避光保存。
注意事项：
ATP检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试ATP检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无明显影响，为取得良好的使用效果，建议用户使用时的冻融次不宜超过3次。ATP检测试剂稀释成ATP检测工作液后，最好一次用完，不宜冻存后再使用。
ATP，特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6
小时。
本试剂盒需使用luminometer，即化学发光检测仪(检测荧光素酶报告基因时所用的仪器)。如果没有luminometer，也可以使用液闪仪。液闪仪的测定效果取决于液闪仪的检测灵敏度和检测精度。
使用可检测化学发光的多功能酶标仪时，所用96孔板宜为孔和孔之间不透光的黑板或白板。如使用常规的透明96孔板，需特别注意正确设置酶标仪测定时板子的类型，同时也可以在检测孔之间设置间隔孔，以尽量避免邻近孔之间的相互干扰。
本试剂盒提供的ATP检测裂解液可以有效裂解并释放常见的培养细胞和组织中的ATP。对于一些特殊的组织或样品，如果发现检测出来的ATP水平显著低于预期水平，可以在裂解样品后并且在离心前，取部分样品煮沸2分钟以充分释放ATP。煮沸后样品中的蛋白会变性，从而会在后续的离心步骤中被沉淀，因此煮沸的样品不能用于蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。可以使用剩余的部分样品进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
使用说明：
1. 样品测定的准备：(注意：样品裂解需在4℃或冰上操作)
对于贴壁细胞：
吸除培养液，按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例(即相当于细胞培养液量2毫升的1/10)加入裂
解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分，可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使裂解液
充分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上
清，用于后续的测定。
对于悬浮细胞：
用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照6孔板每孔的细胞量加入200微升裂解液的比
例加入裂解液，裂解细胞。裂解细胞时为了裂解充分可以弹击离心管管底或适当Vortex使裂解液充
分接触并裂解细胞。通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上清，
用于后续的测定。
对于组织样品：
按照每20毫克组织加入约100-200微升裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃匀浆器或其它匀浆设备
进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解。裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上清，用于后续的
测定。
2. 标准曲线测定的准备：
冰浴上溶解待用试剂，把ATP标准溶液用ATP检测裂解液稀释成适当的浓度梯度。具体的浓度需根据
样品中ATP的浓度而定。初次检测可以检测0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10微摩尔/升这几个浓
度，在后续的实验中，可以根据样品中ATP的浓度对标准品的浓度范围进行适当调整。
3. ATP检测工作液的配制：
按照每个样品或标准品需100微升ATP检测工作液的比例配制适当量的ATP检测工作液。把待用试剂在
冰浴上溶解。取适量的ATP检测试剂，按照1:5的比例用ATP检测试剂稀释液稀释ATP检测试剂。例如
0.7毫升ATP检测试剂可以加入3.5毫升ATP检测试剂稀释液配制成4.2毫升ATP检测工作液。稀释后的
ATP检测试剂即为用于后续实验的ATP检测工作液。ATP检测工作液可在冰浴上暂时保存。
4. ATP浓度的测定：
a. 加100微升ATP检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置3-5分钟，以使本底性的ATP全部被消耗
掉，从而降低本底。可以一次性把10-20个检测孔或检测管分别加上100微升ATP检测工作液，从
而节省时间。
b. 在检测孔或检测管内加上20微升样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，至少间隔2秒后，
用luminometer或液闪仪测定RLU值或CPM。(注：样品的体积可以自行在10-100微升范围内调节。
如果样品中的ATP浓度比较低则可以加入100微升样品，如果样品中ATP浓度比较高则可以加入较
小体积的样品，同时标准品也需要使用相同的体积。如果样品中ATP的浓度特别高，可以用ATP检
测裂解液稀释样品后再测定。本试剂盒在加入10-100微升标准品时，在0.1nmol/L-10μmol/L的浓
度范围内ATP浓度和化学发光均以对数作图会呈现很好的线性关系，参考图1。实际测定出来的
数据和所使用的仪器及检测条件有极大关系，特别是和仪器的检测灵敏度关系很大。图1中数据
为100微升标准品并减去空白对照后的数据，仅作参考。)
图1.ATP检测的标准曲线(实际读数可能会因检测仪器等的不同而存在较大差别)。
c. 根据标准曲线计算出样品中ATP的浓度。
d. 为了消除样品制备时由于蛋白量的差异而造成的误差，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试
剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定样品中的蛋白浓度。然后把ATP的浓度换算
成nmol/mg蛋白的形式。
常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光
并被荧光分光光度计检测。Luminometer，即化学发光检测仪，检测的样品本身可以发光，不需要激
发光进行激发。也就是说Luminometer是检测化学发光的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有
luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定
请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行荧光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的ATP检测？
是。荧光素酶报告基因的检测原理和本增强型ATP检测试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定，
并且可以选择相同的测定参数，例如检测前等待时间为2秒，检测时间为10秒等。
3. 多功能酶标仪是否可以用于本试剂盒的ATP检测？
不一定。如果该多功能酶标仪具有检测化学发光的功能，即具有luminometer的功能，就可以用于本
试剂盒的检测，否则就不能了。
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