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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| R7061S | Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) | 20次 | 1528.00元 |
| R7061M | Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) | 100次 | 5698.00元 |
碧云天研发生产的Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7)，即RNA生物素标记试剂盒(SP6/T7)，是一种通过高效的SP6 RNA polymerase或T7 RNA polymerase进行体外转录，从而获得生物素标记的RNA探针的试剂盒。本试剂盒可以配合质粒pRNA-SP6-T7 (RNA体外转录质粒) (D2314)或其它在多克隆位点两侧有SP6或T7 promoter的质粒，在多克隆位点插入目的基因并线性化后使用。
本试剂盒的工作原理是利用带有SP6 Promoter (ATTTAGGTGACACTATAG)或T7 Promoter (TAATACGACTCACTATAGGG)的线性化质粒、PCR产物或合成的DNA片段等为模板，利用SP6 RNA Polymerase或T7 RNA Polymerase能在相对较短的时间内进行体外RNA转录的特性，以Biotin-16-UTP部分取代UTP，从而转录生成生物素标记的RNA探针[1]。
Biotin-16-UTP (Biotin-16-uridine-5'-triphosphate, 即生物素-16-尿苷-5'-三磷酸)是UTP (Uridine-5'-triphosphate, 即尿苷-5'-三磷酸)的生物活性类似物，在体外转录反应中很容易被SP6或T7 RNA Polymerase作为转录反应底物整合到RNA中[2]。由于使用的RNA Polymerase对天然核苷酸(Nucleoside triphosphate, NTP)和生物素标记核苷酸(Biotin-NTP)没有选择倾向性，因此每个RNA转录产物生物素标记的程度可以通过调节转录反应中NTP与Biotin-NTP的比例来控制。本试剂盒将Biotin-16-UTP的比例控制在约35%，使反应和标记效率之间达到较好的平衡。
碧云天Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7)以带有SP6或T7 Promoter的线性化质粒DNA为模板进行转录时的产量参考图1。本试剂盒在标准的RNA转录反应条件下，在20μl的反应体系中，使用1μg的线性化DNA模板(长度约3kb)，37℃孵育2小时，转录产物长度约为500nt时，可合成约8-10μg生物素标记的RNA。合成的标记RNA的数量取决于模板DNA的数量、纯度以及转录产物的长度。进一步延长孵育时间并不会增加生物素标记RNA的产量，但可以通过按比例放大反应体系，获得更多的生物素标记RNA。
图1.碧云天Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) (R7061)的产量参考图。带有SP6 Promoter的线性化质粒DNA模板在SP6 RNA Polymerase作用下进行的转录(图A)；带有T7 Promoter的线性化质粒DNA模板在T7 RNA Polymerase作用下进行的转录(图B)。在20µl反应体系中，通过使用1.0μg 3199bp的线性化质粒DNA为模板，在37℃分别孵育0、15、30、60、120、240分钟，随后70℃孵育10分钟终止反应；加入2μl DNase I, RNase-free (1U/µl)，37℃孵育30分钟消化模板DNA，得到生物素标记的RNA转录产物长度为496nt；用苯酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀并用超微量紫外分光光度计检测得到的RNA产物量。实际产量会因具体实验条件的不同而产生差异，本图仅供参考。
使用本试剂盒获得的RNA探针应用范围广。本试剂盒转录合成的带生物素标记的RNA探针可用于Northern、Southern、原位杂交、RNase保护实验(RNase Protection Assay)等相关研究。
本试剂盒标记的RNA探针后续兼容多种检测方法。本试剂盒转录合成的带有生物素标记的RNA探针可以使用荧光基团、酶或抗体偶联的链霉亲和素(Streptavidin)进行检测。推荐使用辣根过氧化物酶标记Streptavidin (A0303或A0305)与DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(P0202/P0203)或BeyoECL Moon (P0018F)联合使用进行检测，或者使用碱性磷酸酯酶标记Streptavidin (A0312)与BCIP-NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(C3206)联合使用进行检测。后者的检测效果请参考图2。
图2.碧云天Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) (R7061)转录合成生物素标记的RNA探针的检测效果图。在20µl反应体系中，通过使用1.0μg 3199bp的线性化质粒DNA为模板，在37℃孵育2小时；随后加入2μl DNase I (1U/µl)，37℃孵育30分钟消化模板DNA，得到生物素修饰的RNA转录产物；用苯酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀纯化RNA产物，用超微量紫外分光光度计检测得到的RNA产物浓度。取适量体积的反应产物(样品中RNA含量分别为800、600、400、200和100ng)滴至尼龙膜(FFN13)上，待样品风干后，进行紫外交联；用Wash Buffer (0.1% Tween-20 in 1X PBS)洗涤3分钟，洗去未结合至膜上的RNA，再用Blocking Buffer (5% Non-fat milk in Wash Buffer)室温封闭1小时。将膜转移至碱性磷酸酯酶标记Streptavidin (A0312)的稀释液中，室温孵育2小时(或4℃孵育过夜)；孵育结束后用Wash Buffer室温洗涤3-5次，每次5分钟；随后将洗涤过的尼龙膜浸泡在BCIP/NBT碱性磷酸酯酶染色工作液(C3206)中，室温避光孵育3-5分钟，直至显色至预期深浅；用蒸馏水室温洗涤1-2次，每次5分钟，终止显色反应，最后使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统记录化学发光效果。实验结果显示，与未进行生物素标记的RNA探针相比，使用本试剂盒生成的RNA探针能明显检测到生物素的存在，表明生物素成功标记在RNA上。图中检测效果仅供参考，不同的实验条件获得的检测效果可能会略有不同。
一个小包装的本试剂盒(R7061S)可以进行20个20μl体系的体外反转录反应；一个中包装的本试剂盒(R7061M)可以进行100个20μl体系的体外反转录反应。本试剂盒提供的试剂用于基于SP6或T7 promoter的RNA生物素标记都是足量的。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R7061S-1 | Nuclease-free Water | 0.5ml |
| R7061S-2 | NTP Labeling Mix (10X) | 40μl |
| R7061S-3 | Transcription Buffer (10X) | 40μl |
| R7061S-4 | SP6 Control Template (0.5µg/µl) | 6μl |
| R7061S-5 | T7 Control Template (0.5µg/µl) | 6μl |
| R7061S-6 | SP6 RNA Polymerase | 40μl |
| R7061S-7 | T7 RNA Polymerase | 40μl |
| R7061S-8 | RNase Inhibitor | 10μl |
| R7061S-9 | DNase I | 40μl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R7061M-1 | Nuclease-free Water | 2ml |
| R7061M-2 | NTP Labeling Mix (10X) | 200μl |
| R7061M-3 | Transcription Buffer (10X) | 200μl |
| R7061M-4 | SP6 Control Template (0.5µg/µl) | 20μl |
| R7061M-5 | T7 Control Template (0.5µg/µl) | 20μl |
| R7061M-6 | SP6 RNA Polymerase | 200μl |
| R7061M-7 | T7 RNA Polymerase | 200μl |
| R7061M-8 | RNase Inhibitor | 50μl |
| R7061M-9 | DNase I | 200μl |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存，至少一年有效。
注意事项：本试剂盒内所有试剂保存在-20℃，并尽量避免反复冻融。
所有试剂使用前请进行快速离心使液体沉降至管底后再开启使用。
需要自备的试剂：预冷无水乙醇、预冷70%乙醇、RNA纯化及其它相关的实验试剂耗材。
由于涉及RNA操作，请严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。
本试剂盒的反应体系通常为20µl，但可根据实际需求按比例放大反应体系。
建议尽量提高转录模板的质量和纯度，以保证生物素标记RNA的产量。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
图3.碧云天Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) (R7061)转录反应示意图。SP6 RNA Polymerase催化的基于SP6 Promoter的RNA转录反应(图A)；T7 RNA Polymerase催化的基于T7 Promoter的RNA转录反应(图B)。| Reagent | Volume | Final Concentration |
| Nuclease-free Water | (13.5-x)μl | - |
| Transcription Buffer (10X) | 2μl | 1X |
| NTP Labeling Mix (10X) | 2μl | 1X |
| Template DNA | xμl | 1μg |
| RNase Inhibitor | 0.5μl | 1U/μl |
| SP6/T7 RNA Polymerase | 2μl | - |
| Total Volume | 20μl | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| A0303 | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 0.2ml |
| A0305-0.2ml | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 0.2ml |
| A0305-1ml | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 1ml |
| A0305-5ml | 辣根过氧化物酶标记Streptavidin | 5ml |
| A0312 | 碱性磷酸酯酶标记Streptavidin | 0.2ml |
| P0202 | DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒 | 共20ml |
| P0203 | DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒 | 共100ml |
| P0209-100ml | TMB显色液(ELISA HRP显色用) | 100ml |
| P0209-500ml | TMB显色液(ELISA HRP显色用) | 500ml |
| P0210-100ml | 增强型TMB显色液(ELISA HRP显色用) | 100ml |
| P0210-500ml | 增强型TMB显色液(ELISA HRP显色用) | 500ml |
| P0018FS | BeyoECL Moon (极超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml |
| P0018FM | BeyoECL Moon (极超敏ECL化学发光试剂盒) | 500ml |
| C3206 | BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒 | 共100ml |
| D2314-1μg | pRNA-SP6-T7 (RNA体外转录质粒) | 1μg |
| D2314-100μg | pRNA-SP6-T7 (RNA体外转录质粒) | 100μg |
| D0033 | PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒 | 50次 |
| D7037S | Klenow Fragment | 100U |
| D7037M | Klenow Fragment | 1000U |
| D7037L | Klenow Fragment | 5000U |
| D7073 | DNase I | 200U |
| D7076 | DNase I | 1000U |
| D7378-250µl | ATP (100mM, Nuclease free) | 250µl |
| D7378-1ml | ATP (100mM, Nuclease free) | 1ml |
| D7378-5ml | ATP (100mM, Nuclease free) | 5ml |
| D7379-250μl | CTP (100mM, Nuclease free) | 250µl |
| D7379-1ml | CTP (100mM, Nuclease free) | 1ml |
| D7379-5ml | CTP (100mM, Nuclease free) | 5ml |
| D7380-250μl | GTP (100mM, Nuclease free) | 250µl |
| D7380-1ml | GTP (100mM, Nuclease free) | 1ml |
| D7380-5ml | GTP (100mM, Nuclease free) | 5ml |
| D7381-250μl | UTP (100mM, Nuclease free) | 250µl |
| D7381-1ml | UTP (100mM, Nuclease free) | 1ml |
| D7381-5ml | UTP (100mM, Nuclease free) | 5ml |
| D7383-1ml | NTP set (100mM each, Nuclease free) | 4×250µl |
| D7385-500μl | NTP Mix (10mM each, Nuclease free) | 500μl |
| D7385-2ml | NTP Mix (10mM each, Nuclease free) | 2ml |
| D7387-250μl | NTP Mix (25mM each, Nuclease free) | 250μl |
| D7387-1ml | NTP Mix (25mM each, Nuclease free) | 1ml |
| D3308 | 化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒 | 1000cm2 |
| D3118 | 生物素随机引物DNA标记试剂盒 | 10次 |
| D0058S | 柱式PAGE胶DNA回收试剂盒 | 50次 |
| D0059S | PAGE胶DNA回收试剂盒 | 50次 |
| R0215-1ml | 2X RNA Loading Buffer | 1ml |
| R0218S | Urea-PAGE凝胶配制试剂盒(RNA专用) | 可制20-30块胶 |
| R0081-1ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 1ml |
| R0081-5ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 5ml |
| R0081-20ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 20ml |
| R0081-100ml | BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) | 100ml |
| R7006 | SP6 RNA Polymerase | 1/5/25/100KU |
| R7009 | T3 RNA Polymerase | 1/5/25/100KU |
| R7012 | T7 RNA Polymerase | 1/5/25/100KU |
| R7013 | T7 RNA Polymerase (High Concentration) | 25/100/500KU |
| R7016 | T7 Quick High Yield RNA Transcription Kit | 25/100次 |
| R7018S | T7 High Yield RNA Transcription Kit | 25次 |
| R7018M | T7 High Yield RNA Transcription Kit | 100次 |
| R7020S | SP6 High Yield RNA Transcription Kit | 25次 |
| R7020M | SP6 High Yield RNA Transcription Kit | 100次 |
| R7061S | Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) | 20次 |
| R7061M | Biotin RNA Labeling Kit (SP6/T7) | 100次 |
| R7063S | Biotin RNA Labeling Kit (T3/T7) | 20次 |
| R7063M | Biotin RNA Labeling Kit (T3/T7) | 100次 |
| R0102-2kU | RNase Inhibitor | 2000U |
| R0102-10kU | RNase Inhibitor | 10000U |
| R0102-50kU | RNase Inhibitor | 50000U |
| R0123 | RNase and DNase Away | 250ml |
| R0125 | RNase, DNase and DNA Away | 250ml |
| R0127 | RNase, DNase, RNA and DNA Away | 250ml |
| ST351 | 3M NaAc, pH5.2 (Sterile, DNase free) | 100ml |
| R0107 | 氧钒核糖核苷复合物(RNase抑制剂) | 2ml |
| R0108 | 氧钒核糖核苷复合物(RNase抑制剂) | 10ml |
| R7070S | E.coli Poly(A) Polymerase | 100U |
| R7070M | E.coli Poly(A) Polymerase | 500U |
| R7070L | E.coli Poly(A) Polymerase | 2.5KU |
| R7070XL | E.coli Poly(A) Polymerase | 10KU |
| R7075S | Poly(A) Polymerase Tailing Kit | 50-250次 |
| R0021 | DEPC水(DNase、RNase free) | 100ml |
| R0022 | DEPC水(DNase、RNase free) | 500ml |
| ST1249-2ml | DEPC (≥97%, Reagent grade) | 2ml |
| ST1249-10ml | DEPC (≥97%, Reagent grade) | 10ml |
| ST876-100ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 100ml |
| ST876-500ml | BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) | 500ml |
| ST041-2ml | 0.5M DTT (DNase, RNase & Protease free) | 2ml |
| ST041-10ml | 0.5M DTT (DNase, RNase & Protease free) | 10ml |
| ST004L | Agarose | 50g |
| ST004M | Agarose (Low EEO) | 50g |
| ST004Q | Agarose (Low EEO) | 250g |
| ST105 | Agarose (Low Melting Point) | 1/5/25/100g |
| ST066 | 0.5M EDTA, pH8.0 | 100ml |
| ST498-100ml | 8M LiCl (DNase/RNase free) | 100ml |
| P0101 | 生物素检测封闭试剂盒 | 200次 |
| FFN13 | 尼龙膜(带正电荷, 进口分装, 15×16.5cm, 0.45μm) | 5张/包装 |
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