常见实验问题
1. M与mol/l的换算关系？
M即mol/l，mM即mmol/l，μM即μmol/l，nM即nmol/l，pM即pmol/l，fM即fmol/l。
1M=103mM=106μM=109nM=1012pM=1015fM
2. 实验操作中常说的室温究竟是多少温度？
生物学实验中的室温通常指20-25℃，而不是实际的室内温度。
3. 离心力(×g)和每分钟转速(rpm)如何换算？
转速有离心力(×g)和每分钟转速(rpm)两种表示方式，有些离心机设置有rpm和xg显示，但普通离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×11.18×10-6×rpm2 (r 为有效离心半径，即从离心机轴心到样品中心位置的长度，单位为厘米)
例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则离心力为=10×11.18×10-6×30002=1006.2(×g)。
4. 冻存试剂或样品可以室温或37℃水浴解冻吗？
冻存试剂或样品的解冻，如果时间比较充裕，建议在冰浴或冰水浴上缓慢解冻。如果时间比较着急，大多数冻存的试剂或样品是可以在室温或37℃水浴解冻，但都必须特别小心，必须边观察、边轻轻晃动、边融解。待部分溶解后即需从水浴中取出，确保溶解过程中试剂或样品还是接近0℃的。如果该试剂或样品在0℃不会结冻，解冻后可以置于冰浴或冰水浴。
5. 微量液体试剂如何量取？
(1)在开启装有微量试剂的离心管之前，宜先适当离心(500-2000rpm离心5秒即可)。这一步很重要，目的是将因运输颠倒而粘于管壁和盖子上的试剂收集至管底以供使用。
(2)微量液体样品宜尽量减少量取次数，以减少不必要的损耗。每多量取一次会损耗0.5-数微升不等的试剂，例如总体积为100μl的试剂，每次量取5μl，通常不太可能量取20次的。
(3)事先计算好样本数量和试剂使用量，一次性量取配制出一定量的工作液后，再分装至各反应管之中。这样可以减少试剂量取的次数。
(4)最好使用经校验的、精密度高、合适量程的微管移液枪及枪头，否则会有超乎想像的误差和损耗。如果是连续量取，每次量取都宜更换枪头，否则会导致第一次吸取后每次的吸取体积明显偏大。
(5)移液枪吸取操作时，宜垂直进入液面数毫米。枪头通常不宜直接插入管底，略低于液面即可，避免试剂过多粘于枪头造成损耗。慢吸，缓慢松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致少量液体倒吸入移液器内部，导致最终打出时的体积减少。
(6)打出液体时枪头贴壁并有一定角度，慢放，即缓慢打出液体。
6. 对于微量粉末试剂如何操作及使用？
(1)在开启装有微量试剂的离心管之前，宜先适当离心(500-2000rpm离心5秒即可)。这一步很重要，目的是将因运输颠倒而粘于管壁和盖子上的试剂收集至管底以供使用。
(2)对于10mg或以下的微量固体样品，通常不建议再使用天平进行称量，而宜直接按照产品标签上标示的量进行溶液的配制。例如5mg的粉末试剂，很多时候很难从离心管中全部取出来的，但可以在该离心管内全部配制成适当的溶液。对于量略多一些的微量粉末样品，也宜尽量减少称量次数，通常建议每次称量的重量不少于10mg。多次微量的称量可能会由于称量误差导致每次的检测结果产生偏差。对于微量的粉末，如果不涉及溶液保存的稳定性方面的问题，通常建议一次性将所有的粉末试剂按标注的剂量配制完毕。
(3)如果需要称量，请注意使用灵敏度较高的分析天平，使用前进行校准。另外，称量时不建议带乳胶手套（可以戴一次性薄膜手套），以防止乳胶手套和称量纸之间产生的静电影响称量的准确性。称量20-30mg或更小重量时，不可以戴乳胶手套。我们测试过的多种乳胶手套(包括某些品牌的进口乳胶手套)，在用乳胶手套接触(摩擦)称量纸后会产生静电，从而会影响称量的准确性，误差可以达到数毫克。而使用聚乙烯材质的薄膜手套，即所谓的PE薄膜手套(类似于保鲜膜材质)，接触称量纸则不会产生静电，此时误差较小。
7. 试剂或试剂盒存放时搞错保存温度，是否会影响其使用效果或是否能继续使用？
对于很多试剂虽然要求低温保存，但这是长期保存的条件，很多时候是完全可以在4℃甚至室温短时间保存的。对于具体的某种试剂或试剂盒是否可以继续使用，请设置标准品或阳性对照进行检测，如果标准品或阳性对照的检测结果正常即可继续使用。
8. 试剂已经变色是否还能用？
不能用。试剂变色通常由于试剂的不稳定引起，变色很多时候表明试剂已经变质。对于需要低温或避光保存的试剂一定要低温或避光保存。
产品选择问题
1. 如果选择凋亡检测试剂盒？
检测凋亡细胞的主要指标与产品：
| 细胞位置 | 凋亡事件 | 碧云天产品名称 | 产品编号 |
| 细胞膜 | 磷脂酰丝氨酸PS暴露膜上受体 | Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 | C1062 |
| Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 | C1063 | ||
| Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒 | C1065 | ||
| Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 | C1067 | ||
| Annexin V5-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 | C1068 | ||
| 细胞质及细胞器 | 线粒体膜电位 | 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1) | C2006 |
| Caspase剪切激活 | Caspase 1活性检测试剂盒 | C1101/C1102 | |
| Caspase-1 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1681 | ||
| Caspase 2活性检测试剂盒 | C1107/C1108 | ||
| Caspase-2 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1123 | ||
| Caspase 3活性检测试剂盒 | C1115/C1116 | ||
| Caspase-3抗体(兔多抗) | AC030 | ||
| Caspase-3(激活型)抗体(兔单抗) | AC033 | ||
| Caspase-3 Rabbit Polyclonal Antibody | AF0081 | ||
| Caspase 3 (active) Rabbit Monoclonal Antibody | AF1150 | ||
| Caspase-3 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1213 | ||
| pro Caspase 3 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1261 | ||
| active+pro Caspase 3 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1675 | ||
| Caspase抑制剂Z-VAD-FMK | C1202 | ||
| Caspase 3抑制剂Ac-DEVD-CHO | C1206 | ||
| Caspase 4活性检测试剂盒 | C1121/C1122 | ||
| Caspase 5 Rabbit Monoclonal Antibody | AF2533 | ||
| Caspase 6活性检测试剂盒 | C1135/C1136 | ||
| Caspase-6 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1927 | ||
| Caspase-6 p18 Rabbit Monoclonal Antibody | AF2416 | ||
| Caspase 8活性检测试剂盒 | C1151/C1152 | ||
| Caspase-8抗体(兔多抗) | AC056 | ||
| Caspase-8 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1243 | ||
| Caspase 9活性检测试剂盒 | C1157/C1158 | ||
| Caspase-9抗体(小鼠单抗) | AC062 | ||
| Caspase-9 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1264 | ||
| 细胞色素C释放 | Cytochrome C抗体 | AC908/AC909/AF2047 | |
| Bcl-2家族蛋白水平变化或激活 | Bax抗体 | AB026/AF0054/AF0057/AF1270 | |
| Bcl-2抗体/phospho-Bcl-2(Ser70)/Bcl-xL抗体 | AB112/AB116/AF0060/AB126 | ||
| Bcl-2抑制剂 | SC0006/SC0011/SC0015 | ||
| Bak抗体 | AB016/AF1591 | ||
| Bad/phospho-Bad(Ser112) | AB008/AF1009/AB009 | ||
| 内质网应激通路激活 | BiP/CHOP/Phospho-PERK(Thr980)/Calnexin/ERp44/IRE1α | AB310/AC532/AP328/AC018/AF2425/ AE850/AE851/AI601 |
|
| 其它凋亡信号通路分子 | AIF/XIAP/PARP/Survivin/p53 | AA306/AF1273/AX356/AF1657/AP102/ AF1567/AF0255/AF1141/AF1162/AF1402/ AF1696/AF1699/AF2674/AP062/AP068 |
|
| 细胞核 | DNA断裂导致3'-OH端暴露 | 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) | C1086 |
| 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) | C1088 | ||
| 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光) | C1089 | ||
| 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光) | C1090 | ||
| TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法) | C1091 | ||
| TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法) | C1098 | ||
| DNA断裂成小片断形成梯带 | 细胞凋亡-DNA Ladder抽提试剂盒 | C0007/C0008 | |
| 出现PI染色的sub-G1峰，即凋亡细胞峰 | 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 | C1052 | |
| 细胞膜的完整性丧失 | 细胞凋亡与坏死检测试剂盒 | C1056 | |
| 细胞核碎裂和致密浓染 | 细胞凋亡－Hoechst染色试剂盒 | C0003 |
2. 如何选择碧云天蛋白提取试剂？
（1） 关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm 选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
（2） 如果需要分离细胞核蛋白与细胞浆蛋白，可以选购P0027或P0028。如果需要分离细胞膜蛋白与细胞浆蛋白，可以选购P0033。
| P0027 | 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 | 50次 |
| P0028 | 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 | 100次 |
| P0033 | 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒 | 100次 |
3. 如何选择碧云天的Western一抗二抗去除液？
关于Western一抗二抗去除液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/stripping-buffer.htm；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。
4. 萤光素酶报告基因质粒选购时，带有TA的质粒和没有TA的质粒有什么区别，如何选择？
通常对于转染效率非常高的细胞，我们建议用没有TA promoter的质粒；对于转染效率比较低的细胞，我们建议使用带有TA promoter的质粒。带有TA promoter的质粒，由于多了一段启动子，本底性的表达就会比较高，在转染效率比较低的情况下也比较容易检测到。而没有TA promoter的质粒，本底性表达相对比较低，如果转染效率比较低，就很可能检测起来有困难。但对于转染效率比较高的细胞，由于没有TA promoter的质粒的本底比较低，有时更容易观察到报告基因的变化或差异。具体选用何种质粒效果更好，还要视具体的实验条件而定。
5. 如何选择碧云天BeyoECL系列产品?
对于容易检测的目的条带，优先推荐使用性价比更高的BeyoECL Star；对于较难检测的目的条带或者条带非常弱的情况，推荐使用BeyoECL Moon。BeyoECL Moon检测时，对于容易检测的蛋白，需要减少上样量或者减少一抗的用量，否则很容易产生条带被过曝的情况。对于丰度特别高的蛋白，例如内参的检测、过表达的标签蛋白、纯化的重组蛋白等的western检测，可以考虑使用检测灵敏度比较低的BeyoECL Plus。
6. 关于线粒体膜电位检测试剂盒的比较和选择
不同线粒体膜电位检测试剂盒的比较和选择可以参考下表：
| 产品编号 | C2001S | C2003S | C2006 | C2008S |
| 产品名称 | 线粒体膜电位检测试剂盒(TMRE) | 增强型线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1) | 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1) | 线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123) |
| 包装 | 100-1000次 | >100次 | >100次 | 100-1000次 |
| 线粒体探针 | TMRE | JC-1 | JC-1 | Rhodamine 123 |
| Ex/Em (nm) | 550/575 | 514/529; 585/590 | 514/529; 585/590 | 507/529 |
| 荧光颜色 | 橘红色 | 绿色/红色 | 绿色/红色 | 黄绿色 |
| 检测精确性 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★ |
| 检测灵敏度 | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★ |
| 探针加载速度 | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★ |
| 探针的水溶性 | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
| 使用广泛度 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★ |
| 使用便捷性 | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ |
7. 关于不同细胞膜荧光探针的比较和选择
不同线粒体膜电位检测试剂盒的比较和选择可以参考下表：
| 产品名称 | DiO (细胞膜绿色荧光探针) | 细胞膜绿色荧光染色试剂盒(DiO) | DiI (细胞膜红色荧光探针) | 细胞膜红色荧光染色试剂盒(DiI) | DiD (细胞膜远红外荧光探针) | 细胞膜远红外荧光染色试剂盒(DiD) |
| 产品编号 | C1038 | C1993 | C1036 | C1991 | C1039 | C1995 |
| 探针简称 | DiO | DiI | DiD | |||
| 其它名称 | DiOC18(3) | DiIC18(3) | DiIC18(5) | |||
| 全称 | 3,3′-Dioctadecyloxacarbocyanine Perchlorate | 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindocarbocyanine Perchlorate | 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindodicarbocyanine, 4-Chlorobenzenesulfonate Salt |
|||
| 激发波长 | 484nm | 549nm | 644nm | |||
| 发射波长 | 501nm | 565nm | 665nm | |||
| 荧光颜色 | 绿色荧光 | 橙红色荧光 | 远红外荧光 | |||
| 染料性质 | 亲脂性膜染料 | |||||
| 分子式 | C53H85ClN2O6 | C59H97ClN2O4 | C67H103ClN2O3S | |||
| 分子量 | 881.72 | 933.88 | 1052.08 | |||
| CAS number | 34215-57-1 | 41085-99-8 | 127274-91-3 | |||
| 溶剂 | 无水乙醇、DMSO (>10mg/ml)和DMF | 无水乙醇、DMSO (>10mg/ml)和DMF | 无水乙醇、DMSO (>5mg/ml)和DMF | |||
| 常用浓度 | 常用浓度为1-30μM，一般情况下使用5-10μM即可。 | 常用浓度为1-25µM，一般情况下使用5-10μM即可。 | 常用浓度为1-30μM，一般情况下使用5-10μM即可。 | |||
| 染色时间 | 5-20分钟 | |||||
| 特点 | 可染色活细胞或固定细胞及组织；不影响细胞生存力；DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI；有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。 | 可染色活细胞或固定细胞及组织；不影响细胞生存力；被标记神经元在体内和体外可长期存活；较DiO荧光更明亮。 | 可染色活细胞或固定细胞及组织；不影响细胞生存力；染色效率高，均一，不易淬灭，无明显细胞毒性，且受自身荧光背景干扰小；波长更长，更适合组织染色；可以兼容免疫荧光实验，特别适合用于进行多种荧光的同时染色。 | |||
| 使用便捷程度 | ★★★ | ★★★★★ | ★★★ | ★★★★★ | ★★★ | ★★★★★ |
8. 关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择
| 产品编号 | 产品名称 | 用途 | 产品特点 |
| D0337 | BL21(DE3)甘油菌(蛋白诱导表达菌株) | 蛋白诱导表达 | 蛋白诱导表达菌株，适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒。 |
| D0339 | BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白诱导表达用) | 低本底蛋白诱导表达 | 低本底蛋白诱导表达用，适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒，特别适合于影响细菌生存和活力的外源毒性蛋白的IPTG诱导表达。 |
| D0341 | BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白高诱导表达用) | 低本底蛋白高诱导表达 | 低本底蛋白高诱导表达用，使异源蛋白的基础表达水平提高，可同时用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。 |
| D0346 | DH10Bac甘油菌(重组Bacmid制备用菌株) | 重组Bacmid制备用 | 重组Bacmid制备用菌株，主要用于制备重组杆状病毒时使用（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统）。 |
| D0351 | DH5α甘油菌 | 质粒扩增和构建 | 实验室最常用于质粒扩增和质粒构建，转化效率高，可用于蓝白斑筛选。 |
| D0353 | TOP10甘油菌(常用克隆菌株) | 质粒快速扩增和构建 | 常用克隆菌株，本菌株生长速度快，转化效率高，常用于构建克隆，可用于蓝白斑筛选 |
| D0355 | EPI400甘油菌(诱导型高拷贝质粒菌株) | 不稳定 DNA 或毒性基因的克隆 | 诱导型高拷贝质粒菌株，本菌株特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 |
| D0357 | EPI300甘油菌(诱导型高拷贝质粒菌株) | 不稳定 DNA 或毒性基因的克隆 | 诱导型高拷贝质粒菌株，本菌株可降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 |
| D0361 | JM110甘油菌(Dam和Dcm甲基化缺陷菌株) | 制备未甲基化质粒 | Dam和Dcm甲基化缺陷菌株，本菌株扩增的质粒可以用于对相应甲基化敏感的内切酶的酶切。 |
| D0371 | Rosetta(DE3)甘油菌(密码子兼容的蛋白诱导表达) | 真核基因无需密码子优化的的原核表达 | 密码子兼容的蛋白诱导表达，适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒，特别适合带有真核基因特异性的稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的IPTG诱导表达，能有效提高真核基因的蛋白表达水平。 |
| D0378 | Stbl3甘油菌 | 慢病毒载体和其它逆转录病毒载体等的扩增和构建 | 重组酶突变菌株，可抑制重复序列的重组，特别适合作为慢病毒(lentivirus)载体和其它逆转录病毒载体等含有重复序列的载体或其它较大并且不太稳定的载体的宿主菌以进行质粒的转化、克隆和扩增。 |
| D0389 | TG1甘油菌 | 质粒超快速扩增和构建 | 生长速度特别快。用于质粒构建时，可以大大缩短构建周期。 |
| D0398 | HMS174 (DE3)甘油菌 | 工业级大规模表达外源蛋白 | 染色体上携带lacUV-T7 RNA聚合酶基因的专门用于蛋白表达的K-12菌株。该菌株适用于pET系列载体，及其它T7启动子系列载体。该菌株能够稳定表达导致DE3噬菌体损失的特定基因，DE3是溶源性的λDE3，带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝，可在IPTG诱导下表达T7 RNA聚合酶。可以用乳糖同时作为唯一碳源和诱导剂，适合工业级大规模表达外源蛋白。 |
| D0399 | HB101甘油菌 | 含长片段末端重复区质粒的扩增和构建 | 可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率。 |
| D8107 | pAdEasy-1/BJ5183 甘油菌(腺病毒重组配套菌) | 腺病毒重组质粒构建用 | 腺病毒重组配套菌，已经转入了腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 (D8106)。 将AdEasy-1/BJ5183制备成感受态细菌，在腺病毒质粒重组时直接转入线性化的携带目的基因的穿梭质粒pShuttle系列质粒等(D8115-D8137)，就可以非常便捷地获得腺病毒重组质粒。 |
| D0392 | GV3101根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用) | 植物转基因用 | 适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。 |
| D0393 | LBA4404根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用) | 植物转基因用 | 适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。 |
| D0394 | EHA101根瘤农杆菌甘油菌(转基因植物构建用) | 植物转基因用 | 适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。 |
| D0395 | Ar.A4发根农杆菌甘油菌(转基因植物构建用) | 植物转基因用 | 适用于烟草、玉米、胡萝卜、甘草等植物的转基因操作。 |
| D0396 | C58C1发根农杆菌甘油菌(转基因植物构建用) | 植物转基因用 | 具有广泛的宿主范围(蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等)。 |
| D0397 | K599发根农杆菌甘油菌(转基因植物构建用) | 植物转基因用 | 含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围(葫芦科，豆科，茄科等)。 |
9. 不同原核表达质粒的比较和选择以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 | 推荐指数 | 特点和用途 |
| D2902 | pET-N-His-C-His | 1μg | +++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导表达N端或C端含有His标签，或者N端和C端都含有His标签的目的蛋白。His标签的位置灵活。 |
| D2905 | pET-N-His-TEV | 1μg | ++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导表达N端含有His标签的目的蛋白，并且该His标签可通过TEV蛋白酶切除。 |
| D2908 | pET-N-His-Thrombin-C-His | 1μg | ++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导表达 N端或C端含有His标签，或者N端和C端都含有His标签的目的蛋白。His标签的位置灵活。其中N端的His标签可通过Thrombin蛋白酶切除。 |
| D2911 | pET-N-GST-Thrombin-C-His | 1μg | ++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导表达N端含有GST标签或C端含有His标签，或者N端含有GST标签同时C端含有His标签的目的蛋白。其中N端的GST标签可通过Thrombin酶切除去。双标签，便于通过两种方法进行纯化。 |
| D2916 | pET-N-GST-PreScission | 1μg | +++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导表达N端含有GST标签的目的蛋白，并且该GST标签可通过PreScission酶切除。切除标签比较方便。 |
| D2931 | pET-Dual-N-GST | 1μg | ++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导共表达两个蛋白形成蛋白复合物，其中第一个克隆区表达N端含有GST标签的蛋白A，第二个克隆区表达没有标签的蛋白B。双蛋白共表达。 |
| D2933 | pET-Dual-N-GST-PreScission | 1μg | +++++ | 用于大肠杆菌IPTG诱导共表达两个蛋白形成蛋白复合物，其中第一个克隆区表达N端含有GST标签的蛋白A，该GST标签可通过PreScission酶切除，第二个克隆区表达没有标签的蛋白B。双蛋白共表达，切除标签比较方便。 |
10. 三种BeyoGel™ PAGE预制胶的比较和选择
| 参数 | BeyoGel™ SDS-PAGE 预制胶(Tris-Gly) | BeyoGel™ Plus PAGE 预制胶(Tris-Gly) | BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Tris-Gly) | BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Bis-Tris) | BeyoGel™ Plus PAGE 预制胶(Hepes) | |
| 综合信息 | 电泳效果 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ |
| 胶板非特异性蛋白吸附指数 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | |
| 操作便捷性 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | |
| 价格指数 | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | |
| 推荐指数 | ★★★ | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | |
| 预制胶基本信息 | 用途 | PAGE和Western检测 | PAGE和Western检测 | PAGE和Western检测 | PAGE和Western检测 | PAGE和Western检测 |
| 胶板材质 | 塑料 | 玻璃 | 塑料 | 塑料 | 玻璃 | |
| 孔数 | 12 | 10/15 | 10/15 | 10/15 | 10/15 | |
| 最大上样量 | 30μl | 60/30μl | 50/30μl | 50/30μl | 60/30μl | |
| 浓缩胶高度 | 0.5厘米 | 1.5厘米 | 1.5厘米 | 1.5厘米 | 1.5厘米 | |
| 凝胶厚度 | 1mm | 1.5mm | 1mm | 1mm | 1.5mm | |
| 胶板尺寸 | 100×92×4.7mm | 98×84×4.1mm | 100×90×4.8mm | 100×90×4.8mm | 98×84×4.1mm | |
| 凝胶尺寸 | 86×70×1mm | 81×74×1.5mm | 84×74×1mm | 84×74×1mm | 81×74×1.5mm | |
| 固定胶浓度 | 6%、8%、10%、12%、15% | 6%、8%、10%、12%、15% | 6%、8%、10%、12%、15% | 8%、10%、12%、15% | 6%、8%、10%、12%、15% | |
| 梯度胶浓度 | 4-12%、4-20%、8-16% | 4-15%、4-20%、8-20% | 4-15%、4-20%、8-16%、8-20% | 4-15%、4-20%、8-16%、8-20% | 4-15%、4-20%、8-20% | |
| Acr:Bis | 29:1 | 29:1 | 29:1 | 29:1 | 29:1 | |
| 胶板底端胶纸 | 有 | 无 | 无 | 无 | 无 | |
| 保质期 | 室温保存一年，4℃保存两年 | 12个月 | 12个月 | 12个月 | 18个月 | |
| 价格 | 203元/10块；892元/50块 | 239元/10块；1058元/50块 | 208元/10块；918元/50块 | 208元/10块；918元/50块 | 296元/10块；1336元/50块 | |
| 缓冲液信息 | 电泳缓冲液系统 | Tris-Glycine | Tris-Glycine | Tris-Glycine | MOPS/MES | Hepes |
| 转膜缓冲液体系 | Tris-Glycine | Tris-Glycine | Tris-Glycine | Bis-Tris | Tris-Glycine | |
| 凝胶缓冲液体系 | 中性pH的Tris-HCl缓冲液 | 略偏碱性pH的Tris-HCl缓冲液 | 近中性pH的Tris-HCl缓冲液 | 近中性pH的Bis-Tris缓冲液 | 中性pH的Hepes缓冲液 | |
| 凝胶中SDS | 不含 | 不含 | 不含 | 不含 | 不含 | |
| 电泳、转膜信息 | 常规电泳条件(条带平整和锐利度一般) | 120-150V，50-80分钟 | 180V电压，40-50分钟 | 180V电压，40-60分钟 | 150V电压，40-60分钟 | 150V电压，40-50分钟 |
| 推荐电泳条件(条带平整和锐利度好) | 先低压80V 20分钟，后高压120V 50-75分钟；或100V 80-100分钟 | 100-150V电压，50-80分钟 | 100-150V电压，50-80分钟 | 100-120V电压，50-80分钟 | 100-120V电压，50-80分钟 | |
| 电泳结束后胶板打开方式 | 小螺丝刀或小撬板别开 | 刀片划开玻璃板之间的粘合胶 | 小螺丝刀或小撬板别开 | 小螺丝刀或小撬板别开 | 刀片划开玻璃板之间的粘合胶 | |
| 转膜条件 | 300-400mA，30-60分钟 | 300-400mA，30-60分钟 | 300-400mA，60-90分钟 | 300-400mA，60-90分钟 | 300-400mA，30-60分钟 | |
| 电泳槽兼容性 | 碧云天、Bio-Rad、天能、六一等胶板宽度在10厘米的电泳槽 | 碧云天、Bio-Rad、天能、六一等胶板宽度在10厘米的电泳槽 | 碧云天、Bio-Rad、天能、六一等胶板宽度在10厘米的电泳槽 | 碧云天、Bio-Rad、天能、六一等胶板宽度在10厘米的电泳槽 | 碧云天、Bio-Rad、天能、六一等胶板宽度在10厘米的电泳槽 | |
| 蛋白质分子量标准兼容性 | 非常好 | 非常好 | 非常好 | 非常好 | 推荐碧云天已经测试过的彩色预染蛋白质分子量标准，其它品牌需测试确定分子量大小 |
11. 碧云天生产的5种反转录酶的比较和选择请参考下表：
| 产品编号 | 反转录酶名称 | 扩增长度 | RNaseH活性 | 高速反转录活性 | 耐热性 | cDNA克隆 | qPCR |
| D7153 | BeyoRT™ M-MuLV反转录酶 | 13kb | 有 | 无，建议反转录60分钟 | 有，耐受42℃-50℃ | ★★★★ | ★★ |
| D7159 D7166 |
BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-) | 13kb | 无 | 无，建议反转录60分钟 | 有， 42-45℃最佳，耐受55℃ | ★★★★ | ★★ |
| D7160 D7168 D7170 |
BeyoRT™II M-MLV反转录酶(RNase H-) | >10kb | 无 | 无，建议反转录60分钟 | 有， 42-45℃最佳，耐受50℃ | ★★★★ | ★★ |
| D7176 D7178 D7180 D7182 D7185 |
BeyoRT™III M-MLV反转录酶(RNase H-) | 12kb | 无 | 有，小于3kb建议反转录10分钟 | 有， 42℃最佳，耐受50-55℃ | ★★★★★ | ★★★ |
| D7188 D7190 |
BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶 | >3kb | 有 | 有，建议反转录5-10分钟 | 无，42℃最佳 | ★★ | ★★★★★ |
1. 如果反转录后的用途是qPCR，最优先推荐选购D7188 BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶。D7188 BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶和其它反转录酶相比，反转录产物用于qPCR时，CT值通常能下降1-2左右，显示BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶特别适合用于qPCR，能获得更好的检测灵敏度，可以使用更少的样品。并且使用BeyoRT™ Q M-MLV反转录酶时，仅需反转录5-10分钟，即可以用于后续的qPCR，可以大幅缩短实验时间。对于待检测的目的RNA的丰度比较高的时候，可以适当优先考虑BeyoRT™III M-MLV反转录酶(RNase H-)，通常仅需反转录10分钟即可用于qPCR，也可以大幅缩短实验时间。
2. 如果希望克隆一个目的基因，最优先推荐BeyoRT™III M-MLV反转录酶(RNase H-)，该酶不仅能反转录长达12kb的RNA，并且具有快速反转录能力，小于3kb的目的基因仅需反转录10分钟，可以大幅缩短实验时间。用于克隆目的基因时，BeyoRT™II M-MLV反转录酶(RNase H-)、BeyoRT™ M-MuLV反转录酶和BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)也是比较好的选择。
12. 碧云天报告基因检测试剂盒系列产品的比较和选择
碧云天生产的不同萤光素酶报告基因检测试剂盒的特点和比较见下表：
| 产品编号 | 产品简称 | 同类产品简称 | 检测对象 | 检测方法 | 使用便捷性 | 检测灵敏度 | 信号强度 | 信号半衰期 | 产品稳定性 | 线性范围(细胞数) | 推荐指数 |
| RG051 | Bright-Lumi | Bright-Glo | 萤火虫萤光素酶 | 一步法直接检测 | 非常便捷 | 特别灵敏 | 特别高 | 0.5-1小时 | 较稳定(冻融10次保留90%，室温3天保留55%) | 50-10万个 | ★★★★★ |
| RG055 | One-Lumi | One-Glo | 萤火虫萤光素酶 | 一步法直接检测 | 非常便捷 | 非常灵敏 | 非常高 | 1-2小时 | 较稳定(冻融10次保留90%，室温3天保留60%) | 50-10万个 | ★★★★ |
| RG058 | Steady-Lumi | Steady-Glo | 萤火虫萤光素酶 | 一步法直接检测 | 非常便捷 | 较灵敏 | 较高 | 5-6小时 | 较稳定(冻融10次保留85%，室温3天保留50%) | 50-20万个 | ★★★★ |
| RG062 | Renilla-Lumi | Renilla-Glo | 海肾萤光素酶 | 一步法直接检测 | 非常便捷 | 较灵敏 | 较高 | 1-2小时 | 非常稳定(冻融10次无影响，室温3天保留80%) | 50-10万个 | ★★★★★ |
| RG066 | Renilla-Lumi Plus | Renilla-Glo | 海肾萤光素酶 | 一步法直接检测 | 非常便捷 | 非常灵敏 | 非常高 | 15分钟 | 特别稳定(冻融10次或室温3天，无显著影响) | 50-10万个 | ★★★★★ |
| RG088 | Dual-Lumi | Dual-Glo | 双萤光素酶 | 一步法直接检测 | 非常便捷 | 非常灵敏 | 非常高 | 1-2小时 | 较稳定(冻融10次保留95%、90%，室温3天保留50%、95%) | 50-10万个 | ★★★★★ |
| RG005 | 萤火虫萤光素酶检测试剂盒 | Luciferase Assay System | 萤火虫萤光素酶 | 两步法收集细胞后检测 | 较便捷 | 非常灵敏 | 非常高 | 约60分钟 | 较稳定 | - | ★★★★ |
| RG016 | 海肾萤光素酶检测试剂盒 | Renilla luciferase assay system | 海肾萤光素酶 | 两步法收集细胞后检测 | 较便捷 | 特别灵敏 | 特别高 | 5-10分钟 | 较稳定 | - | ★★★★ |
| RG027 | 双萤光素酶检测试剂盒 | Dual luciferase reporter assay system | 双萤光素酶 | 两步法收集细胞后检测 | 较便捷 | 特别灵敏(Firefly) 非常灵敏(Renilla) | 特别高(Firefly) 非常高(Renilla) | >1小时(Firefly) 10-20分钟(Renilla) | 较稳定 | - | ★★★★ |
不同报告基因检测试剂盒的选择：
1. 对于96孔板、384孔板中细胞内萤光素酶活性测定或高通量检测时，推荐使用Bright-Lumi (RG051)、One-Lumi (RG055)、Steady-Lumi (RG058)、Renilla-Lumi (RG062)、Renilla-Lumi Plus (RG066)和Dual-Lumi (RG088)这六款一步法直接检测试剂盒。与萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005)、海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG016)和双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027)这三款收集细胞后检测的两步法试剂盒相比，一步法更加简单快捷，细胞可以在同一块多孔板中培养和检测，无需洗涤细胞，无需更换或去除培养液，也无需裂解和收集细胞，只需把试剂盒中对应的萤光素酶检测试剂与培养细胞等体积混合，反应数分钟后即可进行化学发光检测 。两步法检测试剂盒，需要先裂解并收集细胞或组织样品，然后再进行测定。
2. 对于使用培养皿、6孔板等细胞样品比较多的情况下，推荐使用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005)、海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG016)和双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027)这三款两步法检测试剂盒。先使用此类试剂盒配套的报告基因检测裂解液裂解并收集细胞样品，样品的用量可以根据细胞内萤光素酶的表达水平在20-100微升范围内进行适当调整，而且制备的样品如果不能立即检测，也可以先冻存待后续检测。同时，裂解的细胞样品也可以用于Western检测等。裂解后的样品也可以使用Bright-Lumi (RG051)、One-Lumi (RG055)、Steady-Lumi (RG058)、Renilla-Lumi (RG062)、Renilla-Lumi Plus (RG066)和Dual-Lumi (RG088)这六款一步法直接检测试剂盒进行检测的，此时检测试剂的推荐用量为100μl，推荐的样品体积为20μl。
3. 对于一步法萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，如果希望发光信号比较强，并在30分钟内即可进行检测，推荐使用Bright-Lumi；如果对信号稳定性要求特别高，需要批量或连续操作，推荐使用Steady-Lumi；如果对发光信号和稳定性都有要求，推荐使用信号强度和稳定性都比较折中的One-Lumi。对于常规的实验室检测，优先推荐使用Bright-Lumi。
4. 对于一步法海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒，如果样品中萤光素酶活性比较低，希望发光信号比较强，并在10分钟内即可进行检测，推荐使用具有超高灵敏度的Renilla-Lumi Plus；如果对信号稳定性要求比较高，需要批量或连续操作，推荐使用Renilla-Lumi。
13. 碧云天细胞转染试剂系列产品的比较和选择
贴壁细胞转染试剂的比较和选择：
| 产品名称 | Lipofectamine® 2000 |
Lipofectamine® 3000 |
ViaFect™ | Lipo293™ | Lipo6000™ | Lipo8000™ |
| 品牌 | Thermo | Thermo | Promega | Beyotime | Beyotime | Beyotime |
| 产品编号 | 11668500 | L3000150 | E4982 | C0521 | C0526 | C0533 |
| 大包装 | 15ml | 15ml | 2×0.75ml | 5×1.5ml | 5×1.5ml | 5×1.5ml |
| 大包装价格(元) | 45557元 | 58437元 | 5547元 | 998元 | 3256元 | 4198元 |
| 大包装每毫升价格(元) | 3037元 | 3896元 | 3698元 | 133元 | 434元 | 560元 |
| 6孔板每孔费用(元) | 26.6元 | 19.5元 | 22.2元 | 0.67元 | 2.2元 | 2.2元 |
| 每孔推荐用量(μl) | 8.75μl | 5μl | 6μl | 5μl | 5μl | 4μl |
| 质粒用量(μg) | 2.5μg | 2.5μg | 2μg | 2.5μg | 2.5μg | 2.5μg |
| 混合次数 | 2 | 2 | 1 | 2 | 2 | 1 |
| 第一次孵育时间 | 无 | 无 | 无 | 无 | 5min | 无 |
| 第二次孵育时间 | 5min | 10-15min | 5-20min | 15min | 5min | 无 |
| 加入每孔体积 | 250μl | 250μl | 200μl | 250μl | 250μl | 125μl |
| 操作便捷性 | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
| 细胞活性 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
| 耐血清性 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
| 耐抗生素性 | ★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
| 转染效率 | ★★★ | ★★★★★ | ★★★★ | ★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
| 推荐指数 | ★★ | ★★★ | ★★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★★★★ |
说明：Lipo8000™转染试剂的转染效率和Lipo3000基本一致，略优于Viafect和Lipo6000™。Lipo8000™操作最为便捷，首次实现了高效细胞转染试剂和质粒混合后无需任何孵育时间，即可进行转染，真正实现了细胞转染的至简操作！Lipo8000™和Lipo3000类似都比较适合转染一些难转染的细胞，但Lipo8000™的费用仅为Lipo3000的10%左右。特别值得注意的是Lipo8000™的细胞毒性极低，和Lipo3000及Viafect基本一致。Lipo293™的特点是费用仅为Lipo8000™的1/3，特别适合用于贴壁培养的HEK293系列细胞的转染。对于悬浮培养的HEK293系列细胞推荐使用Lipo293F™，对于昆虫细胞的转染则推荐使用LipoInsect™。
产品使用问题
1. 碧云天产品在文章中如何标注？
Beyotime Biotech Inc, Shanghai, China
或者简写为如下任一描述：
Beyotime, Shanghai, China
Beyotime Biotech, Shanghai, China
Beyotime Biotechnology, Shanghai, China
2. 蛋白提取相关常见问题
(1) 碧云天蛋白提取相关产品有哪些？
详见http://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001002002
(2)P0013 Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液等是否还需要加入蛋白酶及磷酸酶抑制剂？
对于这些裂解液是否需要添加适当的蛋白酶和磷酸酶抑制剂的问题，除了两种不含抑制剂的裂解液需要根据特定使用目的酌情考虑外，其余的裂解液在常规操作时，我们推荐添加PMSF(优先推荐更易使用的ST506，其次推荐ST505)，该抑制剂比较廉价但会进一步改善蛋白酶的抑制效果；如果样品非常宝贵希望非常高效地保证裂解样品的质量，推荐添加蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(P1045-P1066)，确保蛋白不被降解蛋白磷酸化水平也能被保留；如果不涉及磷酸化蛋白，可以仅添加蛋白酶抑制剂混合物(P1005-P1031)；从成本角度考虑，如果添加PMSF后蛋白降解的问题能被有效控制，但蛋白磷酸化水平不太稳定，可以考虑同时再添加磷酸酶抑制剂混合物(P1081-P0197)。
(3)PMSF的加入量？
PMSF的终浓度要求是1mM,如果使用碧云天的ST506PMSF(100mM)，需要1：100加入。
(4)细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒是否适用于冻存样品？
最好使用新鲜的样品，冻融过程细胞会损伤，导致核蛋白与胞浆蛋白的相互污染。
(5) 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取核蛋白及浆蛋白的纯度怎么样？
试剂盒或类似试剂盒不可能实现细胞核蛋白和细胞浆蛋白的完全分离，相互之间的污染肯定是会存在的。如果是培养的细胞样品，则分离效果通常会好一些，如果是组织样品，则效果通常会相对差一些。如果是冻存的样品，则效果会很差，因为冻融过程会导致细胞浆蛋白和细胞核蛋白的混合。
如果希望获得更好的分离效果，在抽提细胞浆蛋白时，可以适当减轻剧烈Vortex的程度，并注意Vortex的时间不要过长，后续的离心时间可以长一些。并且特别注意吸取上清时千万不要触及沉淀。可以留一小部分液体不吸。确保吸出的细胞浆蛋白尽量少污染细胞核蛋白。后续抽提细胞核蛋白前，尽量先吸尽残余液体。如果对细胞核蛋白的纯度要求很高，可以加入100-200微升PBS，稍洗涤一下，随后12000-16000g离心5-10分钟，随后吸尽液体。PBS洗涤是为了充分去除残留的细胞浆蛋白。随后按照试剂盒说明书操作即可。核蛋白及浆蛋白的纯度鉴定可以使用相对应的内参蛋白进行Western检测。
(6) 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒、细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒匀浆过程是否可以使用电动匀浆器？
不建议使用电动匀浆器，匀浆的程度较难控制。
3. SDS-PAGE常见问题
(1) 蛋白胶凝固不好，很长时间才凝固？
加大TEMED及过硫酸铵的用量，使胶的凝固速度加快。确保玻璃板洗干净，防止玻璃板上有干胶或残留物附着。
(2) 蛋白胶不凝固？
加大TEMED及过硫酸铵的用量；胶凝固时放置于37℃或强光处；使用新鲜配制的过硫酸铵，过硫酸铵容易放置时间过长极易失效。
(3)胶凝固时间过长或太快？
如果凝胶时间过长，可能是TEMED及过硫酸铵用量偏少。如果凝胶时间太快，可能是TEMED及过硫酸铵用量太多，此时胶会比较硬。
(4)电泳条带呈现笑脸状，即条带中间凹下两边翘起？
电泳系统温度偏高或电泳速度过快。蛋白胶凝固不均匀，中间部分凝固不好。
(5) 电泳条带中间凸起两边向下？
可能是两板间隙底部有气泡
(6) 条带向两边扩散？
加样量过多，电泳速度过慢，或电泳时温度偏高。
(7) 条带拖尾？
样品溶解不完全导致核酸浓度过高或者分离胶浓度过大。
4. ECL发光检测常见问题
(1) 与其他公司生产的ECL相比，灵敏度怎么样？
BeyoECL Plus灵敏度极高，比Amersham公司的ECL或碧云天以前生产的BeyoECL的灵敏度高20-50倍左右，比Pierce公司的SuperSignal West Pico Substrate的灵敏度高3-100倍。
BeyoECL Star灵敏度更高一些，比Amersham公司的ECL或碧云天以前生产的BeyoECL的灵敏度高100-500倍左右，比碧云天生产的BeyoECL Plus的灵敏度高约5-10倍，比原Pierce公司(现Thermo公司)的SuperSignal West Pico Substrate的灵敏度高10倍以上，实际检测效果与Thermo公司的SuperSignal West Dura和SuperSignal West Femto的检测灵敏度相近。BeyoECL Moon检测灵敏度最高，是碧云天最新研发的比BeyoECL Star更加灵敏的化学发光检测试剂。BBeyoECL Moon的检测灵敏度与SuperSignal West Dura相当或略佳。
(2)发光持续的时间？
BeyoECL Star的发光时间更长。在10微升1-10纳克/微升辣根过氧化物酶标记IgG中，加入100微升碧云天的 BeyoECL Star工作液后在不同时间点通过化学发光仪(luminometer)检测化学发光。检测数据显示20分钟后发光无明显减弱， 60分钟后发光强度减弱至初始发光强度的约85%左右，120分钟后发光强度减弱至初始发光强度的约70%左右。
BeyoECL Moon在30分钟内发光强度比BeyoECL Star高4.2-6.9倍，30分钟后发光强度会下降约50%。
(3)如何判断BeyoECL试剂是否失效？
请将A液与B液等比例混合后置于一干净的离心管中，加入1微升HRP标记的二抗原液，混合均匀后可以看到蓝色荧光，如果看不到蓝色荧光说明试剂失效。
(4)胶片出现高背景？
出现高背景主要原因：抗体浓度过高，洗涤不充分、封闭不充分、ECL类试剂过于灵敏、曝光过度；实验操作失误，例如膜干了、膜表面被接触或刮擦。
(5)出现非特异性条带？
出现非预期的条带的主要原因：抗体的非特异性造成的；目的蛋白的修饰或不同剪接、剪切形式；目的蛋白出现降解。
(6)膜与BeyoECL工作液孵育后，出现褐色条带或者条带出现空心？
检测体系中HRP含量过高，底物消耗过快，导致过曝或空心。通常是由于样品中目的蛋白含量非常高、上样量过高、一抗或二抗用量过大、ECL类试剂的检测灵敏度过高等导致。
5. 关于碧云天抗体的常见问题
(1)碧云天抗体为何没有标注具体浓度信息？
不同公司抗体数量的表述方法有所不同。有的公司用抗体浓度来表示，例如毫克每毫升或微克每毫升；也有很多公司用效价表示，例如某种用途的稀释比例为1:1000等。两种表述方法各有特点，前者在重量上有一个比较客观的浓度，后者对于用户使用时比较方便，可以直接知道使用时的稀释比例。碧云天的抗体用效价表示，即使用时的稀释比例表示，不标示具体浓度。按照碧云天推荐的稀释比例进行使用即可。
(2) 抗体稀释后可以-20℃保存吗？
使用碧云天的抗体稀释液，抗体稀释后应该保存于4℃。
(3) 抗体稀释后可以重复使用多少次？
根据我们的检测经验以及一些客户的反馈，按照说明书推荐的抗体使用量通常至少可以重复使用5-10次的。具体可以重复使用的次数和具体的样品有关。如果上样量非常大，并且目的蛋白的表达量非常高，则检测次数可能会有所下降。和膜孵育的一抗的体积很小时，可以重复使用的次数也会下降。
(4)常见的内参蛋白：
| 样品 | 内参 | 内参分子量(kDa) | 碧云天产品名称 | 产品编号 |
| 全细胞或胞浆蛋白 | B型肌动蛋白(β-actin) | 43 | Actin抗体(小鼠单抗) | AA128 |
| β-Actin Mouse Monoclonal Antibody | AF0003 | |||
| A型肌动蛋白(α-actin) | 43 | Actin抗体(smooth muscle specific,小鼠单抗) | AA132 | |
| α-Smooth Muscle Actin Rabbit Polyclonal Antibody | AF0048 | |||
| GAPDH | 30-40 | GAPDH Mouse Monoclonal Antibody | AF0006 | |
| GAPDH Rabbit Monoclonal Antibody | AF1186 | |||
| GAPDH抗体(小鼠单抗) | AG019 | |||
| B型微管蛋白(β-tubulin) | 55 | beta Tubulin Rabbit Monoclonal Antibody | AF1216 | |
| Neuronal Class III β-Tubulin(Tuj1)抗体(小鼠单抗) | AT809 | |||
| A型微管蛋白(α-tubulin) | 55 | α-Tubulin Rabbit Polyclonal Antibody | AF0001 | |
| Tubulin抗体(小鼠单抗) | AT819 | |||
| 线粒体 | COX IV | 17 | COX IV抗体(兔多抗) | AC610 |
| VDAC1/孔蛋白(porin) | 31 | VDAC1 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1027 | |
| 细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase) | 16 | Cytochrome C抗体(小鼠单抗) | AC908 | |
| Cytochrome C抗体(小鼠单抗) | AC909 | |||
| Cytochrome C Rabbit Monoclonal Antibody | AF2047 | |||
| 核蛋白 | 核纤层蛋白B1(lamin B1) | 66 | Lamin B1 Rabbit Monoclonal Antibody | AF1408 |
| PCNA | 29 | PCNA Mouse Monoclonal Antibody | AF0261 | |
| PCNA Rabbit Monoclonal Antibody | AF1363 | |||
| Histone H3 | 17 | Histone H3 Mouse Monoclonal Antibody | AF0009 | |
| Histone H3抗体(兔多抗) | AH433 | |||
| 膜蛋白 | alpha 1 Sodium Potassium ATPase antibody | 100-112 | Sodium Potassium ATPase Rabbit Monoclonal Antibody | AF1864 |
| Cadherin antibody | 130-150 | E-Cadherin Mouse Monoclonal Antibody | AF0138 | |
| N-Cadherin Rabbit Polyclonal Antibody | AF0243 | |||
| E Cadherin Rabbit Monoclonal Antibody | AF1552 | |||
| Pan-Cadherin Rabbit Monoclonal Antibody | AF1846 |
(5)碧云天普通的或QuickBlock系列的Western一抗稀释液及二抗稀释液是否通用？
Western一抗稀释液通常含有可以抑制辣根过氧化物酶(HRP)的防腐剂，不能用于HRP标记二抗的稀释。Western二抗稀释液很多时候是勉强可以用于一抗的稀释的。
(6)碧云天普通的或QuickBlock系列Western一抗稀释液和二抗稀释液是否适用于其他品牌抗体的稀释？
碧云天的普通的或QuickBlock系列Western一抗稀释液和二抗稀释液，在绝大多数情况下对于其他品牌的抗体都是适用的。但建议参考所使用的抗体说明书，以了解一下该抗体的稀释和使用是否有什么特殊的要求，如果没有什么特殊的要求，就可以直接使用碧云天的一抗稀释液了。
6. EMSA检测相关常见问题
(1)使用碧云天的GS009化学发光法试剂盒，还需要准备其他试剂吗？
需自备带正电荷尼龙膜，以及凝胶电泳时所需的相关试剂。带正电荷尼龙膜(FFN12/FFN16)可以向碧云天订购。
核蛋白的提取可以采用碧云天的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0027)。
生物素标记探针，可以向碧云天订购，目前我们有常用的探针例如NF-κB、p53等等(具体探针信息可以查询碧云天官方网站)，另外，可以委托碧云天合成探针。
(2)生物素标记的探针需要5'还是3'标记？
都可以。生物素标记EMSA探针的制备可以使用碧云天的EMSA探针生物素标记试剂盒(GS008)。
(3)对探针的长度的要求？
EMSA检测,通常需要较短的探针，探针长度通常在20-35bp左右，一般不会超过50-60bp。
(4)每个反应蛋白的用量？
蛋白的用量取决于可以结合DNA的活性蛋白的含量。一般情况，需要0.25-10μg蛋白量的细胞裂解液。过多的蛋白量可能导致背景过高或非特异性结合。
(5)试剂盒中试剂是否单独销售？
碧云天试剂盒不拆开销售。如果需要使用更多的封闭液或洗涤液，可另外单独订购GS009B封闭液或GS009W洗涤液(5X)。
(6)做冷竞争反应或突变探针的冷竞争反应，需要订购探针浓度需要1.75μM还是10μM？
如果采用生物素标记探针进行化学发光法检测，需要订购10μM。
如果采用同位素标记探针使用GS002试剂盒检测，两者都可以，但订购探针浓度为1.75μM的使用起来更加方便一些。
(7)碧云天在售的探针是否有物种特异性？
碧云天的探针是针对多数文献中发表的concensus probe设计的。可以用于哺乳动物的检测。
7. 报告基因检测相关常见问题
(1)报告基因质粒是否有种属特异性？
如何没有特殊说明，碧云天的报告基因质粒均适用于哺乳动物细胞样品。
(2)Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
(3)碧云天ATP检测试剂盒及报告基因检测试剂盒是否可以使用酶标仪检测？可以使用透明的96孔板进行检测吗？
ATP的检测及报告基因检测试剂盒需使用化学发光仪(luminometer)，也可以使用带有检测化学发光功能的一些荧光（萤光）酶标仪。不能使用全波长分光光度计、荧光分光光度计、酶标仪或常规的荧光(萤光)酶标仪进行检测。测定化学发光和测定吸光度或荧光在原理上有所不同，所使用的仪器也有所不同。ATP检测试剂盒需要测定化学发光，最好使用白板进行检测。
8. 活性氧检测相关常见问题
(1)S0033活性氧检测试剂盒的适用范围？
本试剂盒适用于活细胞及活组织的检测，这里组织样品是指组织的原代培养细胞。不适合用于组织裂解液的检测。对于组织样品的活性氧检测，通常可以测定过氧化氢、过氧化氢酶、SOD、脂质过氧化物(MDA)、抗氧化能力、GSH和GSSG、以及一些氧化相关的酶等。
(2)碧云天活性氧检测相关试剂盒请参考以下链接：
http://www.beyotime.com/goods.do?method=lcode&lcode=001008004
产品质量问题
1. 如何处理疑似质量问题？
请详细填写碧云天技术咨询表格，提供详细的实验操作步骤及结果，并进行适当的标注。发送邮件到info@beyotime.com。
2. 运输过程中，产品包装出现破损，如漏液怎么办？
请提供产品破损的图片，并联系碧云天(4001683301或order@beyotime.com)办理相关补发事宜。
3. 如果遇到试剂剂量不足怎么办？
请告知您的具体订货时间和订货人我们会给予核对。通常试剂体积会存在一定的误差，但误差不会很大的。如果发现重量或体积不足的情况，建议先快速离心一下，大多数情况下是因为有粉末或液滴在运输过程中沾在盖子或管壁上。如果确实存在试剂量不足的问题，我们会给予妥善处理的。
4. 收到试剂盒时冰袋已完全融化，是否会影响试剂盒使用效果？
很多试剂或试剂盒虽然要求-20℃保存，但这是长期保存的条件。对于很多需要-20℃保存的试剂或试剂盒，是完全可以在4℃甚至室温短时间保存的。碧云天使用冰袋或干冰运输的试剂或试剂盒都经过模拟运输条件的测试，确保在其运输条件不会影响其使用效果和保存期限。请放心使用！