cDNA第二链合成试剂盒

 产品编号: D7172
 产品包装: 10次
 产品价格: 236.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7172 cDNA第二链合成试剂盒 10次 236.00元

    cDNA第二链合成试剂盒,Second Strand cDNA Synthesis Kit是一种在合成了cDNA第一链的基础上去
RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链,最终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。
    本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,此时DNA Polymerase I可以通过切口平
(nick translation)反应催化形成cDNA第二链。
    使用本试剂盒合成的双链cDNA,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。
    本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时,足够进行20个cDNA第二链样品的
合成。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

D7172-1

RNase H(1U/μl)

10μl

D7172-2

DNA Polymerase I(10U/μl)

30μl

D7172-3

Reaction Buffer(10X)

100μl

说明书

1

保存条件:
    -20℃保存。
注意事项:
    进行第二链合成时,dNTP比较适当的最终浓度约为0.2mM。如果最终浓度过低,在反应体系中需要
适当补充dNTP
    如果希望获得平末端的双链cDNA,可以用T4 DNA Polymerase(D7051)DNA末端平滑试剂盒(D7012)
理。
    酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普
通住宅内。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用说明

使用说明:
1. 用反转录酶,例如BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) (D7160/D7161/D7162)或BeyoRT™ II
   cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) (D7167/D7168)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
2. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer (10X)

8μl

无核酸酶去离子水

68μl

RNase H (1U/μl)

1μl

DNA Polymerase I (10U/μl)

3μl

3. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心
   沉淀液体。
4. 15℃孵育2小时。(注意:反应温度不能超过15℃)
5. 加入5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
6. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂
   盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。

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2. Ren H, Zhu F, Zheng C, Sun X, Wang W, Shu H.
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   Biochem Genet.2013 Feb;51(1-2):20-32.doi:10.1007/s10528-012-9541-1.Epub 2012 Sep 30.
3. Cai L, Yu K, Yang Y, Chen BW, Li XD, Zhang T.
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   Appl Microbiol Biotechnol. 2013 Jan 23. [Epub ahead of print].




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